液相色譜法測定植物源性食品中滅蠅胺

楊飛帆，趙舒景

（上海市崇明食品藥品檢驗所 崇明食品安全檢測中心，上海 202150）

滅蠅胺又名環丙氨嗪，可以誘使雙翅目幼蟲和蛹在形態上發生畸變，成蟲羽化不全或受抑制。其可用于控制動物廄舍內的蒼蠅以及防治黃瓜、茄子、四季豆、葉菜類和花卉上的美洲斑潛蠅等農業害蟲，是一種高效低毒殺蟲劑[1]。

根據2021版國家食品安全監督抽檢實施細則中的要求，對芹菜、豇豆、菜豆3類蔬菜有滅蠅胺項目的檢測要求。隨著檢測技術的日益發展，植物源性食品中滅蠅胺的檢測方法主要有高效液相色譜法[2-3]、液相色譜質譜聯用法[4-5]和量子點熒光探針法[6]。根據《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2019）[7]的規定，蔬菜水果中的滅蠅胺均使用《蔬菜中滅蠅胺殘留量的測定 高效液相色譜法》（NY/T 1725—2009）[8]（以下簡稱標準方法）進行檢測，該方法樣品經提取濃縮，經SCX柱凈化，以達到檢測的效果，存在前處理復雜、有機溶劑使用量大等缺點。目前植物源性食品中農藥殘留的檢測的前處理方法有固相萃取[9]、QuECHERS[10]和GPC-GCMS[11]等。本研究是在標準方法的基礎上，通過不斷改進前處理步驟、減少有機溶劑的使用量、優化檢測條件等，達到滅蠅胺檢測的目的。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

基質：豇豆（來源為市售產品，經檢測后為滅蠅胺陰性樣品）。

試劑：乙腈；乙酸銨；甲醇（色譜純）；滅蠅胺標準溶液（100 μg/mL），農業部環境保護科研監測所。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜Agilent 1260，配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器；電子天平梅特勒-托利多，精度0.01 g；高速勻漿機T18；高速離心機；渦旋儀；移液槍；旋轉蒸發儀；氮吹儀；50 mL離心管； 150 mL梨行瓶；各類一次性用品（滴管、貯液器、 0.45 μm有機濾膜、2 mL注射管等）。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液配制

滅蠅胺標準工作使用液的配制：吸取100 μL滅蠅胺標準溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，得濃度為1 μg/mL標準工作使用液。

1.3.2 線性分析

準確吸取滅蠅胺標準工作使用液，用乙腈配制 成0 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、 200 ng/mL、400 ng/mL和800 ng/mL的標準系列溶液，注入HPLC，得到色譜圖，以保留時間定性。以標準系列溶液中目標物的濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

1.3.3 樣品前處理

（1）提取與濃縮。準確稱取勻漿試樣10 g于50 mL 離心管中，加入10 mL乙酸銨-乙腈溶液，高速勻漿2 min，取20 mL乙酸銨-乙腈溶液清洗均質刀頭，洗液并入50 mL離心管中，用渦旋儀渦旋混勻1 min，用乙酸銨-乙腈溶液定容至50 mL。經低溫高速離心機4500 r/min離心5 min，得到固液分離的狀態。

用移液槍準確吸取10 mL上清提取液至150 mL梨形瓶中，在旋轉蒸發儀上濃縮至只含水溶液的狀態（冷凝裝置無液滴滴下），水浴溫度為40 ℃。取下后加入2 mL鹽酸溶液，待凈化。

（2）凈化。依次用5 mL甲醇、水淋洗活化強陽離子交換萃取柱（SCX），當液面到達柱吸附層表面時，立即將帶凈化的溶液轉移至SCX柱中，再用 5 mL鹽酸溶液分兩次清洗150 mL梨形瓶中殘留物，并全部轉至SCX柱中。然后依次用5 mL水、甲醇淋洗SCX柱，棄去所有流出液并將SCX柱抽干。將SCX柱置于另一潔凈的150 mL梨形瓶上，SCX柱上加貯液器，加入15 mL氨水-甲醇溶液進行洗脫。收集洗脫液，并在旋轉蒸發儀上，水浴溫度 40 ℃，濃縮至近干，氮吹儀吹干，最后用2 mL乙腈-水溶液復溶，過0.45 μm有機微孔濾膜，上液相色譜 檢測。

1.3.4 液相色譜檢測條件

色譜柱：NH2柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動 相：乙腈-水溶液（98+2）；流速：1.0 mL/min；進樣體積：30 μL；檢測波長：215 nm；柱溫：35 ℃。

2 結果與分析

2.1 目標物提取方式的選擇

農藥殘留目標物的提取前處理有很多種方式，可選擇直接渦旋混勻、超聲提取、振蕩提取以及均質提取等方式。本法選擇均質提取的方式，通過使用陽性樣品對比實驗數據顯示，均質提取法樣品提取更完全。

2.2 樣品定容方式的選擇

標準方法中是稱取20 g樣品，使用100 mL的比色管定容，并采用布氏漏斗過濾的方式獲得提取液。方法存在樣品量大、提取溶劑用量大和固液分離方法煩瑣等缺點。本法采用的是稱取10 g樣品，用 50 mL離心管定容，采用離心機進行固液分離，減少了樣品和提取溶劑的用量，簡化了分離方法，提高了分離效率。

2.3 色譜柱的選擇

色譜檢測過程中，一般有兩類色譜柱可進行選擇，即正相色譜柱和反相色譜柱。流動相極性大于色譜柱的為反相色譜，最常見的為C18柱，常用于分離極性化合物。反之為正相色譜，常用于分離弱極性的化合物，滅蠅胺為弱極性化合物，所以選擇正相色譜柱NH2柱進行檢測。

2.4 流動相的選擇

反相色譜柱的使用與正相色譜柱相反，水相比例不宜太大，否則會影響分離效果。標準方法中推薦使用乙腈-水（97+3），實際實驗過程中發現，當以豇豆為基質時，存在雜峰與目標峰的分離度達不到檢測要求，影響檢測效果。通過增加有機相比例，調整乙腈-水（98+2），結果顯示分離度完全能達到實驗要求，分離效果優于原比例。同時，乙腈-水（98+2）溶液需要提前配制，若將水溶液和乙腈溶液按照2∶98的比例在線混合，會出現因水相占比太低，產生混合不均勻的情況，從而導致目標物的出峰時間存在一定的漂移，影響結果的判定。豇豆中滅蠅胺色譜圖見圖1。

圖1 豇豆中滅蠅胺色譜圖

2.5 進樣體積的選擇

實驗發現，當進樣量為10 μL時，檢出限濃度的響應極小，再加上基質的干擾，很難達到準確檢測的目的。通過增加進樣量至30 μL，可以使信噪比完全達到實驗要求。

2.6 線性相關性

當滅蠅胺濃度為0～800 ng/mL，具有良好的相關性，線性相關系數r＞0.9999，線性回歸方程為y=345.73713x-0.291771。

2.7 回收率和精密度

通過豇豆樣品加標回收來考察方法的準確度，通過同水平加標的6個平行樣品間的相對標準偏差（RSD）來考察方法的精密度。稱取18份豇豆樣品進行3水平（檢出限0.02 mg/kg、方法定量限0.06 mg/kg、最高限量0.5 mg/kg）加標測定。通過標準系列方程讀取測定濃度結果，計算樣品本底值、加標回收率以及相對標準偏差。回收率和精密度結果見表1。

由表1可知，滅蠅胺加標回收率為75.0%～ 112.0%，相對標準偏差均小于20%，其回收率和精密度均符合檢測要求，說明本方法具有良好的準確度和穩定性。

表1 加標回收率和精密度結果（n=6）

3 結論

本研究在標準方法的基礎上，對豇豆中滅蠅胺殘留檢測的前處理方法進行優化，使操作更加簡單、高效，減少樣品和提取溶劑的用量。滅蠅胺在濃度0～800 ng/mL，均具有良好的相關性，且其回收率、精密度等均可達到項目檢測要求，對其他植物源性食品中滅蠅胺的檢測也有一定的參考 價值。