保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量測(cè)定

汪 安，朱志祥，程桂林，程 倩，蘇 敏

(池州市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，安徽 池州 247000)

保濟(jì)丸由鉤藤、菊花、蒺藜、厚樸、木香、蒼術(shù)、天花粉、廣藿香、葛根、化橘紅、白芷、薏苡仁、稻芽、薄荷、茯苓、廣東神曲 16 味中藥材配伍組合而成，具有解表、祛濕、和中的功效，主要用于暑濕感冒引起的發(fā)熱頭痛、腹痛腹瀉、惡心惡吐、腸胃不適等[1-2]，也可以用于暈車暈船等。研究發(fā)現(xiàn)，保濟(jì)丸具有抗菌、解熱、止瀉。鎮(zhèn)痛等藥理作用。《中國藥典》2020年版一部收載的保濟(jì)丸以厚樸酚、和厚樸酚作為其含量檢測(cè)指標(biāo)[3], 因此我們選定了保濟(jì)丸中的厚樸酚、和厚樸酚作為指標(biāo)性成分，參考《中國藥典》及文獻(xiàn)[4-8]，采用高效液相色譜法測(cè)定保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量，以有效控制其內(nèi)在質(zhì)量，能夠?yàn)楸?jì)丸質(zhì)量控制提供方法，保障用藥安全。

1 儀器和試藥

1.1 儀 器

Waters E2695型高效液相色譜儀，美國 Waters；XP205電子天平，梅特勒-托利斯儀器上海有限公司；Elma PH180H超聲波清洗器，德國Elma公司。

1.2 藥品與試劑

厚樸酚(批號(hào)：110729-200412，純度：100%)，中檢院；和厚樸酚(批號(hào)：110730-201112，純度：99.8%)，中檢院；乙腈SIGMA 公司；冰醋酸(分析純)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；甲醇試劑(分析純)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超純水；0.45 μm微孔濾膜，上海興亞凈化材料廠；保濟(jì)丸廠家與批號(hào)信息見表1所示。

表1 保濟(jì)丸廠家與批號(hào)信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱： SHIMADZU C18色譜柱(150 mm×4.6 mm， 5 μm)；流動(dòng)相： 乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4); 流速： 1.0 mL/min; 柱溫： 30 ℃; 檢測(cè)波長(zhǎng)： 294 nm; 進(jìn)樣量： 10 μL，以進(jìn)行保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚含量的檢測(cè)分析。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精確稱量厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品13.70 mg、12.72 mg，放置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用 0. 45 μm 的微孔濾膜進(jìn)行過濾，得到濃度為 0.1370 mg/mL 和0.1272 mg/mL的對(duì)照品溶液。在該色譜條件下，對(duì)照品峰型良好，見圖1所示。

2.3 供試品溶液的制備

保濟(jì)丸，稱定重量，研細(xì)，精密稱取1 g，放置于具塞錐形瓶中，用石油醚(30～60 ℃)作溶劑，超聲處理2次(100 mL、 50 mL)，每次30 min。提取液濾過，濾液合并，揮干，殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。在該色譜條件下，樣品分離度較好，見圖1所示。

圖1 厚樸酚(A)、和厚樸酚(B)和樣品

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

分別精密量取“2.2”項(xiàng)下厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品貯備液2、4、10、12、16、20 mL分別置于100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，配制成濃度依次遞增的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行分析，測(cè)定對(duì)照品的峰面積，記錄色譜圖，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)繪制線性方程，計(jì)算得線性方程：以峰面積(Y)對(duì)溶液濃度(X)進(jìn)行線性回歸分析。得厚樸酚、和厚樸酚回歸方程分別為：y=19025x+488912(r=0.9993)、y=2254.1x-6418(r=0.9992)。結(jié)果表明厚樸酚、和厚樸酚在27.4～274μg·mL-1、25.44～254.4 μg·mL-1內(nèi)線性關(guān)系良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明對(duì)照品峰面積與濃度有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下制得的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果厚樸酚、和厚樸酚的RSD分別為1.25%、1.36%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取“2.3”項(xiàng)下供試品溶液，分別于放置0、2、4、8、10、12、24 h后，注入高效液相色譜儀按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。測(cè)定結(jié)果顯示厚樸酚、和厚樸酚色譜峰平均峰面積分別為1912787.204和2044268.887，RSD分別為 1.24%、1.03%，表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)藥材，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并計(jì)算厚樸酚、和厚樸酚含量及平均值。結(jié)果厚樸酚、和厚樸酚的平均含量分別為0.7 mg/g、0.5 mg/g，RSD分別為0.3%、0.4%，結(jié)果表明本法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品(厚樸酚含量：0.73 mg/g，和厚樸酚含量：0.56 mg/g)6份，樣品按“2.3”項(xiàng)下操作制備供試品溶液，分別加入一定量的厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品溶液，均勻混合，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣并測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果表明厚樸酚、和厚樸酚的平均回收率為97.5%、96.6%，RSD為0.53%和0.77%，如表2、表3所示。表明該方法加樣回收率結(jié)果良好。

表2 厚樸酚加樣回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表3 和厚樸酚加樣回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.9 樣品含量測(cè)定

照“2.3”項(xiàng)制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液 10 μL，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品中厚樸酚、和厚樸酚含量，見表4。結(jié)果表明廣州省羅浮山白鶴制藥廠(2112005)生產(chǎn)的保濟(jì)丸中厚樸酚含量較高而廣州王老吉藥業(yè)(2110012)生產(chǎn)的保濟(jì)丸中和厚樸酚含量較高。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討 論

(1)檢測(cè)波長(zhǎng)得選擇。參考《中國藥典》2020版一部保濟(jì)丸項(xiàng)下規(guī)定，檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm，并根據(jù)文獻(xiàn)選擇了278 nm和 225 nm兩種波長(zhǎng)進(jìn)行比較，利用二極管陣列檢測(cè)器，預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)厚樸酚、和厚樸酚在294 nm處有最大吸收，在上述色譜條件下，在294 nm處所得的HPLC圖譜峰型較好，有利于分析。故在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選擇294 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

(2)流動(dòng)相的選擇。參考《中國藥典》2020版一部保濟(jì)丸項(xiàng)下選擇乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動(dòng)相，并同時(shí)采用了了水-乙腈梯度洗脫以及甲醇-水(78∶22)兩種方法的流動(dòng)相，預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動(dòng)相響應(yīng)值良好，峰形佳，理論板數(shù)和分離度、基線等均符合要求，且效果優(yōu)于水-乙腈梯度洗脫以及甲醇-水(78∶22)這兩種流動(dòng)相，故在實(shí)驗(yàn)中選擇了乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動(dòng)相。

(3)提取方法的選擇。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中采取了加熱回流提取和超聲提取兩種提取方法對(duì)保濟(jì)丸進(jìn)行提取，結(jié)果表明超聲提取和加熱回流提取兩種方式效率相當(dāng)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作效率以及安全簡(jiǎn)便的原則，故在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選擇了超聲提取作為保濟(jì)丸的提取方法。

4 結(jié) 論

通過上述實(shí)驗(yàn)方法，選定了市面上3個(gè)廠家5個(gè)批號(hào)的保濟(jì)丸作為供試品，對(duì)其厚樸酚、和厚樸酚含量進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果顯示選定的不同廠家及不同批號(hào)的保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚含量范圍分別為0.3～1.7 mg、0.2～0.6 mg，含量差異較大，部分批號(hào)的保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚含量較低。造成保濟(jì)丸含量差異較大的原因可能與各個(gè)廠家具有不同的生產(chǎn)工藝流程，且不同批號(hào)間的藥材來源與質(zhì)量等方面存在差異。由此可見，加強(qiáng)對(duì)市面上保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量檢測(cè)，有利于保障保濟(jì)丸的產(chǎn)品質(zhì)量控制，確保其發(fā)揮更好的藥效作用。

保濟(jì)丸的藥品標(biāo)準(zhǔn)收載于中國藥典2020版一部，但保濟(jì)丸中所含藥材成分較多，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定規(guī)定較少，缺乏專屬性。目前，提高保濟(jì)丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加專屬性成分的檢測(cè)，是控制其質(zhì)量的有效途徑。另外，中成藥質(zhì)量的源頭，原料藥材質(zhì)量的控制更需有關(guān)部門進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，生產(chǎn)企業(yè)用質(zhì)量合格的原料藥材，嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)投料和生產(chǎn)，更是保證藥品質(zhì)量的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相法，通過乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動(dòng)相，檢測(cè)保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量，該方法線性良好，精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性及回收率均符合要求，可作為保濟(jì)丸中質(zhì)量控制指標(biāo)之一。