岳陽地區1 340例遺傳咨詢者外周血核型分析研究

蔣華科，龔燕飛，向陽海，陳靜怡，陳 靜，徐錦波

(岳陽市中心醫院醫學檢驗中心，湖南 岳陽 414000)

出生缺陷、不良孕產史、不孕不育是重大公共衛生問題，其中遺傳性因素是造成上述問題的主要原因之一，染色體異常是其中重要的遺傳因素。染色體異常是導致習慣性流產、原發性不孕不育、死胎、死產、胎兒畸形的病因之一。為了解岳陽地區遺傳咨詢患者染色體異常類型和多態發生率，指導該地區輔助生殖診療和提高優生優育率，本文回顧性分析了2019-2021年1 340例遺傳咨詢患者外周血染色體核型，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019-2021年岳陽市某醫院1 340例遺傳咨詢患者，其中女658例，男682例，年齡16～51歲。納入標準：原發性不孕不育、復發性流產、性腺發育異常、原發性閉經、繼發性閉經、無精癥等生殖遺傳問題；均來自湖南岳陽地區。

1.2方法 抽取患者外周血，用肝素抗凝，在無菌操作下接種(男0.4 mL，女0.42 mL)于5 mL外周血培養基中，37 ℃培養68～70 h，加秋水仙素(0.02%～0.04%)，繼續培養2 h，0.075 mol/L氯化鉀低滲液處理細胞30 min，用甲醇、冰醋酸混合液(甲醇∶冰醋酸為3∶1)固定細胞2次，取懸液滴干片，75 ℃烤片8 h，顯帶前再烤片1～2 h，胰酶(0.02%)消化顯帶，Giemsa染色。采用蔡司全自動核型分析系統進行核型分析，計數20個分裂中期細胞，分析5個核型。若遇異常，計數分析100個細胞，≥3%即可報告。核型描述按照人類細胞遺傳學國際命名體系2016年版進行描述。染色體多態判讀：1號、9號、16號染色體異染色質片段長度大于16號染色體次縊痕長度，且為正常的同源染色體的異染色質長度2倍以上時，判讀為1q+/9qh+/16qh+；Y染色體長度大于或等于18號染色體時判讀為Yqh+；Y染色體長度小于或等于21號染色體時判讀為Yqh-。

外周血細胞培養基、40 μg/mL的秋水仙堿購自廣州白云山拜迪生物公司，甲醇、冰醋酸和氯化鉀購自國藥集團化學試劑有限公司(純度為分析純)。DHP-9256B型電熱恒溫培養箱、DHG-9250型鼓風干燥箱購自濟南鑫貝西公司，HH-60型數顯恒溫攪拌循環水箱購自常州國華電器公司，SC-3612型低速離心機購自安徽中科中佳公司，Synergy UV型超純水儀購自美國Millpore公司，FA1204B型電子天平購自上海天美公司，染色體核型分析為蔡司全自動核型分析系統(顯微鏡型號Imager.Z2)。

1.3統計學處理 采用SPSS19.0軟件進行統計分析，計數資料以率或百分率表示。

2 結 果

2.1異常核型檢測結果 1 340例患者中，異常核型檢出率為2.54%(34/1 340),其中男性占2.05%(14/682)，女性占3.04%(20/658)。性染色體異常21例,占異常核型的61.76%(21/34)，包括克氏綜合征7例、特納綜合征8例、超磁綜合征3例，性染色體結構異常7例；常染色體異常11例，占異常核型的32.35%(11/34)，包括數目異常1例，平衡易位7例，倒位2例，染色體重復1例，見表1。同時檢出46,XY性反轉1例，標記染色體(47,XY，+mar)1例。

表1 異常核型檢測結果

續表1 異常核型檢測結果

2.2染色體多態性變異結果 1 340例患者中，共檢出染色體多態性變異201例，多態率為15.0%(201/1 340)，其中男性占75.62%(152/201)，女性占24.38%(49/201)。染色體多態變異以Y染色體長臂異染色質區和D/G組染色體隨體區變異檢出率最高。見表2。

表2 染色體多態性變異結果(n)

3 討 論

本研究結果顯示，異常染色體檢出率為2.54%，與何思等[1]報道的2.9%基本一致，并且與本地省級婦幼保健院統計的染色體異常檢出率也基本一致。本研究結果顯示，21例性染色體數目異常患者臨床表型為不孕不育癥、原發閉經、無精或弱精癥、身材矮小等性染色體異常[2]。47,XXY克氏綜合征是男性不育中最常見的性染色體疾病，其男性群體發病率為1/1 000[3]。克氏綜合征患者青春期前癥狀并不明顯，進入第二青春期后，常以無精或弱精癥及性激素異常、卵泡刺激素和促黃體生成素水平升高、睪酮水平降低就診[4]。本研究中的1例克氏綜合征患者同時合并2型糖尿病。44%的克氏綜合征患者可表現為腹部肥胖和普遍代謝綜合征[5]。

特納綜合征是較常見的性染色體疾病，占女性新生兒的1/5 000,主要的表型為身材矮小、后發際線低、頸蹼、胸平而寬、乳頭間距增寬及原發閉經、性腺發育不良等異常，以及可能存在軀體異常如心臟畸形、腎臟異常等[6]。特納綜合征的染色體核型有45,X單體型、嵌合體型、等臂X型、X缺失型、末端重排、假雙著絲粒型、環狀X型及含Y染色體型。本研究中有8例特納綜合征患者，其中單體型3例、嵌合型1例、X缺失型3例、等臂型1例,單體型占37.5%,與SAENGER等[7]報道的45,X占30%～55%基本一致。本研究中有1例46,X,dup(X)(q21)患者，X長臂q21至長臂末端區域重復，比健康人群多1個拷貝。該患者臨床表現為原發閉經，其他的體格檢查未見明顯異常。一般認為X短臂與身材矮小等有關，X長臂與卵巢發育不全等有關。特納綜合征患者絕大部分都是X單體型、X等臂型，或長臂、短臂缺失的部分單體型，僅長臂部分重復的較少見。有研究報道過1例45X/46,X,dup(X)(q12-22)嵌合型特納綜合征，該患者僅有原發性閉經無其他特納綜合征典型體征，其原因與X染色體短臂正常、長臂部分區域重復有關[8-10]。

本研究結果顯示，2例患者為X染色體重排，其中臂間倒位46,XX,inv(X)(p11.2q22)核型患者表現為習慣性流產，臂內倒位46,XX,inv(X)(q21q23)核型患者表現為繼發性不孕。X染色體倒位與常染色體倒位一樣，在同源染色體配對時形成了倒位環，理論上形成4種配子，一種正常核型，一種攜帶者核型，2種異常核型配子[11-12]。本研究中，1例46,XY,患者生物學性別為男性，社會性別為女性，具有女性生殖系統。腹股溝探查雙側有隱睪，家族中有2例同樣癥狀患者，經臨床多學科會診初步診斷為性發育異常，可能的遺傳病因為雄激素不敏感綜合征，雄激素受體基因AR突變導致雄激素受體的正常生物學效應消失，引起男性假兩性畸形。雄激素不敏感綜合征臨床診斷需要與雄激素合成缺陷，如17α-羥化酶缺乏、5α-還原酶缺乏等，以及性腺睪丸發育異常等進行鑒別[13]。該患者的明確診斷需要進行家系研究及完善相關遺傳基因檢測。

本研究結果顯示，染色體異常攜帶者共9例，分別為平衡易位6例，羅氏易位1例，倒位2例。染色體攜帶者因為沒有遺傳物質的丟失,一般沒有臨床表型，但可以引起反復流產、不孕不育。在不孕不育和流產夫婦中，染色體異常攜帶者占3%～6%[14]。對于有不良孕產史、反復流產、不孕不育、新生兒畸形或死亡史的夫婦，應建議行夫妻外周血染色體檢查，警惕雙親之一可能是染色體異常攜帶者，對于夫妻之一為染色體異常攜帶者，下次妊娠須進行產前診斷。本研究還發現1例標記染色體患者，因繼發性不育就診。有研究指出，標記染色體的出現率在性發育不全中占2.93‰，其中70%為新發，30%為遺傳，76%的家族性病例沒有臨床癥狀，而75%的新發病例可能表型異常[15-16]。本研究研究顯示，多態性變異核型檢出率為4.3%。傳統觀點認為，染色體多態是異染色質的變異。由于異染色質區域不含有結構基因及沒有轉錄活性，屬于正常變異現象，不引起表型的異常變化，不具有臨床意義。近年來，越來越多的學者提出，染色體多態性對生殖和妊娠有著不可忽視的影響,可導致胚胎發育異常，其原因可能是異染色質中高度重復的DNA在減數分裂過程中出現異常重組，進而影響基因調節和細胞分化[17-18]。染色體多態與多核胚胎形成獨立相關，提示可能會對胚胎發育過程產生影響[19]。在不孕不育人群中，染色體多態檢出率高于染色體正常的生育人群[20-21]。染色體多態性可能導致一定的臨床效應,如不孕不育和自然流產[22]。但目前認為，染色體多態性不影響輔助生殖體外受精/卵泡漿內單精子注射助孕患者的臨床結局[23]。

綜上所述，染色體異常是導致不孕不育等生育問題的重要原因之一，臨床上對生殖遺傳咨詢患者進行外周血染色體檢查，可為臨床診斷與輔助生殖技術提供依據。采用輔助生殖技術結合產前篩查與診斷技術，可提高生育率，降低異常胎兒出生率，達到提高生育質量、優生優育的目的。