BCL-2 在非肌層浸潤性膀胱癌組織中的表達

楊晶

膀胱癌是發生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，是十大常見惡性腫瘤之一，發病率居全球惡性腫瘤第11 位，好發于男性。盡管通過醫療干預及不良生活習慣糾正后，膀胱癌的發生率及致死率顯著降低，但膀胱癌術后的復發率極高[1]。非肌層浸潤性（表淺性）膀胱癌（NMIBC）在膀胱癌中比較常見，主要依賴膀胱鏡檢查和活檢確診。腫瘤的侵襲和轉移是NMIBC的首要致死因素，而長期膀胱鏡檢查會造成患者膀胱負荷，且花費高昂，因此尋求高效、靈敏的預測指標判斷病情及預后，對于臨床有重要的意義[2]。B淋巴細胞瘤-2（BCL-2）可以通過改變線粒體外膜通透性調控細胞凋亡，其在卵巢癌、胃癌等惡性腫瘤中異常表達[3-4]。本研究采用免疫組化法檢測BCL-2 在NMIBC 癌組織及癌旁正常組織中的表達，分析其表達與臨床病理、預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2012 年6月至2015 年6 月期間行病理檢測的NMIBC 患者55 例，其中男44 例，女11例；年齡39～78 歲，平均（59.2±7.5）歲；腫瘤大小：≥3 cm 14 例，＜3 cm 41 例；腫瘤數量：單個腫瘤36例，多腫瘤19例；有淋巴結轉移18 例，無轉移37 例；腫瘤分級：G1 級4 例，G2 級35 例，G3 級16例。取癌組織切片及相應癌旁組織（距癌＜3 cm）切片各55 例，癌組織切片經病理檢測為NMIBC T1 期，癌旁組織切片病理檢測為正常組織。

納入標準：經尿道膀胱腫瘤切除術后病理檢測確診為NMIBC，符合國際抗癌聯盟TNM 分期中T1 期病理特征[5]，年齡35～80 歲，臨床資料完整。排除標準：合并其他惡性腫瘤，重要器官功能障礙，自身免疫系統疾病，有既往放化療史及其他治療史，妊娠、哺乳期婦女。

1.2 BCL-2 檢測 采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法（SP）檢測NMIBC 癌組織及癌旁正常組織中BCL-2 的表達。操作過程：組織石蠟切片經烤片后滴加二甲苯脫蠟，并用酒精梯度脫水；將切片置于中性檸檬酸緩沖液中，高溫高壓條件下修復抗原，PBS沖洗3 次；H2O2孵育5 min，阻斷內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗3 次；滴加單克隆 BCL-2 抗體（美國 Abcam，ab332124，1∶100），室溫下孵育1 h，PBS 沖洗3 次；滴加IgG 抗體-HRD 多聚體，室溫下孵育15 min，PBS 沖洗3次；采用DAB 試劑盒（深圳子科生物科技有限公司，BA435-368）顯色，顯色程度達到后自來水沖洗終止反應；蘇木素復染，自來水沖洗至返藍；酒精梯度脫水后干燥，用二甲苯透明后封片，于顯微鏡（×400）下觀察。

BCL-2 在NMIBC 癌組織及癌旁正常組織中定位于胞漿或胞膜，染色呈棕黃色顆粒。顯微鏡下隨機選取5 個視野觀察，每個視野計數300 個細胞，根據染色情況計算陽性細胞百分率，陽性細胞百分率≥10%判定為陽性表達，＜10%為陰性，陽性細胞百分率=陽性細胞數/總細胞數×100%[6]，由兩名資深病理醫師獨立閱片，并共同商議出最終結果。

1.3 隨訪 所有患者隨訪至2018 年6月，以門診方式進行，作膀胱鏡檢查并記錄患者無進展生存期（PFS），PFS為患者出現腫瘤進展或因任何原因而死亡時間。隨訪頻率：術后第1 年，1 次/月；術后第2年，1次/季；術后第3年，1次/半年。

1.4 統計方法 采用SPSS 19.0 統計軟件進行分析，計數資料采用率（%）表示，行2檢驗；等級資料行Z 檢驗；采用Kaplan-Meier 法分析生存率，行Log-rank2檢驗；多因素分析采用Logistic 回歸模型。P ＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中BCL-2 表達比較NMIBC 癌組織中BCL-2 陽性表達率為70.91%（39/55），顯著高于癌旁正常組織14.55%（8/55），差異有統計學意義（2=35.701，P ＜0.05）。

2.2 BCL-2 表達與NMIBC臨床病理特征的關系 BCL-2 的陽性組淋巴結發生轉移率、高級別腫瘤分級占比均高于BCL-2 陰性組（均P ＜0.05）；兩組腫瘤大小及病灶數差異均無統計學意義（均P ＞0.05），見表1。

表1 BCL-2 表達與NMIBC 臨床病理特征的關系 例

2.3 BCL-2 表達與NMIBC患者PFS的關系 隨訪36 個月，55 例NMIBC患者中有18 例發生復發或轉移或死亡（疾病進展）。BCL-2 陽性表達的NMIBC 患者3 年無進展生存率為58.97%，顯著低于BCL-2 陰性表達的87.50%（Logrank2=4.172，P ＜0.05），見圖1。

圖1 BCL-2 表達與NMIBC患者PFS的關系

2.4 影響NMIBC患者疾病進展的單因素分析 不同淋巴結轉移、腫瘤分級及BCL-2 表達的NMIBC 患者進展差異有統計學意義（均P＜0.05）；而不同年齡、性別、腫瘤大小及腫瘤數目的NMIBC患者疾病進展差異均有統計學意義（均P＞0.05），見表2。

表2 影響NMIBC 患者疾病進展的單因素分析例

2.5 影響NMIBC患者疾病進展的多因素分析 淋巴結轉移情況和BCL-2 陽性表達為NMIBC 患者疾病進展的獨立危險因素（均P ＜0.05），見表3。

表3 影響NMIBC 患者疾病進展的多因素分析

3 討論

NMIBC臨床治療治愈率極高，但其5 年復發率高達65%，易惡化為肌層浸潤性膀胱癌[7]。臨床上治療肌層浸潤性膀胱癌主要行膀胱切除術，但手術創傷大，嚴重影響患者生活質量[8]，因此，尋找早期指標監測腫瘤進展，對于治療方案的制定有重要意義。臨床常以腫瘤大小、數目、分級、TNM分期、是否發生淋巴結轉移等作為預測NMIBC進展的指標，但均不能準確判斷腫瘤進展情況，且檢測方法對膀胱組織有損傷，費用較高[9]。隨著分子技術的成熟，許多分子標志物如：核基質蛋白-22、血管內皮生長因子等已用于預測膀胱癌的復發和進展，但仍存在敏感性、特異性較低的問題[10-11]。

BCL-2 是一種癌基因，可以抑制細胞的凋亡，其異常表達與腫瘤的發生、發展、侵襲及轉移等過程密切相關，但BCL-2 與NMIBC 的研究較少。BCL-2可能通過調控自分泌細胞基質降解相關蛋白、上皮間質轉化信號通路等促進腫瘤轉移[12]。據報道BCL-2 在多種惡性腫瘤中異常表達，參與腫瘤的發生發展過程，但不同癌癥中BCL-2 的表達具有一定的差異。彌漫大B 細胞淋巴瘤中BCL-2 陽性表達率為83.70%[13]，鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中BCL-2 陽性表達率為71.4%[14]。由于T1 期NMIBC 患者進展風險具有較大爭議，故本研究收集的55例NMIBC 患者全處于T1 期。通過檢測NMIBC 患者癌組織及相應癌旁正常組織中BCL-2 的表達，發現NMIBC 癌組織中BCL-2 陽性表達率為70.91%，顯著高于癌旁正常組織，這表明BCL-2 的表達與NMIBC 發生有關。

本研究通過分析BCL-2 的表達與NMIBC臨床特征的關系發現，BCL-2 的陽性組淋巴結發生轉移率、高級別腫瘤分級占比均高于BCL-2 陰性組（均P ＜0.05），這表明 BCL-2 的表達參與NMIBC 發展過程。PFS 常用來體現疾病的預后情況，本研究發現BCL-2 陽性表達的NMIBC 患者3 年PFS 率顯著低于BCL-2 陰性表達患者，揭示BCL-2 陽性表達的NMIBC 患者預后較差。Logistic 回歸分析結果表明，BCL-2 表達情況是NMIBC 進展的獨立風險因素，提示BCL-2 表達可以判斷NMIBC 進展，有一定的預測價值。

綜上所述，BCL-2 可能參與NMIBC發生發展過程，可作為NMIBC 進展的潛在預測指標，有助于識別高復發風險NMIBC患者，為臨床治療及預后改良提供科學依據。