子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達的臨床意義

黃 燕 周玉珍 潘小虹 朱倩夢 張玉英▲

1.江蘇省蘇州市中西醫結合醫院婦產科，江蘇蘇州 215101；2.蘇州大學附屬第二醫院婦產科，江蘇蘇州 215100

子宮肌瘤是女性常見的良性盆腔腫瘤，患者可能 出現月經過多、盆腔疼痛、反復流產等癥狀，約60%的絕經前婦女會受其影響[1-2]。微RNA（microRNA，miRNA）為單鏈、內源性、非編碼RNA，由21～25 個核苷酸組成，參與細胞增殖、分化等多個生物學過程，具有十分重要的作用[3-4]。有相關研究表明[5-6]，miR-590、miR-16 均是miRNA 家族中的成員，表達水平與腫瘤的發生、發展密切相關。目前臨床中對子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達的臨床意義尚不清楚。鑒于此，本研究探討子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16表達的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年10 月至2020 年8 月江蘇省蘇州市中西醫結合醫院收治的186 例子宮肌瘤患者為研究組，并選擇同一時間段120 例因子宮脫垂實施手術治療的患者為對照組。對照組年齡31～64 歲，平均（54.48±4.36）歲；體重指數（body mass index，BMI）18.52～28.87 kg/m2，平均（26.32±1.27）kg/m2。研究組年齡32～65 歲，平均（53.84±4.13）歲；BMI 18.38～28.63 kg/m2，平 均（26.58±1.31）kg/m2；子宮肌瘤大小1～6 cm，平均（3.81±1.02）cm；子宮肌瘤數目1～5 個，平均（2.18±0.65）個。兩組年齡、BMI 比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究經江蘇省蘇州市中西醫結合醫院醫學倫理委員會批準同意。

納入標準：研究組術前經陰道超聲和核磁共振檢查[7]并經組織病理學診斷證實為子宮肌瘤；符合手術指征，且行子宮肌瘤切除術治療，手術由同一組醫生完成；患者及家屬簽署知情同意書。排除標準：合并生殖系統腫瘤或其他惡性腫瘤；全身性感染或有免疫系統疾病；嚴重盆腔粘連或盆腔急性炎癥；凝血功能障礙；血液系統疾病；嚴重肝腎功能障礙或衰竭；妊娠或哺乳期婦女；盆腔腹部巨大腫塊。

1.2 分析方法

1.2.1 樣本收集及miR-590、miR-16 表達水平檢測術中對子宮組織樣本進行收集，立即放入液氮中保存，后轉入-80℃超低溫冰箱中保存待測。實時定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）檢測子宮肌瘤組織與正常子宮組織miR-590、miR-16 水平：取子宮組織，使用Trizol 法提取組織miRNA，并檢測miRNA 的質量和濃度，將miRNAs 反轉錄為cDNA，miR-590、miR-16 及內參U6 序列：miR-590 正向引物：5’-TGGCGGCACCTGACCTACCTG-3’，反向引物：5’-TATTGCAGTCACGGTACGGTA-3’，產物長度124bp；miR-16 正向引物：5’-CTCCAGGTTCAGGTAACATG-3’，反向引物：5’-CCGGGTAACACTAGTCGTAG-3’，產物長度118 bp；U6 正向引物：5’-ACCGCTTGCAAAGGCTGCA-3’，反向引物：5’-CCAGGGGTCCGAGGTACGT-3’，產物長度115 bp。反應體系為20 μl：2×SYBR 混合物10 μl，10×cDNA 模板1 μl，正反向引物各1 μl，H2O 7 μl，每樣品3 個重復。反應程序：95℃預變性3 min，95℃10 s、60℃30 s，72℃2 min，35 個循環，72℃延伸10 min，在PCR 儀上進行反應，以U6 作為內參按照2-ΔΔCt算法分析基因相對定量表達。

1.2.2 臨床資料收集 收集可能影響子宮肌瘤發生的相關資料，主要包括年齡、BMI 及是否合并高血壓、糖尿病、高脂血癥，產次、流產次數、初潮年齡，是否痛經、月經紊亂，月經情況、遺傳病史、生殖道炎、避孕藥服用史、剖宮產史、白細胞計數（white blood cell count，WBC）及子宮組織miR-590、miR-16 表達水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 25.0 軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（）表示，采用t 檢驗；計數資料以例數或百分率表示，采用χ2檢驗；采用多因素logistic 回歸分析探討子宮肌瘤發病的影響因素；采用Pearson相關性分析明確r 值。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組子宮組織miR-590、miR-16 表達水平比較

研究組miR-590 表達水平高于對照組（P ＜0.05），miR-16 表達水平低于對照組（P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組子宮組織miR-590、miR-16 表達水平比較（）

表1 兩組子宮組織miR-590、miR-16 表達水平比較（）

2.2 兩組臨床資料比較

研究組合并糖尿病、月經紊亂、生殖道炎占比高于對照組，流產次數多于對照組（P ＜0.05）。見表2。

表2 兩組臨床資料比較

2.3 影響子宮肌瘤發生的多因素logistic 回歸分析

以子宮肌瘤發生情況為因變量（發生=1，未發生=0）；合并糖尿病，流產次數，月經紊亂，生殖道炎，子宮組織miR-590、miR-16 表達水平為自變量，相關賦值信息見表3。logistic 回歸分析結果顯示，月經紊亂，生殖道炎，子宮組織miR-590、miR-16 表達水平是子宮肌瘤發生的影響因素（P ＜0.05）。見表4。

表3 自變量賦值

表4 影響子宮肌瘤發生的多因素logistic 回歸分析

2.4 miR-590、miR-16 表達水平與子宮肌瘤大小、數目的關系

miR-590 表達水平與子宮肌瘤大小、數目呈正相關（r ＞0，P ＜0.05），miR-16 表達水平與子宮肌瘤大小、數目呈負相關（r ＜0，P ＜0.05）。見表5。

表5 miR-590、miR-16 表達水平與子宮肌瘤大小、數目的關系

3 討論

子宮肌瘤是一種能夠根治的良性腫瘤，但易使患者產生心理負擔，同時會嚴重影響患者的日常生活、生育功能[8-10]。通過對子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達的臨床意義進行分析探討，可為臨床診斷、防治提供一定的理論基礎，對子宮肌瘤患者具有十分重要的臨床意義。

miRNA 由21～25 個核苷酸組成，其異常表達與器官纖維化、腫瘤細胞的侵襲、遷移等有關[11-12]。隨著學者們對分子生物的深入探討，越來越多的miRNA被發現并進行了研究[13-15]。有研究表明，miR-590 在不同類型的腫瘤中的表達存在一定的差異，可通過不同的信號通路對腫瘤增殖、凋亡等生物學行為產生不同的影響[11]。miR-16 是近年來新發現的與血管生成相關的miRNA，相關研究表明[16-18]，miR-16 在乳腺癌、胃癌中呈低表達，在體外可明顯抑制腫瘤細胞的增殖、遷移能力。

本研究結果顯示，研究組miR-590 表達水平高于對照組，miR-16 表達水平則低于對照組，提示miR-590 在子宮肌瘤組織中呈高表達，miR-16 則呈低表達。本研究結果表明，研究組合并糖尿病、月經紊亂、生殖道炎占比高于對照組，流產次數多于對照組。經logistic 回歸分析結果提示，月經紊亂、生殖道炎、子宮組織miR-590、miR-16 表達水平是子宮肌瘤發生的影響因素。臨床中需逐一控制各項因素的影響，以降低子宮肌瘤的發生率。薛宏[19]研究結果表明，月經紊亂、生殖道炎等是子宮肌瘤發生的相關因素，與本研究結果相符。月經紊亂為子宮肌瘤發生的相關因素，可能是由于發生月經紊亂后多采用激素療法進行治療，易導致患者體內激素水平發生紊亂，尤其是雌激素水平的上升，子宮肌瘤又為激素依賴性疾病，故而月經紊亂患者子宮肌瘤的發病率較高[20]。生殖道炎多因癥狀較輕，不易引起患者注意，導致病原體長期刺激子宮內膜使其增生增長，致使子宮肌瘤的發生[21]。miR-590 是miRNA 家族中的成員，在胃、子宮等組織中均有表達，Ma 等[22]研究表明，miR-590 在肺癌、子宮頸鱗狀細胞癌中的表達明顯增加。miR-16 也是miRNA 家族中的成員，相關研究表明[23-25]，miR-16 表達水平與胃癌、前列腺癌等惡性腫瘤的發生密切相關，可作為輔助診斷的重要參考指標。本研究發現，miR-590 表達水平與子宮肌瘤大小、數目均呈正相關，miR-16 表達水平與子宮肌瘤大小、數目均呈負相關，提示子宮肌瘤組織中miR-590、miR-16 表達水平可能與子宮肌瘤的發生存在一定的相關性。

綜上所述，miR-590 在子宮肌瘤組織中呈高表達，miR-16 則呈低表達，且miR-590、miR-16 表達水平與子宮肌瘤的發生相關，對疾病的早期篩查和診斷具有一定的參考價值，本研究的不足之處在于樣本量較小，在后續研究中需擴大樣本量進行大規模、多中心臨床試驗進一步進行研究。