復(fù)方重樓泡騰片的制備工藝研究及薯蕷皂苷的測定

劉莉彬，祝啟張，楊瀚森，涂欣怡，黃金龍，鄧 輝

（1.皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽六安 237012；2.安徽省中藥資源保護(hù)與持續(xù)利用工程實(shí)驗(yàn)室，安徽六安 237012）

0 引言

自古以來，重樓就被作為中藥治療各種疾病，之后歷代的中藥古籍中都有其身影，記錄中描述以重樓根入藥，其基源植物主要為重樓屬的多種植物。因此，研究有關(guān)重樓方面課題有著十分重要的作用[1]。

以重樓為君藥，配三七、鐵棍山藥、丹參、山楂等臣藥，經(jīng)原輔料混合、制軟材、制顆粒、干燥、整粒、壓片等工序，制備重樓泡騰片，并測定原料藥中薯蕷皂苷的含量，為今后的研討提供相應(yīng)的理論支持。

1 試驗(yàn)器材

1.1 儀器

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、片劑硬度儀、紫外可見分光光度計(jì)，天津市天大天發(fā)科技有限公司產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；壓片機(jī)，上海天凡藥機(jī)制造廠產(chǎn)品；粉碎機(jī)，廣州雷邁機(jī)械設(shè)備有限公司產(chǎn)品；比色皿，宜興市偉鑫儀器有限公司產(chǎn)品；研缽、尼龍篩等。

1.2 試劑和材料

1.2.1 試驗(yàn)材料

重樓、三七，六安華氏大藥房有限公司提供；山楂、丹參，淮仁堂提供；鐵棍山藥，購自六安綠籃子超市。

1.2.2 試驗(yàn)試劑

葡萄糖AR、甘露醇AR、可溶性淀粉、阿斯巴甜、碳酸氫鈉、檸檬酸AR、酒石酸、交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮AR、無水乙醇AR、PEG6000、氯化鈉、三氯甲烷AR、乙酸酐、濃硫酸、鹽酸。

2 工藝流程

2.1 重樓泡騰片的制備

重樓等藥材→醇提、濃縮→酸堿分別制軟材→酸堿分別制顆粒→干燥→整粒→壓片[2]。

2.2 薯蕷皂苷的測定

2.2.1 樣品液的制備

重樓等藥材→醇提、過濾→醇洗、濃縮蒸干→鹽酸酸化→三氯甲烷加熱回流→過濾濃縮→定容。

2.2.2 定性測定

泡沫反應(yīng)→皂苷元母核反應(yīng)。

2.2.3 定量測定

配置不同濃度的對照液→揮干溶劑→加濃硫酸，水浴加熱→測定→繪制標(biāo)準(zhǔn)直線圖。樣品液→揮干溶劑→加濃硫酸，水浴加熱→檢測。

2.3 操作要點(diǎn)

2.3.1 重樓浸膏

稱取適量重樓等藥材，按1∶8的比例加入體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇，進(jìn)行2次提取，水浴50℃，每次提取90 min，合并2次濾液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，最后制得浸膏[3]。

2.3.2 制軟材

按稱量的乳糖、葡萄糖、可溶性淀粉、甘露醇的1∶3和檸檬酸、酒石酸、稱量一半的PVPP及碳酸氫鈉分別（酸堿比例1∶4）過篩（65目）、研磨混合，緩慢地加入重樓浸膏適量，用手工黏合分別制得酸堿軟材。要求制得的軟材握之成團(tuán)、觸之即散。

2.3.3 制顆粒

將已經(jīng)制好的軟材通過24目篩，使軟材變成顆粒，制得酸堿顆粒。

2.3.4 干燥

在80℃電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中將已經(jīng)經(jīng)過篩的軟材干燥60 min。

2.3.5 整粒

將已經(jīng)在干燥箱中干燥后的顆粒過40目篩，然后加入潤滑劑PEG6000氯化鈉混合劑和稱量一半的交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮，過篩（40目）混合均勻。

2.3.6 壓片

將整好的顆粒每次稱量200 mg用壓片機(jī)壓片，每片直徑8 mm。

2.4 感官評定

在社會(huì)上隨機(jī)抽取學(xué)生組建評委小隊(duì)，依據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)，分別對重樓泡騰片的各個(gè)方面進(jìn)行評分，統(tǒng)計(jì)每組總分計(jì)算平均值[4]。

重樓泡騰片各方面評分見表1。

表1 重樓泡騰片各方面評分

3 單因素分析

3.1 矯味劑的選擇

中藥制劑的缺點(diǎn)是本身帶有濃重的中藥苦澀味，在患者服藥時(shí)，會(huì)對患者的順應(yīng)性產(chǎn)生極大的不利影響，對于制劑來說是一個(gè)很重要的問題。為避免這一問題，選擇加入矯味劑阿斯巴甜對其處理。因阿斯巴甜的甜度比一般糖甜約200倍[5]，加入量過多，會(huì)過甜而不利患者服用，且自身也有一定的危害，故對阿斯巴甜進(jìn)行加入量的研究。分別以阿斯巴甜量為0.05%，0.10%，0.15%，0.20%加入處方中，根據(jù)口感、風(fēng)味進(jìn)行分析。

阿斯巴甜添加量對重樓泡騰片感口感、風(fēng)味的影響見表2。

表2 阿斯巴甜添加量對重樓泡騰片感口感、風(fēng)味的影響

由表2可知，當(dāng)添加阿斯巴甜添加量達(dá)到0.05%時(shí)，出現(xiàn)明顯的中藥苦澀味；添加量達(dá)到0.10%時(shí)，中藥味淡去，口味不明顯；添加量達(dá)到0.15%時(shí)，有明顯甜味；添加量達(dá)到0.20%時(shí)，甜味重。為節(jié)約成本，防止過多矯味劑影響藥效，滿足患者順應(yīng)性，確定添加阿斯巴甜（矯味劑）的添加量為0.10%。

3.2 重樓浸膏添加量的選擇

由于重樓浸膏有較強(qiáng)的黏性，由此代替黏合劑，降低黏合劑的危害，同時(shí)滿足最大載藥量且降低成本。分別以重樓浸膏量4%，5%，6%，7%，8%整粒、壓片，對其各個(gè)方面進(jìn)行對比。

添加重樓浸膏的比例對重樓泡騰片感官品質(zhì)的影響見表3。

表3 添加重樓浸膏的比例對重樓泡騰片感官品質(zhì)的影響/分

當(dāng)浸膏添加量為6%和7%時(shí)，泡騰片表面斑點(diǎn)過多，質(zhì)地疏松，且易黏沖，不易操作；浸膏添加量為4%，5%時(shí)，表面較光滑，斑點(diǎn)量少，差距不大。因此，根據(jù)以上4種結(jié)果和從實(shí)際生產(chǎn)情況達(dá)到最大載藥量，滿足患者順應(yīng)性，最終確定浸膏加入量為5%。

3.3 潤滑劑添加量的選擇

為了使配制出的顆粒具有優(yōu)良的流動(dòng)性，重樓泡騰片的表面十分光滑且分布均勻，通過研究，在綜合考查使用不同潤滑劑所帶來的效果后，最終決定選用硬脂酸鎂作為試驗(yàn)研究的潤滑劑，以此來保證配制出來的重樓泡騰片質(zhì)量均勻。通過試驗(yàn)，最終確定一個(gè)最佳配方，然后經(jīng)過一系列的制粒，用固定漏斗法[6]測定休止角的大小，測試顆粒的流動(dòng)性來確定使用量。

添加硬脂酸鎂添加量對壓片的影響見表4。

表4 添加硬脂酸鎂添加量對壓片的影響

由表4可知，隨著硬脂酸鎂添加量的不斷增加，休止角會(huì)隨之減小，但當(dāng)硬脂酸鎂添加量增加到1.0%時(shí)，休止角為22.6°，為確保顆粒的流動(dòng)性且保證成本最低，最終確定硬脂酸鎂添加量為1.5%。

3.4 崩解劑的選擇

為達(dá)到更好的崩解效果，僅僅加入酸源堿源的泡騰崩解劑無法滿足重樓泡騰片的泡騰效果。現(xiàn)選擇交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮作為外加崩解劑。分別以交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮量的0.5%，1.0%，1.5%，2.0%，2.5%壓片。通過對泡騰片崩解時(shí)限為依據(jù)測定。

崩解劑添加量與崩解時(shí)限的關(guān)系見表5。

表5 崩解劑添加量與崩解時(shí)限的關(guān)系

當(dāng)崩解劑交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮添加量達(dá)到0.5%時(shí)，崩解時(shí)限平均為3 min 56.8 s，且有2組超過5 min；當(dāng)添加量達(dá)到1.0%時(shí)，崩解時(shí)限平均為1 min 6 s；當(dāng)添加量超過1.0%后，平均崩解時(shí)限并沒有明顯降低。為減少患者等待時(shí)間、降低工藝成本，確定崩解劑PVPP的添加量為1.0%。且多次試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)表明崩解劑的加入方法中，內(nèi)外崩法比內(nèi)崩法和外崩法要優(yōu)，1.0%的添加量，使用內(nèi)外崩法可以使平均崩解時(shí)限達(dá)到46.0 s，因此崩解劑可在制顆粒時(shí)加0.5%，整粒時(shí)添加0.5%，混勻。

3.5 PEG6000中氯化鈉添加量選擇

經(jīng)試驗(yàn)得出，潤滑劑硬脂酸鎂加入泡騰片中，溶解后，在溶液上層會(huì)產(chǎn)生浮沫，且酒石酸與鈣鎂離子容易產(chǎn)生渾濁，影響美觀，且表面浮沫易溢出，這些在患者眼中都無法輕易接受。為改變這一問題，更改潤滑劑為PEG6000，但PEG6000具有輕微的引濕性，易黏沖。通過向PEG6000中添加氯化鈉，改變這一特性[7]。確定PEG6000的添加量為1.0%，并分別以氯化鈉添加量0，0.5%，1.0%，1.5%壓片，通過各方面進(jìn)行比較。

氯化鈉添加量對泡騰片的組織狀態(tài)、澄清度影響見表6。

表6 氯化鈉添加量對泡騰片的組織狀態(tài)、澄清度影響

由表6可知，當(dāng)氯化鈉添加量為0時(shí)，表面較粗糙，有斷面，會(huì)不時(shí)出現(xiàn)軟片或黏沖現(xiàn)象；當(dāng)添加量達(dá)到0.5%時(shí)，表面光滑，沒有軟片現(xiàn)象；當(dāng)添加量大于0.5%時(shí)，沒有明顯更佳現(xiàn)象。為保證降低成本，工藝可以進(jìn)行，確定氯化鈉的添加量為0.5%。

3.6 酒石酸和檸檬酸添加量選擇

因?yàn)闄幟仕峋哂腥菀孜湛諝庵兴值男再|(zhì)，制備時(shí)會(huì)有黏沖現(xiàn)象；酒石酸的口感不好，會(huì)改變泡騰片的口味。單一地作為酸源都不適合重樓泡騰片的制備要求[8]。選擇同時(shí)加入檸檬酸和酒石酸，使酸源總添加量為11%，以改變其不足。應(yīng)用單因素試驗(yàn)分析酒石酸及檸檬酸的配比，以多種感官評定為依據(jù)。

檸檬酸和酒石酸添加量見表7，添加量選擇對感官評價(jià)的影響見表8。

表7 檸檬酸和酒石酸添加量/%

表8 添加量選擇對感官評價(jià)的影響/分

由表8可知，最終確定酒石酸添加量為6%，檸檬酸添加量為5%。

4 雙因素結(jié)果數(shù)據(jù)分析

對硬脂酸鎂、PEG6000和氯化鈉混合劑進(jìn)行雙因素分析，選擇最佳的潤滑劑。

雙因素試驗(yàn)水平見表9，主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)見表10，臨界F值對應(yīng)表見表11。

表10 主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)

表11 臨界F值對應(yīng)表

由表11可知，F(xiàn) A=1.774＜F0.05(1,3)，p＞0.05；F=1.759＜F0.05(3,3)，p＞0.05，表明潤滑劑種類與占比例差異不顯著，且潤滑劑種類間差異不顯著。為避免硬脂酸鎂使溶液渾濁產(chǎn)生浮沫，在不影響感官評價(jià)的條件下，確定潤滑劑的加入類型為PEG6000和氯化鈉混合劑：PEG6000的添加量為1.0%，氯化鈉的添加量為0.5%。

5 正交結(jié)果數(shù)據(jù)分析

為了更好地優(yōu)化重樓泡騰片配方，將對甘露醇，葡萄糖、乳糖的添加量進(jìn)行三因素三水平分析，從而選出最佳的填充劑配比[9]。從泡騰片的各個(gè)方面作為考查指標(biāo)，安排三因素三水平試驗(yàn)[10]，得出最優(yōu)配比。

正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見表12，重樓泡騰片配方優(yōu)選試驗(yàn)結(jié)果見表13，方差分析結(jié)果見表14。

表12 正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)/%

表13 重樓泡騰片配方優(yōu)選試驗(yàn)結(jié)果

表14 方差分析結(jié)果

因?yàn)镕 A=0.062、F B=0.316、F C=0.169均小于F0.05(2,2)，p＞0.05，表明3個(gè)因素各水平平均感官分?jǐn)?shù)差異都不顯著。可能是此試驗(yàn)誤差大且誤差自由度小（僅為2），靈敏度低，從而掩蓋了3個(gè)因素各水平平均感官分?jǐn)?shù)的差異顯著性。此時(shí)，可從表6中選擇綜合評分最佳的試驗(yàn)組7（A3B1C3）即為3種填充劑的最佳配比，即甘露醇添加量為25%，乳糖添加量為10%，葡萄糖添加量為5%。

6 最佳復(fù)方重樓泡騰片配方的確定

根據(jù)各項(xiàng)單因素考查試驗(yàn)結(jié)果和三因素三水平試驗(yàn)探究出個(gè)添加物的最佳比例，得出復(fù)方重樓泡騰片的最佳添加量為重樓浸膏5%，甘露醇25%，乳糖10%，葡萄糖5%，淀粉11.4%，檸檬酸5%，酒石酸6%，碳酸氫鈉30%，交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮1.0%，PEG6000 1.0%（潤滑劑），氯化鈉0.5%，阿斯巴甜0.1%。

7 原料藥中薯蕷皂苷的測定

7.1 樣品溶液的制備

將藥材于60℃干燥3 h，打碎成粉，過65目篩。在電子分析天平上按比例稱取藥材，總質(zhì)量達(dá)到5 g。將藥材放置于錐形瓶中，在甲醇溶液中浸泡1 h后，過濾藥品殘?jiān)又眉状枷礈鞛V渣，兩者合并，在燒杯中蒸干溶劑。向獲得的殘?jiān)幸来尉徛尤胂嗤w積的3 mol/L的鹽酸溶液，水浴加熱30 min，冷卻至室溫。多次加入三氯甲烷加熱回流15 min并過濾，合并后靜置，棄去下層液。濃縮并轉(zhuǎn)移至容量瓶[10]，三氯甲烷定容。

7.2 定性測定

7.2.1 泡沫反應(yīng)

根據(jù)皂苷類的藥物具有泡沫反應(yīng)，在攪拌時(shí)會(huì)發(fā)生和蛋白質(zhì)溶液相同的泡沫現(xiàn)象，一旦溫度升高后皂苷類藥物泡沫不會(huì)消失，但蛋白質(zhì)溶液產(chǎn)生的泡沫會(huì)消失，充分利用這一原理設(shè)計(jì)試驗(yàn)如下：分別取3 mL樣品液、3 mL蛋白質(zhì)溶液，振搖10 min，比較泡沫產(chǎn)生的量。在50℃下水浴加熱5 min，對比泡沫量。蛋白質(zhì)泡沫消失，皂苷不消失，證明原料藥中含有皂苷類物質(zhì)，即薯蕷皂苷。

泡沫反應(yīng)對比見圖1。

圖1 泡沫反應(yīng)對比

7.2.2 皂苷元母核的反應(yīng)

在2支試管中，其中1支加入10 mL樣品液，蒸干溶劑，滴加3滴醋酸酐。溶解殘?jiān)螅渭訚饬蛩幔姿狒噭w積比10∶1）3滴；另1支滴加3滴醋酸酐，再滴加相同配比的濃硫酸－醋酸酐試劑3滴。

皂苷元母核反應(yīng)對比見圖2。

圖2 皂苷元母核反應(yīng)對比

7.3 定量測定

7.3.1 對照品溶液的制備

精確稱取對照品5.0 mg對照品，在25 mL容量瓶中加入三氯甲烷溶解并定容，搖勻，作為質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL對照品溶液備用。

7.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精確吸取對照品液0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.1，1.3，1.5 mL置于10 mL試管中，靜置等待溶劑揮發(fā)，分別加入10 mL濃硫酸，在水浴鍋中保溫30 min，取出后冰水浴中冷卻4 min。空白對照為濃硫酸，設(shè)置于波長410 nm處進(jìn)行測定，重復(fù)5次。

對照品質(zhì)量濃度與吸光度之間的關(guān)系見表15。

表15 對照品質(zhì)量濃度與吸光度之間的關(guān)系

橫坐標(biāo)為對照品溶液濃度的平均值，A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[11]。

對照品質(zhì)量濃度與吸光度的線性關(guān)系見圖3。

圖3 對照品質(zhì)量濃度與吸光度的線性關(guān)系

由圖3可知，得回歸線方程為：

7.3.3 樣品含量的測定

按照上文標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，精確吸取0.1 mL的樣品溶液，重復(fù)5次，獲得的數(shù)據(jù)取其平均值[12]。按相同條件下得到的線性回歸方程換算得到原料藥中的薯蕷皂苷的含量為227μg/g。

8 結(jié)論

以重樓為主原料，研究重樓泡騰片的配方和工藝及原料藥中薯蕷皂苷的含量測定。以多指標(biāo)感官評定為依據(jù)，應(yīng)用各單因素試驗(yàn)考查崩解劑、矯味劑、潤滑劑、氯化鈉及主藥的用量，應(yīng)用單因素考查潤滑劑種類的選擇，應(yīng)用三因素三水平試驗(yàn)研究以優(yōu)化配方，來篩選重樓泡騰片的最佳配方。該配方工藝簡便、實(shí)用性強(qiáng)，所制得的重樓泡騰片酸甜適宜，硬度大，易保存，溶解快。且其原料藥中含有薯蕷皂苷227μg/g。因時(shí)間有限，只做了原料藥中薯蕷皂苷的粗測定。此試驗(yàn)為以后對重樓的開發(fā)利用奠定重要基礎(chǔ)。