動物源細菌耐藥性評估在獸用抗菌藥使用減量化行動中的應用

周芷錦，陳 潔，沈紅霞，孫思琪，趙靈燕，倪柏鋒，孫冰冰，周 煒

(浙江省動物疫病預防控制中心，杭州 311119)

抗菌藥物在現代化、集約化的畜牧養殖過程中發揮了重要的作用。自1940年以來，各類抗菌藥物被廣泛的應用于治療和預防畜禽疾病。除殺菌、抑菌外，部分抗菌藥物還可促進動物生長以及提高飼料的利用率[1-2]。但抗菌藥物的長期使用，加之不合理使用，特別是促生長類抗菌藥物的大量使用，動物源細菌耐藥性不斷擴展、惡化，嚴重影響了畜牧業的健康、有序與綠色發展，甚至危害到了公共衛生安全。為了遏制和延緩細菌耐藥性的發展，為國家政策的制定、動物養殖業、動物的健康和衛生的良好發展提供指導[3]，世界衛生組織(WHO)、世界動物衛生組織(WOAH)等國際組織號召各國對食源性細菌的耐藥性進行全面監測、開展風險評估[4]。

農業農村部自2008年起啟動全國動物源細菌耐藥性監測工作，并明確組建全國動物源細菌耐藥性監測網的指導目標，為分析、評估我國動物源細菌耐藥性的發生、發展情況提供了重要的數據支撐。2019年開始，浙江省逐步推進獸用抗菌藥物使用減量化和飼料環保化行動(以下簡稱“兩化行動”)，并對實施成效提出評估驗收方案，這其中很重要的一項評估指標就是動物源細菌耐藥性監測評估。如何運用動物源細菌耐藥性監測數據進行評估，是本文思考與探索的重點。

1 動物源細菌耐藥性評估在減量化行動中的作用

動物源細菌耐藥性監測在評估耐藥性方面的意義已然明晰[5-8]，其監測數據可較為直觀地反映細菌的耐藥譜和耐藥程度，在獸用抗菌藥使用減量化行動中具有著重要意義。

1.1 降低單一因素對風險評估的干擾，真實反映用藥情況 獸用抗菌藥使用減量化評估中有一個重要指標：單位動物產品抗菌藥使用量。在浙江省“兩化行動”實施過程中發現，受養殖規模、養殖主體的文化程度、養殖管理的規范化程度以及臺賬記錄習慣等因素影響，用藥臺賬的完整性和規范性差異較大，因此單位動物產品抗菌藥使用量的測算結果與生產實際存在較大出入。用藥臺賬主要存在以下幾個測算難點：未使用藥物的通用名、未標注藥品含量和包裝規格、未明確使用畜種階段、未注明使用時間和用藥期限等。僅通過用藥臺賬計算單位動物產品抗菌藥使用量的評價指標，較難準確反映養殖場的藥物使用情況，而動物源細菌耐藥性評估的引入，可以相對客觀、真實反應抗菌藥物長期使用情況，有研究顯示，細菌耐藥性的升高與抗菌藥物的使用量、使用強度以及療程等存在正相關性[9-11]。細菌耐藥性的評估減少了外部和人為因素導致的明顯異常，提高了“兩化行動”中單位動物產品抗菌藥物使用量評估的真實性和可靠性。

為進一步研判“兩化行動”示范創建場是否存在使用禁用藥物情況和總體用藥水平，浙江省增設了畜產品、養殖糞肥和水體中抗菌藥物殘留量的監測考核。受檢測次數與樣本覆蓋面等因素影響，畜產品、養殖糞肥和水體中抗菌藥物殘留量易出現大幅波動，可能影響最終驗收評估結論。而對耐藥性的評估，可減少抗菌藥物殘留量數據不穩定等因素對“兩化行動”評估的影響，可為“兩化行動”的科學合理評估驗收提供更加合理的參考評估數據。

1.2 持續監測，科學反饋獸用抗菌藥使用減量化行動實施成效 農業農村部出臺的《全國獸用抗菌藥使用減量化行動方案(2021—2025年)》[12]和浙江省出臺的《浙江省推進獸用抗菌藥減量化和飼料環保化試點行動方案(2020-2022年)》[13]中均把遏制動物源細菌耐藥性的發展，維護公共衛生安全作為行動的重要目的之一。浙江省獸用抗菌藥減量化的行動路徑為“禁”、“減”、“替”。“禁”，即禁止促生長類抗菌藥物飼料添加劑的生產經營和使用。“減”，即減少不規范的預防治療用藥。“替”，即選用合適的替抗產品。而動物源細菌耐藥性監測評估作為研究耐藥性現狀及發展趨勢和評估減量化行動成效的有效手段已得到了多方研究數據的證明[14-17]。以黏菌素為例，在我國禁止黏菌素作為促生長劑用于動物養殖后，我國對黏菌素耐藥的動物源大腸桿菌(CREC)的檢出率從2015年的38.7%顯著降低至2021年的6.9%，黏菌素耐藥基因mcr-1以及其攜帶質粒的分離率在2015-2019年間呈顯著下降趨勢[14]，從科學數據角度證明了禁用令的成效和在遏制黏菌素耐藥性進一步發展中做出的貢獻。持續的細菌耐藥性評估能直觀科學地反饋政策執行后的有效性，為下一步政策執行和行動路徑提供技術支持。

2 動物源細菌耐藥評估模型建立

依據歷年農業農村部動物源細菌耐藥性監測計劃[18]，目前評估的動物源細菌主要包括腸球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌等5種；監測的藥物種類也很多，腸球菌監測的藥物種類多達27種。與此同時，為保障耐藥性評估的科學性和合理性，經對耐藥系數評估模型的極限值、適用性、歷年數據測評等的測試，各養殖場點監測耐藥指示菌的菌株數應不少于20株。以浙江省監測大腸桿菌和腸球菌為例，單一養殖場得到的MIC數據在1000余個左右。如要更加直觀評估、比較動物源細菌耐藥性現狀與變化趨勢，則需要進一步量化與簡明化評估數據。

為此，本項目組通過近三年的不斷摸索，建立了菌群耐藥性強度評估模型[19-20]。即：先對監測得到的各藥物最小抑菌濃度(MIC值)(不等于、比值等)進行修正；再將全部MIC值(含修正值)取對數，以縮小MIC值之間的倍數差異，并求得養殖場/全省(市)同一菌種的全部監測藥物的MIC值的對數平均值、中位值、最大值和最小值，對數平均值表示為耐藥強度系數，中位、最大值和最小值為參考。再佐之以各養殖場點典型耐受藥物種類、數量，形成耐藥系數與耐藥譜相結合的評估模型。

單一數據式的耐藥強度系數為評估、比較動物源細菌耐藥性現狀與變化趨勢提供了簡明的量化數值。經近三年的實踐分析，該評估模型能夠反映單一養殖場抗菌藥物使用情況及其用藥變化趨勢。

3 動物源細菌耐藥性評估結果的應用

動物源細菌耐藥性評估過程耗時費力，要讓得來不易的結果充分發揮其作用，一方面離不開服務于養殖主體，一方面離不開服務于行政監管部門。

3.1 耐藥性評估結果在養殖主體中的應用 在浙江省“兩化”行動調研中發現，少數大型養殖場對基于耐藥性監測選擇合適的抗菌藥物進行針對性治療有一定的認識，可自行開展簡易藥敏試驗或者通過送檢的方式進行本場細菌感染疾病治療藥物的選擇；大部分養殖場在用藥方面仍依賴于駐場獸醫、鄉村獸醫或者獸醫診療機構的診療用藥經驗，常用藥物種類相對集中，在同一養殖場中獸用抗菌藥物輪換使用的概念尚未形成；小散戶盲目用藥、超時超量使用抗菌藥物的情況依然存在。根據調研結果，浙江省耐藥性評估在包含“兩化行動”的示范場和定點場的同時，以地區為單位制定點面結合的監測方案。較長的“兩化行動”周期的耐藥性評估結果所總結的耐受藥物(菌株耐藥率超70%的藥物)清單可指導養殖主體輪換用藥，為合理用藥提供科學依據，有助于減少抗菌藥物的使用量；耐藥強度系數的逐年變化趨勢可反映“減量化”的效果，為養殖主體在評估驗收時提供數據支撐。

3.2 耐藥性評估結果在獸用抗菌藥監管中的應用 遏制細菌耐藥性問題早已成為世界范圍內的共同議題，但浙江省動物源細菌的耐藥現狀在“兩化行動”前尚不清晰，監管單位無法通過政策的制定進行指導。“兩化行動”的耐藥性評估結果一方面可直觀全面的展示全省范圍內動物源細菌耐藥性的現狀以及耐藥性發展變化趨勢，通過耐藥強度系數為行政監管部門提供了量化、直觀、簡明的數據；另一方面耐藥性評估得出的全省范圍內高耐受藥物清單，為行政監管單位下一步制定指導養殖用藥，監管畜產品中藥物殘留以及畜禽排泄物中抗菌藥物殘留風險的相關政策提供參考依據。

4 動物源細菌耐藥性評估存在的主要問題

4.1 耐藥性評估方法不一致性 用于耐藥性監測的研究方法較多，包括藥物敏感性實驗方法[21-22]、耐藥質粒檢測及質粒指紋譜圖技術[23-24]、耐藥基因檢測技術[25]等。藥物敏感性實驗方法包括瓊脂稀釋法、微量肉湯稀釋法、KB紙片法和E-TEST法等。目前耐藥表型的主流監測方法有微量肉湯法和KB紙片法，各有優缺點。微量肉湯稀釋法是目前農業農村部指定的監測方法，該方法優點在于可以準確的測得藥物的MIC值，且實驗過程簡便，可以批量進行檢測，有成品藥敏板可供選擇，但藥物種類受限且價格比較高昂；KB紙片法的優點在于操作簡單，藥物種類不受限且經濟實惠，是目前養殖場常用藥敏試驗方法，但無法測得藥物的MIC值只可判斷藥物耐藥與否。為了更好地服務于養殖主體，如何科學合理的評估兩種方法結果的一致性，仍待權威部門提供指導或參考意見。

4.2 藥敏板的質量參差不齊 目前耐藥性監測所使用的藥敏板大部分為成品板，種類主要包括濁度板和顯色板。藥敏板尚無統一的選擇標準以及評價標準，濁度板和顯色板的結果一致性和誤差評估也未見相關文獻報道。隨著國內生產藥敏板的廠家增多，可選擇范圍擴大，監測單位如何選擇采購藥敏板仍需權威部門給出參考標準。

4.3 耐藥菌的保藏管理權限不明確 除耐藥表型監測外，耐藥基因的監測也是耐藥性評估的重要手段。為了對未知或尚未關注的耐藥基因的遷移、傳播規律開展研究，需要對耐藥菌進行妥善保藏。應建立耐藥菌保藏管理的相關制度與規定。

5 展 望

抗菌藥物被發現可用于治療細菌感染以來，因其大大降低由細菌感染導致的死亡率，在人類和食品動物上均有廣泛的使用。但隨著抗菌藥物的使用，細菌在與抗菌藥物的斗爭中逐步產生了耐藥性，且出現逐步擴大加深的趨勢。據報道預計未來抗菌藥物的使用的增長中三分之二將用于養殖行業[26]，且人和動物的藥物譜庫存在大量重疊，在人、動物和環境的活動聯系中，加強了耐藥菌和耐藥基因的傳播[27]。自20世紀末以來，各國逐步啟動對動物源細菌耐藥性的監測評估，并作出報告[28-30]。動物源細菌耐藥性的監測是個長期過程，我國動物源細菌耐藥性監測工作較晚，監測標準和評估體系亟待完善[31-32]，覆蓋全國的監測網絡有待建立，耐藥性研究方面的技術要求相對較高，人才儲備有待加強。