多發性骨髓瘤患者體內硼替佐米累計量與miR-324-5p、miRNA-21表達量的相關性研究

張 岱 梅書豪 劉 璐

多發性骨髓瘤是臨床常見的血液系統惡性腫瘤，占全部腫瘤1%，占血液系統惡性腫瘤的10%～15%[1]。據數據結果顯示[2]，多發性骨髓瘤已超過急性白血病發生率，居于第二位。目前關于多發性骨髓瘤發生機制和特點的研究較多，但尚未完全明確，其主要特點是克隆性增殖的惡性漿細胞在骨髓微循環鏡中不規則聚集和浸潤等，從而引起不同程度的貧血和骨破壞等[3-4]。藥物是治療多發性骨髓瘤重要方法，目的是盡快達到完全緩解、改善患者生活質量[5]。硼替佐米是治療多發性骨髓瘤最常用的藥物，具有抑制腫瘤增長，延長患者生存時間的作用，但其療效與藥物累計、病情因素有關。微小RNA(miR)是一種調節內源性基因的非編碼的夏小RNA，參與腫瘤的發生和發展。miR-324-5p、miRNA-21能夠識別特定的目標miRNA，進而發揮副調控基因表達的作用。本文選擇醫院2018年1月至2021年1月診治的多發性骨髓瘤患者，分析患者體內硼替佐米累積量與miR-324-5p、miRNA-21表達量的相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇許昌市中心醫院2018年1月至2021年1月診治的多發性骨髓瘤患者90例。納入標準：①符合《中國多發性骨髓瘤診治指南(2015年修訂)》中制定多發性骨髓瘤的診斷標準；②接受硼替佐米治療；③18～70歲患者；④首次接受治療；⑤依從性較好的患者。排除標準：①合并其他惡性腫瘤的患者；②妊娠期、哺乳期患者；③凝血功能異常的患者；④肝功能和腎功能障礙的患者；⑤合并嚴重性基礎疾病患者。男性41例，女性49例，年齡18～70歲，平均(46.09±9.45)歲，病程最短1個月，最長3年，平均(2.18±0.27)年。

1.2 方法

硼替佐米治療及體內累計量檢查：使用硼替佐米方案治療，硼替佐米0.7～1.3 mg/m2,皮下注射，第1天、4天、8天和11天給藥，地塞米松20 mg/d，靜脈滴注，第1～2,3～4,8～9,11～12天靜脈滴注給藥，每3周為1個療程，連續治療3個療程。

miR-324-5p、miRNA-21表達量：在治療前和每個療程結束前1d采用患者空腹肘靜脈血3 ml，離心處理后置于-80 ℃中保存，使用miRNA提取盒子提取，逆轉錄后的產物應用擴增miRNA qRT-PCR試劑盒，使用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測miR-324-5p、miRNA-21表達量。

1.3 評價指標

比較3個療程患者硼替佐米累計量和miR-324-5p、miRNA-21表達量，分析其相關性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 三個療程硼替佐米累計量比較

三個療程硼替佐米累計量比較中兩兩比較均有統計學意義(P<0.05)，隨著療程增加，患者體內硼替佐米累計量逐漸增加，見表1。

2.2 三個療程miR-324-5p、miRNA-21表達量比較

三個療程miR-324-5p、miRNA-21表達量比較中兩兩比較均有統計學意義(P<0.05)，隨著療程增加，患者體內miR-324-5p、miRNA-21表達量逐漸下降，見表2。

表2 三個療程miR-324-5p、miRNA-21表達量比較

2.3 硼替佐米累計量與miR-324-5p、miRNA-21表達量的相關性分析

硼替佐米累計量與miR-324-5p表達量、miRNA-21表達量呈負相關，其累計量越多，miR-324-5p表達量、miRNA-21表達量越低(P<0.05)，見表3。經過Spearman相關性分析，硼替佐米累計量與miR-324-5p表達量和miRNA-21表達量相關系數分別為-0.831和-0.886。一般認為：|γ|≥0.8時，可認為兩變量間高度相關；0.5≤|γ|<0.8，可認為兩變量中度相關；0.3≤|γ|<0.5，可認為兩變量低度相關。故硼替佐米累計量與miR-324-5p表達量和miRNA-21表達量具有較高的相關性。

表3 硼替佐米累計量與miR-324-5p、miRNA-21表達量的相關性分析

3 討論

多發性骨髓瘤臨床較常見，最近幾年其發病率呈上升趨勢[6-7]。目前認為，多發性骨髓瘤主要特征是克隆性增殖，分泌大量的單克隆免疫蛋白球所引起一系列表現[8-9]。多發性骨髓瘤目前被認為是一種不可治愈疾病，進展期多發性骨髓瘤患者中位生存時間均為6個月[10]。有報道認為[11-12]，多發性骨髓瘤生存時間與取決于治療過程中盡早獲得完全緩解以及完全緩解狀態持續時間延長。硼替佐米是一種人工合成的二肽硼酸鹽類似物，為第一個蛋白酶體抑制劑，能夠通過與酶的活化點緊密結合來特異性和選擇性抑制蛋白酶體，從讓他調控細胞周期，激活轉錄因子[13-14]，從而抑制NF-κB 的激活從而抑制白介素-6的轉錄與分泌，促使細胞凋亡。硼替佐米累計量直接影響療效。有研究結果顯示[15-16]，硼替佐米累計量超過39 mg/m2后期生存時間明顯延長。miRNA-21在多種惡性腫瘤中高表達，通過抑制PTEN、PDCD4、TIMP3、TMP-1、RECK、p53等抑癌基因參與惡性腫瘤的發生和發展。既往研究結果顯示[17-18]，miRNA-21在惡性腫瘤中高表達，反義miRNA-21能抑制惡性腫瘤增殖。栗志磊等[19]研究結果顯示，miRNA-21表達與患者生存時間和療效關系密切，表達水平越高，患者生存期越短，預后越差，療效明顯不佳。而miRNA-21低表達患者病死風險較高表達患者明顯下降。外周血中miRNA-21水平升高，提示惡性腫瘤發生和發展風險增加。miR-324-5p定位在染色體17p13缺失上，在體內外均可檢測到。其表達水平直接影響某些惡性腫瘤的發生和發展。

miRNA對多發性骨髓瘤發病和耐藥的影響目前尚未完全明確。miRNA對是一類天然存在和進化上保守的小分子miRNA，不能翻譯成蛋白，但對基因的表達起到重要作用。miRNA參與多種生物學信號通路，在腫瘤病理情況下，其表達異常會引起細胞生長和發育過程的紊亂。在多發性骨髓瘤中，有miRNA表達上調的現象，也有miRNA下降的現象。同時，miRNA對多發性骨髓瘤有耐藥作用，其失調的具體機制即為復雜，與基因突變和異常表達有關。miRNA通過與耐藥調節因子和細胞周期相關蛋白相互作用，促使其耐藥。本文研究結果顯示，多發性骨髓瘤患者接受三期硼替佐米治療，其累計量隨著療程增加而增加，且miR-324-5p、miRNA-21表達量逐漸下降。硼替佐米累計量與miR-324-5p表達量、miRNA-21表達量呈負相關，其累計量越多，miR-324-5p表達量、miRNA-21表達量越低。分析原因主要有兩個，一是硼替佐米本身具有抑制腫瘤增長、浸潤的作用，三期治療逐漸增加藥量能提升抑制效果，改善病情。二是硼替佐米治療多發性骨髓瘤病情得到緩解，miR-324-5p、miRNA-21表達量逐漸下降。目前關于硼替佐米使用主要是皮下注射和低劑量硼替佐米化療方案，既能延長患者生存時間，抑制腫瘤生長，又能減少并發癥。

綜上所述，多發性骨髓瘤患者體內硼替佐米累計量與miR-324-5p、miRNA-21表達量關系密切，其累計量越大，miR-324-5p、miRNA-21表達量越低。