TGM2、CtBP2在胃癌及癌旁組織中的表達及意義分析

邢宏彬 張國強 楊勇豪

胃癌是由遺傳、飲食習慣、工作生活環境等多種因素導致的癌癥，其發病率每年遞增[1]。據報道，我國每年有70多萬人確診為胃癌，其5年復發率為30%～40%[2]。胃癌早期無典型癥狀，被發現時已是中晚期，影響預后。因此，胃癌的早期診斷意義重大[3]。轉谷氨酰胺酶2(transglutaminase-2，TGM2)是一種與Ca2+結合后，可以發生蛋白交聯變化的多功能蛋白，能通過誘導細胞外基質發生交聯反應，發揮細胞黏附作用。有研究報道，TGM2在乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌等多種癌癥中呈現高表達[4]。轉錄輔阻遏因子2(C-terminal binding protein 2，CtBP2)的主要功能是轉錄抑制，可與連接蛋白或DNA轉錄因子結合，召集啟動子，從而阻止基因表達。在肺癌中CtBP2通過靶基因去磷酸化，加快細胞增殖；在前列腺癌中激活相關信號通路，增加細胞侵襲能力；在乳腺癌中調節基因轉錄，促使細胞增殖。陸娟等[5]研究發現，CtBP2與卵巢癌的發生有關，在卵巢癌組織中，CtBP2可以沉默卵巢癌癌基因，減少癌細胞侵襲。但是關于TGM2和CtBP2與胃癌關系的報道較少，因此本研究探討TGM2和CtBP2在胃癌及癌旁組織中的表達及意義分析，旨在為胃癌的早期診斷提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采集本院于2018年1月至2018年12月收治的124例胃癌患者的癌組織，另取距癌邊緣5 cm處的癌旁組織為對照。納入標準：①經病理學檢查確診為胃癌；②年齡大于18周歲。排除標準：①合并其他胃部疾病患者；②合并心肝腎肺功能障礙和其他惡性腫瘤患者；③嗜酒患者；④精神類疾病患者；⑤化療和放療病史患者。其中，男性74例，女性50例；年齡38～79歲，平均(56.32±8.27)歲。

1.2 方法

對胃癌組織和癌旁組織進行免疫組化染色，操作嚴格按照試劑盒(廣州深達生物制品技術有限公司)說明書進行。①采用半定量積分法判定TGM2結果，TGM2陽性為細胞膜質中觀察到棕黃色染色。以染色強度計分：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無色0分。在光鏡(×200)下，隨機選取5個視野，陽性細胞百分比≥76%為4分，51%～75%為3分，26%～50%為2分，10%～25%為1分,<10%為0分。兩項的乘積得分≥6分為陽性，反之為陰性[6]。②采用半定量積分法判定CtBP2結果，CtBP2陽性為細胞核內有棕黃色染色。以染色強度計分：棕褐色3分，棕黃色2分，淺黃色1分，無色0分。在光鏡(×200)下，隨機選取5個視野，陽性細胞百分比大于80%為4分，51%～80%為3分，11%～50%為2分，小于10%為1分。兩項的乘積得分大于4分為高表達，反之低表達[7]。

1.3 隨訪

對本研究胃癌患者，于術后通過電話詢問、門診復診等方式隨訪，統計患者的死亡率，以患者死亡為觀察終點，隨訪截止時間是2020年12月。

1.4 觀察指標

癌組織和癌旁組織中TGM2和CtBP2的表達差異，并比較TGM2和CtBP2表達水平與臨床病理特征以及患者3年生存率的關系。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 兩組組織中TGM2和CtBP2表達情況比較(表1)

表1 兩組組織中TGM2和CtBP2表達情況比較/%

2.2 癌組織中TGM2表達水平與胃癌臨床病理特征的關系

TGM2在分化程度低、有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的胃癌組織中，陽性表達率高于分化程度高、無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的胃癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑的胃癌組織中無明顯差異(P>0.05)，見表2。

表2 TGM2表達水平與胃癌臨床病理的關系(例，%)

2.3 癌組織中CtBP2表達水平與其臨床病理特征關系

CtBP2在分化程度低的胃癌組織中，高表達率高于分化程度高的胃癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度和臨床分期的胃癌組織中無明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 CtBP2表達與胃癌臨床病理的關系(例，%)

2.4 不同TGM2和CtBP2表達水平與患者預后的關系

對124例胃癌患者進行隨訪，隨訪36個月，以患者胃癌復發死亡為觀察終點，死亡71例，3年總生存率是42.74%(53/124)。TGM2陰、陽性患者3年生存率分別是75.61%(31/41)、26.51%(22/83)，差異有統計學意義(χ2=27.038，P=0.000)，見圖1。CtBP2高、低表達者3年生存率分別是32.86%(23/70)、55.56%(30/54)，差異有統計學意義(χ2=6.418，P=0.011)，見圖2。

圖1 不同TGM2表達胃癌患者生存曲線圖

圖2 不同CtBP2表達胃癌患者生存曲線圖

3 討論

有報告統計，在全球易發的癌癥當中，胃癌可位于第五名，致使癌癥死亡的原因當中排名第三[8]。在中國，胃癌的發病率躍居第二名，死亡率也有較高水平，排名第三[9]。提高診治效果，延長患者的生存期，是臨床治療胃癌追求的目標。內鏡檢查能直接觀察到病灶，再通過染色、放大等操作對不典型或者疑似病灶進行評估，進而幫助胃癌早期診斷，被稱為消化道早癌診斷的金標準。日本有研究報道，內鏡檢查因其造成的手術創傷小，患者痛苦少且術后恢復快，所帶來的效益比消化道鋇餐X線更高[10]。但是，內鏡檢查需要依靠設備和醫師力量，并且由于需要將設備伸入人體內部，有可能導致并發癥，對于經驗不足的醫師，因操作失誤可能會釀成嚴重后果，因此患者的依從性差，而腫瘤標志物檢測普遍為大眾患者所接受。本研究通過探討TGM2和CtBP2在胃癌及癌旁組織中的表達及意義分析，旨在為胃癌的早期診斷提供新思路。

有很多學者探索胃病的發病原因，但仍未有明確的結果[11]。轉谷氨酰胺酶家族，在許多研究癌癥的文獻中有過報道[12]。TGM2與其他轉谷氨酰胺酶成員不同的是，它與Ca2+依賴性交聯，Ca2+的水平以及TGM2和三磷酸鳥苷結合的結果決定了TGM2的功能，即TGM2是加速細胞凋亡還是保護細胞避免凋亡。本研究結果提示TGM2參與了胃癌的發生和發展，可以作為胃癌早期診斷的監測指標，并能評估胃癌的進展。Torres等[13]通過比較健康受試者以及子宮內膜異位癥和子宮內膜癌患者中，TGM2在血漿樣本的水平，并采用回歸分析發現TGM2能成為子宮內膜癌診斷的標志物。譚智軍等[14]分析TGM2表達和結腸癌臨床病理特征的關系，發現TGM2表達與淋巴結轉移和臨床分期有關，從而提示TGM2參與了結腸癌疾病的發生和發展，可以用來評估病情。本研究結論與上述研究一致。TGM2在胃癌組織中，可以調節細胞外信號的通路，促進癌細胞增殖、分化、轉移，同時TGM2能促進癌細胞轉化為侵襲性更強的基質細胞，加速癌細胞的擴散。TGM2陰性患者3年生存率高于陽性患者，提示TGM2與胃癌預后密切相關，與安健健等[15]研究結論相符。

CtBP2在腫瘤的基因轉錄中表現出不同的性質，它可以與腫瘤的轉錄因子結合形成轉錄復合物，從而促進腫瘤基因表達；此外，它還能召集相關蛋白酶阻止DNA轉錄。本研究結果提示CtBP2參與了胃癌的發生和發展，可以作為胃癌早期診斷的監測指標，并能評估胃癌的進展。郭春芳等[16]研究發現，CtBP2參與了卵巢癌的發生，并且與淋巴結轉移、腫瘤分級、臨床分期有關，可以作為早癌診斷的標志物，本研究結論與其一致。CtBP2能降低鈣黏蛋白的水平，加快上皮間質轉化過程，從而提高腫瘤在胃癌組織中的侵襲能力。CtBP2低表達患者3年生存率高于高表達患者，提示CtBP2與胃癌預后密切相關。

綜上所述，TGM2和CtBP2在胃癌組織中表達水平比癌旁組織中更高；TGM2表達水平與分化程度、臨床分期和淋巴結轉移有關，CtBP2表達水平與分化程度有關；且TGM2陰性率和CtBP2低表達胃癌患者的生存率更高。TGM2和CtBP2可以作為胃癌疾病早期診斷的標志物，并能用于病情評估和預后判斷。