桑葚花色苷提取物對乙醇誘導的小鼠肝損傷和死亡率的影響

除了限制飲酒外， 目前， 對于酒精性肝病(ALD)的治療尚無特效藥。 特別是進展到后期， 更多是采取對癥治療的方法。 肝臟作為酒精代謝的主要器官， 過量酒精攝入會給肝臟帶來巨大負擔， 選擇一種安全有效副作用小的防治策略勢在必行。 來自于食物中的生物活性成分有望成為防治酒精性肝病的潛在療法。 矢車菊素-3-O-葡萄糖苷(Cy-3-G) 廣泛存在于深色蔬菜及水果中， 是膳食花青素中最具代表性及含量最豐富的一種食物活性成分， 具有強效的抗炎、 抗氧化作用。 Cy-3-G 對非酒精性脂肪肝、 肥胖、 動脈粥樣硬化及高血糖等代謝性疾病均具有保護作用

。 本課題組既往研究也發現， 在8w的酒精性肝炎及12w 的酒精性肝纖維化模型中， Cy-3-G補充可以改善高脂及酒精長期聯合喂養導致的小鼠肝損傷

， 但是Cy-3-G 對于急性酒精性肝損傷的保護作用仍不明確。 本研究通過構建短期及長期NIAAA 模型(又稱Gao-Binge 模型) 來全面探討桑葚花色苷提取物Cy-3-G 對短期或長期過量飲酒小鼠的健康保護效應， 為酒精性肝病的防治提供一個新思路。 此模型將慢性乙醇喂養與單次或多次大劑量乙醇灌胃相結合， 更好的模仿了大多數酒精性肝病患者的飲酒模式， 也是目前研究酒精性肝病較為公認且應用較廣泛的動物模型。

1 材料與方法

1.1 試劑

Cy-3-G， 從桑葚中提取， 具體提取步驟參照[7]；95%乙醇(中國， 阿拉丁)； Lieber-DeCarli 標準型酒精液體飼料、 Lieber-DeCarli 對照液體飼料， 中國， 南通特洛菲； 總膽固醇(TC) 檢測試劑盒， 中國， 普利來；天門冬氨酸氨基轉移酶( AST) 、 丙氨酸氨基轉移酶(ALT) 檢測試劑盒， 中國， 南京建成； 內毒素檢測鱟試劑盒(中國， 廈門鱟試劑)； Trizol， 美國， Invitrogen；cDNA 合成試劑盒、 SYBR Green Supermix 試劑盒， 日本， Takara。

1.2 動物分組與造模

所有動物實驗均獲得中山大學動物倫理委員會批準(2012-0080)。 SPF 級4W 齡雄性C57BL/6J 小鼠購自廣東省實驗動物中心， 飼養于在中山大學公共衛生學院的SPF 級動物房。 環境溫度維持在25℃， 每天接受照明時間為12 h。

1.2.1 短期NIAAA 模型 將8w 齡小鼠隨機分為3 組:對照液體飼料喂養組(CTRL 組， n ＝8)、 酒精液體飼料喂養組(EtOH 組， n ＝8)、 酒精液體飼料喂養加Cy-3-G 干預(EtOH+Cy-3-G 組， n ＝8)。 EtOH 組和EtOH+Cy-3-G 組給予Lieber-DeCarli 標準型酒精液體模型飼料(5%

乙醇)， CTRL 組給予Lieber-DeCarli 對照液體飼料

。 使用液體飼料喂養3 組小鼠10d； 并于第11天清晨對EtOH 組和EtOH +Cy-3-G 組給予一次大劑量乙醇(5 g/kg BW) 灌胃， CTRL 組給予等熱量麥芽糊精灌胃， 8 h 后處死。 Cy-3-G 每天以200 mg/kg BW 進行灌胃， EtOH 組和CTRL 組用等體積生理鹽水進行灌胃。各組小鼠干預期間實行等熱量喂養， 依據EtOH 組進食情況來控制CTRL 組飼料給予量。

1.2.2 長期NIAAA 模型 將8w 齡小鼠隨機分為3 組:對照液體飼料喂養組(CTRL 組， n ＝9)、 酒精液體飼料喂養組(EtOH 組， n ＝12)、 酒精液體飼料喂養加Cy-3-G 干預(EtOH+Cy-3-G 組， n ＝12)。 EtOH 組和EtOH+Cy-3-G 組提供Lieber-DeCarli 標準型酒精液體模型飼料(5%

乙醇)， CTRL 組給予Lieber-DeCarli 對照液體飼料

。 使用液體飼料喂養3 組小鼠共4w， 并于第7、 14、 21、 28 天清晨對EtOH 組和EtOH+Cy-3-G 組給予一次大劑量乙醇(5 g/kg BW) 灌胃， CTRL 組以灌胃方式給予等熱量麥芽糊精， 并于第28 天大劑量乙醇灌胃8h 后處死小鼠。 Cy-3-G 每天以200 mg/kg BW 通過灌胃方式給予EtOH+Cy-3-G 組小鼠， EtOH 組和CTRL 組小鼠用等體積生理鹽水進行灌胃。 各組小鼠干預期間實行等熱量喂養， 依據EtOH 組進食情況控制CTRL 組飼料給予量。

1.3 肝臟切片H＆E 染色

本研究通過綜合應用短期和長期NIAAA 酒精模型來探討Cy-3-G 對乙醇誘導的小鼠酒精性肝損傷及死亡率的影響， 結果發現， 補充Cy-3-G 可緩解短期過量乙醇攝入引起的小鼠肝臟脂肪變性及肝功能損傷， 減輕肝臟炎癥反應， 并且可以有效預防長期過量乙醇攝入導致的小鼠死亡， 保護小鼠健康。

1.4 肝臟總膽固醇(TC) 檢測

小鼠使用戊巴比妥鈉麻醉后， 經眼眶取血， 對小鼠實施脫臼處死后進行解剖， 收集肝臟樣本， 分裝并保存于-80℃冰箱中。 取分裝好的肝臟約30 mg， 按1 mg 組織20 μL 組織裂解液的比例加入試劑盒提供的專用裂解液，使用高通量組織研磨儀制備肝勻漿。 取肝勻漿嚴格按照普利來試劑說明對肝臟甘油三酯(TG)、 總膽固醇(TC) 進行檢測。

1.5 血清天冬氨酸轉氨酶(AST)、 丙氨酸轉氨酶(ALT) 檢測

在11d 的短期NIAAA 模型中， 3 組小鼠的平均體重與平均日攝食量在喂養期間沒有統計學差異(

＞0.05)(圖1A、 B)， 表明實驗過程中在3 組小鼠間嚴格執行了等熱量喂養。

1.6 血清內毒素(LPS) 檢測

小鼠用戊巴比妥鈉麻醉后， 經眼眶取血， 用無菌EP 管收集血液， 室溫放置1 h 后于4 ℃， 3 000 r/min 條件下離心30 min， 取上清進行檢測。 具體檢測步驟嚴格按照廈門鱟試劑內毒素檢測鱟試劑盒說明進行操作。

1.7 肝臟炎癥因子檢測

血清中ALT 和AST 活性是反映肝功能的可靠性指標， 在正常情況下， ALT 和AST 主要分布在肝細胞的線粒體中。 當受到外源性毒物的損害時， 這兩種轉氨酶會透過受損的肝細胞膜進入血液， 引起血清酶水平的升高

。 本實驗中血清ALT 和AST 水平增加提示肝功能受損。 然而， 補充Cy-3-G 可以預防乙醇喂養引起的肝臟脂質蓄積及血清ALT 和AST 水平升高， 有效改善肝功能。 Cy-3-G 對于肝臟的保護作用在既往研究中已有報道， 其可以減輕高脂膳食誘導的小鼠肝臟氧化應激和脂肪變性， 預防非酒精性脂肪肝的發生

。

1.8 統計分析

這節課的主題是“WHAT MAKES A GOOD QUESTION？”（怎樣能提出一個好問題？）。問題一出，同行的老師禁不住悄悄問：“這是歷史課嗎？”這時，老師假設情境：假如你遇到一位多年前來自中國的移民，你想問他些什么問題？什么樣的問題是一個好問題？老師要求每個學生寫出五個問題。寫完后，兩三人一組交流，再進行班級交流，學生踴躍舉手發言。至此，我們才反應過來，原來這位老師是把歷史知識當成了問題探究的素材，我們不禁暗自叫好。

2 結果與分析

2.1 短期NIAAA 模型中3 組小鼠體重及日攝食量

小鼠用戊巴比妥鈉麻醉后， 經眼眶取血， 用無菌EP 管收集血液， 室溫放置1 h 后于4 ℃， 3 000 r/min 條件下離心30 min， 取上清嚴格按照南京建成試劑盒說明對血清中天冬氨酸轉氨酶(AST)、 丙氨酸轉氨酶(ALT) 的活性進行檢測。

2.2 短期NIAAA 模型中Cy-3-G 對小鼠肝臟組織的影響

肝臟組織病理切片的H＆E 染色結果顯示， 與CTRL組相比， EtOH 組小鼠的肝細胞表現出彌漫性脂肪變，內部可見大小不等、 數量不一的脂滴， 并且肝細胞排列紊亂、 肝索紋理不清， 肝臟出現明顯的炎性細胞浸潤；而EtOH+Cy-3-G 組肝細胞內脂滴數量顯著減少， 肝索紋理清晰呈放射狀排列， 肝臟炎性細胞浸潤明顯減輕，與CTRL 組結構類似(圖2A)。 進一步對肝臟總膽固醇(TC) 水平進行檢測， 結果顯示， 同CTRL 組比， EtOH組小鼠肝臟TC 水平升高(

＜0.01)， 而EtOH+Cy-3-G組肝臟TC 水平較EtOH 組降低(

＜0.05) (圖2B)，表明補充Cy-3-G 對短期過量乙醇攝入引起的酒精性脂肪肝具有保護作用。

2.3 短期NIAAA 模型中Cy-3-G 對小鼠血清中AST、ALT 活性的影響

EtOH 組小鼠血清中AST 活性高于CTRL 組(

＜0.05)， 而EtOH+Cy-3-G 組血清中AST 活性較EtOH 組降低(

＜0.01) (圖3A)。 同樣， 乙醇喂養使得小鼠血清中ALT 活性增加(

＜0.05)， 而Cy-3-G 有預防乙醇喂養引起的血清ALT 活性增加的趨勢， 但差異無統計學意義(

＞0.05) (圖3B)。 以上結果提示， 補充Cy-3-G在一定程度上可以預防急性酒精性肝功能損傷。

通過對歌詞內容提問，讓學生在腦子里初步形成感知。通過實踐體驗給每一位體驗者大腦皮層留下深刻的印象。在體驗中，學生心靈更加放松，感悟也會在大腦中越來越清晰。層層遞進的問題引得學生對主題的感悟一步步深入、明晰。詩歌的跟進使班會達到了高潮，學生們內心燃起了共鳴，達到了老師預期的教育效果！

2.4 短期NIAAA 模型中Cy-3-G 對小鼠血清LPS 的影響

過量飲酒會引起腸道功能損傷， 一方面導致腸道菌群紊亂， 另一方面使得腸道通透性增加， 促使LPS 等菌群副產物透過腸道屏障進入門靜脈， 加劇對肝臟的損傷

。 因此， 進一步對血清LPS 水平進行檢測。 對比CTRL 組， EtOH 組小鼠血清LPS 水平升高(

＜0.01)，EtOH+Cy-3-G 組小鼠的血清LPS 水平較EtOH 組降低(

＜0.01) (圖4)。

隨著惡性腫瘤治療手段的不斷發展，腫瘤患者的生存期逐漸延長，隨之轉移瘤的檢出率也越來越高。據統計，約有20%～54%的惡性腫瘤會在疾病的演變過程中發生肺部轉移[1]。因為肺存在龐大的毛細血管網且位于循環系統中樞，所以肺成為惡性腫瘤轉移最常見的器官之一[2]。肺轉移瘤發生轉移的時間早晚不一，無規律可循。肺轉移瘤是惡性腫瘤的晚期表現，外科治療是否可以提高患者生存率及生活質量仍存在一定爭議。本文回顧性分析2007年1月至2017年1月大連醫科大學附屬第一醫院胸外科收治行肺轉移瘤手術患者的臨床資料，擬探討肺轉移瘤手術切除適應證及術式、肺轉移瘤診斷、術后療效及影響預后的相關因素。

對于航空制造業領域知識的分類，是通過對技術內容的概括及某些特征的概念進行邏輯分類和系統排列而構成，構建航空技術分類模型，為使用者提供設計準則、技術支持及決策依據，能夠最大化利用航空制造業領域知識。對于航空技術多領域知識的分類，從航空技術的屬性、用途、學科及主題著手，需要多層次多維度的進行分類歸納，構建描述預先定義好的屬性、學科或概念的分類規則，按照航空制造業領域知識的適用范圍和來源、原理和功能、描述對象等多個方向進行劃分，建立如圖1的航空制造業領域知識分類模型。

2.5 短期NIAAA 模型中Cy-3-G 對小鼠肝臟炎癥因子的影響

LPS 與Toll 樣受體4 (TLR4) 結合進一步激活Kupffer 細胞產生各種炎癥因子和趨化因子， 引起肝臟炎癥反應。 EtOH 組小鼠肝臟

1

、

、

1 mRNA水平較對照組明顯升高(

＜0.05)， 而Cy-3-G 可以有效預防乙醇喂養引起的炎癥因子

1

、

、

1 mRNA 水平的升高(

＜0.05)。 圖5 結果表明， Cy-3-G補充可以明顯改善乙醇喂養引起的小鼠肝臟的炎癥反應。

2.6 長期NIAAA 模型中Cy-3-G 對小鼠死亡率的影響

與CTRL 組相比， 長期過量乙醇攝入使得小鼠死亡率顯著增加， 而EtOH+Cy-3-G 組小鼠的死亡率明顯低于EtOH 組(表2)。 如圖6 所示， 經log-rank 檢驗差異具有統計學意義(

＜0.01)。 結果提示， 通過補充Cy-3-G 可以預防長期過量乙醇攝入導致的小鼠死亡。

怎么，竹韻結婚八年還是處女?此證一出，全場嘩然，旁聽席上的觀眾交頭接耳議論起來，審判臺上，包括原告、被告、審判人員都愕然了，過了好一會，審判長才說了聲安靜，接著宣布此鑒定有效，可以作為證據采信，請原告繼續陳述。

3 討論

小鼠使用戊巴比妥鈉麻醉后， 脫臼處死， 解剖取肝臟組織， 切取一小塊肝臟組織迅速放入裝有4% 多聚甲醛的EP 管中， 室溫保存。 對肝臟組織進行石蠟包埋后，切成5~8 μm 厚度均勻的薄片。 脫蠟后將切片浸泡入蘇木素染液中3 ~8 min 對細胞核進行染色， 清水沖洗15min。 接下來將石蠟切片浸泡到伊紅染液中1 ~3 min對細胞質進行染色， 清水沖洗15 min。 脫水處理后， 在通風櫥中使用中性樹膠進行封片。 使用顯微鏡進行切片觀察并拍照保存。

使用GraphPad Prism 8.3.0 和SPSS 26.0 進行統計分析和繪圖。 采用單因素方差分析分析各組間定量數據的統計差異。 使用卡方檢驗分析各組間定性數據的統計差異。 數據表示為均數±標準誤，

＜0.05 被認為具有統計學意義。

稱取20 mg 肝臟， 使用Trizol 從肝臟中提取總RNA。對提取的總RNA 濃度及純度進行檢測后， 使用cDNA 合成試劑盒將1 μg RNA 逆轉錄為cDNA。 以

為內參， 采用SYBR Green Supermix 試劑盒配置反應體系進行實時熒光定量PCR， 檢測白介素-1β (

1

)、 腫瘤壞死因子-α (

) 和巨噬細胞趨化蛋白-1 (

1)的相對表達量， 并使用比較閾值周期(ΔΔCt) 方法量化相對倍數變化。 實驗所用引物見表1。

炎癥反應在ALD 的發生發展過程中發揮重要作用，減輕肝臟炎癥反應可以顯著延緩ALD 進程。 Aditya等

發現， 使用cenicriviroc (CCR2/5 阻斷劑) 對乙醇喂養小鼠進行干預， 可以抑制肝臟巨噬細胞浸潤， 減輕炎癥反應， 從而對酒精性肝損傷起到保護作用。 Jayachitra 等

認為， 柚皮苷通過降低促炎細胞因子表達減輕肝臟炎癥反應對乙醇誘導的大鼠肝損傷起保護作用。Cy-3-G 作為花青素中最普遍且性質穩定的一種形式， 具有同花青素一樣高效的抗炎、 抗氧化的作用

。 本課題組先前的研究中也有報道， 在8w 的高脂加乙醇誘導的小鼠酒精性肝炎模型中， Cy-3-G 可以抑制NLRP3 炎癥小體活化和炎癥細胞因子在肝臟中的表達

， 保護肝臟健康。 本研究結果也顯示， Cy-3-G 補充顯著改善了肝臟炎細胞浸潤并降低促炎細胞因子

1

、

、

1 的表達， 減輕肝臟炎癥。 結果表明， Cy-3-G 的保肝作用可能與其降低酒精喂養小鼠肝臟炎癥水平有關。

越來越多的證據表明， 酒精性肝病的發病機制與腸-肝軸密切相關

。 飲酒會導致腸道菌群失調， 破壞腸道屏障， 從而導致LPS 透過腸道由門靜脈到達肝臟

。 LPS 與TLR4 結合激活Kupffer 細胞產生各種促炎細胞因子和趨化因子， 例如

1

、

、

6、

8、 巨噬細胞趨化蛋白-1 (

1) 等， 促進ALD 的發生發展

。 研究發現， 通過補充益生菌或維生素D 可以減少酒精誘導的LPS 釋放入血， 進而減緩ALD 的進程

。 因此， 保護腸道健康防止LPS 釋放入血對預防肝損傷具有十分重要的意義。 Cy-3-G 對腸道菌群的調節和腸道屏障的保護作用在先前的研究中已有報道

。本實驗中我們也觀察到， 乙醇喂養使得小鼠血清中LPS水平增加， 而Cy-3-G 可以預防乙醇喂養引起的小鼠血清LPS 水平增加， 表明Cy-3-G 對酒精性肝損傷小鼠腸道功能損傷具有一定修復作用， 從而減少了LPS 的滲漏， 這可能是其減輕肝臟炎癥反應改善肝功能的作用機制之一。

3.離子交換法。用無機或有機物組成一混合凝膠，形成交換劑核，四周包圍兩層不同電荷的雙電層，水通過后可發生離子交換。陽離子交換劑：含H+、Na+固體與Ca2+、Mg2+交換；陰離子交換劑：含堿性基因，能與水中陰離子交換。經過離子交換后，硬水得到軟化。

進一步使用4w 的長期NIAAA 模型構建更嚴重的酒精性肝損傷模型來進一步探討Cy-3-G 的保護作用， 結果發現， 在長期NIAAA 模型中EtOH 組小鼠的死亡率明顯增加。 這一現象與H.W.等

的研究結果一致。 然而Cy-3-G 補充可以有效預防長期乙醇攝入引起的小鼠死亡， 但其保護機制是否與肝損傷有關尚不可知。 因此，在未來， 我們將選擇更合適的模型來進一步探討Cy-3-G對長期過量乙醇攝入小鼠的肝損傷的影響。

本研究選用日常乙醇喂養加單次或多次大劑量乙醇灌胃的NIAAA 模型， 更好地模擬了大多數酒精性肝病患者的飲酒模式， 這些患者一般具有多年長期飲酒和近期過度飲酒的病史

， 并通過結合短期和長期模型來綜合探討Cy-3-G 對酒精性肝損傷和小鼠健康的保護作用。 本研究首次報道了Cy-3-G 能顯著改善短期過量乙醇攝入引起的小鼠肝損傷并且可以有效預防長期過量乙醇攝入造成的小鼠死亡。 但本研究也存在一定的缺點，本研究觀察到Cy-3-G 補充可以有效預防長期乙醇攝入引起的小鼠死亡， 但未進一步其相關機制進行探討。

將該養殖場病死的5只羊全部解剖，發現5只羊身體嚴重消瘦，皮下脂肪消失，出現嚴重貧血癥狀；病死羊體內血液稀薄如水，呈現粉紅色，但能正常凝固；腸系膜病變嚴重，高度充血水腫，腸系膜淋巴結外觀呈現灰色，各個臟器普遍存在貧血癥狀；打開病死羊的真胃和小腸，發現內部存在長度1.5～3 cm的線蟲，外觀呈現淡紅色；在病死羊的腸壁粘膜上，還能發現存在大量白色的結節，結節內部存在干酪狀的物質。

綜上所述， 桑葚花色苷提取物Cy-3-G 對短期過量乙醇攝入造成的小鼠肝損傷具有保護作用， 其保護機制可能是通過抑制LPS 釋放從而減輕肝臟炎癥反應實現的。 此外Cy-3-G 可以有效預防長期過量乙醇攝入導致的小鼠死亡。 研究結果提示， 桑葚花色苷提取物Cy-3-G有望作為膳食補充劑應用于防治酒精性健康損害。

[1]Wei X， Wang D， Yang Y， et al.Cyanidin-3-O-beta-glucoside improves obesity and triglyceride metabolism in KK-Ay mice by regulating lipoprotein lipase activity [J].J Sci Food Agric， 2011，91(6):1006-1013.

[2]Speciale A， Canali R， Chirafisi J， et al.Cyanidin-3-O-glucoside protection against TNF-alpha-induced endothelial dysfunction: involvement of nuclear factor-kappaB signaling[J].J Agric Food Chem， 2010，58(22):12048-12054.

[3]Valenti L， Riso P， Mazzocchi A， et al.Dietary anthocyanins as nutritional therapy for nonalcoholic fatty liver disease[J].Oxid Med Cell Longev， 2013，2013:145421.

[4]Jia Y， Wu C， Kim Y S， et al.A dietary anthocyanin cyanidin-3-O-glucoside binds to PPARs to regulate glucose metabolism and insulin sensitivity in mice [J].Commun Biol，2020，3(1):514.

[5]Zhou Y， Wang S， Wan T， et al.Cyanidin-3-O-beta-glucoside inactivates NLRP3 inflammasome and alleviates alcoholic steatohepatitis via SirT1/NF-kappaB signaling pathway [J].Free Radic Biol Med， 2020，160:334-341.

[6]Wan T， Wang S F， Ye M T， et al.Cyanidin-3-O-beta-glucoside protects against liver fibrosis induced by alcohol via regulating energy homeostasis and AMPK/autophagy signaling pathway [J].Journal Of Functional Foods， 2017，37:16-24.

[7]Guo H， Ling W， Wang Q， et al.Effect of anthocyanin-rich extract from black rice (

L.

) on hyperlipidemia and insulin resistance in fructose-fed rats [J].Plant Foods Hum Nutr， 2007，62(1):1-6.

[8]Bertola A， Mathews S， Ki S H， et al.Mouse model of chronic and binge ethanol feeding (the NIAAA model) [J].Nat Protoc， 2013，8(3):627-637.

[9]Meroni M， Longo M， Dongiovanni P.Alcohol or gut microbiota: Who is the guilty? [J].Int J Mol Sci， 2019，20(18):4568.

[10]Conigrave K M， Davies P， Haber P， et al.Traditional markers of excessive alcohol use [J].Addiction， 2003，98(Suppl 2):31-43.

[11]Li X， Shi Z， Zhu Y， et al.Cyanidin-3-O-glucoside improves non-alcoholic fatty liver disease by promoting PINK1-mediated mitophagy in mice [J].Br J Pharmacol， 2020，177(15):3591-3607.

[12]Ambade A， Lowe P， Kodys K， et al.Pharmacological inhibition of CCR2/5 signaling prevents and reverses alcoholinduced liver damage， steatosis， and inflammation in mice[J].Hepatology， 2019，69(3):1105-1121.

[13]Jayaraman J， Jesudoss V A， Menon V P， et al.Anti-inflammatory role of naringenin in rats with ethanol induced liver injury [J].Toxicol Mech Methods， 2012，22(7):568-576.

[14]Li X， Yao Z， Yang D， et al.Cyanidin-3-O-glucoside restores spermatogenic dysfunction in cadmium-exposed pubertal mice via histone ubiquitination and mitigating oxidative damage [J].J Hazard Mater， 2020，387:121706.

[15]Szabo G， Petrasek J.Gut-liver axis and sterile signals in the development of alcoholic liver disease [J].Alcohol Alcohol， 2017，52(4):414-424.

[16]Shao T， Zhao C， Li F， et al.Intestinal HIF-1alpha deletion exacerbates alcoholic liver disease by inducing intestinal dysbiosis and barrier dysfunction [J].J Hepatol， 2018，69(4):886-895.

[17]Rao R.Endotoxemia and gut barrier dysfunction in alcoholic liver disease [J].Hepatology， 2009，50(2):638-644.

[18]Tu Y， Zhu S， Wang J， et al.Natural compounds in the chemoprevention of alcoholic liver disease [J].Phytother Res， 2019，33(9):2192-2212.

[19]Robinson K E， Shah V H.Pathogenesis and pathways:nonalcoholic fatty liver disease ＆ alcoholic liver disease [J].Transl Gastroenterol Hepatol， 2020，5:49.

[20]Szabo G.Gut-liver axis in alcoholic liver disease [J].Gastroenterology， 2015，148(1):30-36.

[21]韓建敏， 劉穎， 郭曉飛， 等.維生素D 對酒精暴露大鼠肝功能及腸道菌群的保護作用[J].營養學報， 2021，43(3):247-254.

[22]梁惠， 呂銳， 傅泳， 等.益生菌對大鼠酒精性肝損傷的保護作用及機制研究[J].中國藥理學通報， 2016，32(7):991-997.

[23]Chen G， Wang G， Zhu C， et al.Effects of cyanidin-3-Oglucoside on 3-chloro-1， 2-propanediol induced intestinal microbiota dysbiosis in rats [J].Food Chem Toxicol，2019，133:110767.

[24]Tan J， Li Y， Hou D X， et al.The effects and mechanisms of Cyanidin-3-Glucoside and its phenolic metabolites in maintaining intestinal integrity [J].Antioxidants (Basel)，2019，8(10):479.

[25]Li B， Cheng Z， Sun X， et al.

L.polyphenols alleviate oxidative stress-induced intestinal environment imbalance and lipopolysaccharide-induced liver injury in HFD-fed rats by regulating the Nrf2/HO-1/NQO1 and MAPK pathways [J].Mol Nutr Food Res， 2020，64(10):e1901315.

[26]Cheng Z， Si X， Tan H， et al.Cyanidin-3-O-glucoside and its phenolic metabolites ameliorate intestinal diseases via modulating intestinal mucosal immune system: potential mechanisms and therapeutic strategies [J].Crit Rev Food Sci Nutr， 2021:1-19.

[27]Bertola A， Mathews S， Ki S H， et al.Mouse model of chronic and binge ethanol feeding (the NIAAA model)[J].Nat Protoc， 2013，8(3):627-637.

[28]Mathurin P， Lucey M R.Management of alcoholic hepatitis[J].J Hepatol， 2012，56(Suppl 1):S39-S45.

[29]Altamirano J， Bataller R.Alcoholic liver disease: pathogenesis and new targets for therapy [J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol， 2011，8(9):491-501.