卡式微柱凝膠技術在血型鑒定及輸血前紅細胞不規則抗體檢驗中的作用

羅純生，周 揚，展秀君

（1.佳木斯市中心血站檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002；2.佳木斯市中醫醫院檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002）

輸血（blood transfusion）是臨床治療疾病的措施和搶救急危重癥患者的有效手段，利于維持患者生命安全，具有較高的臨床應用價值。但在輸血過程中，不規則抗體容易引起不良反應，嚴重影響治療者的身體健康[1，2]。因此，輸血前進行血型鑒定是預防輸血不良事件、確保輸血安全的關鍵。目前，臨床血型鑒定方法較多，主要包括試管法、蛋白酶法、聚凝胺法、抗體人球蛋白法等，其中試管法是血型鑒定的“金標準”方法，但其操作復雜、耗時較長，臨床應用具有一定的局限性[3]。因此，尋找一種科學合理、簡便的檢驗方式是當前迫切需要解決的問題之一。卡式微柱凝膠技術是一種現代化檢驗方式，與傳統方式比較，其可避免配血期間對紅細胞的反復洗滌，一定程度改善檢驗靈敏度[4，5]。但是卡式微柱凝膠技術在血型鑒定及輸血前紅細胞不規則抗體檢驗中的作用尚未完全明確，需要臨床進一步探究證實[6]。基于此，本研究主要觀察卡式微柱凝膠技術在血型鑒定及輸血前紅細胞不規則抗體檢驗中的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月-2021 年12 月佳木斯市中醫醫院送佳木斯市中心血站進行配血的200例輸血患者為研究對象，其中男109 例，女91 例；年齡31～85 歲，平均年齡（63.14±3.08）歲。本研究患者自愿參加，并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準 納入標準：①無輸血治療禁忌證[7]；②認知、精神正常。排除標準：①合并肝、腎、心、腦血管系統等嚴重疾病者；②合并嚴重血液系統疾病；③依從性較差，不能配合者；④隨訪資料不完善者。

1.3 方法 所有研究對象均進行血型鑒定及輸血前紅細胞不規則抗體檢驗，以試管法檢測為金標準。

1.3.1 試管法 取晨起空腹外周靜脈血2 ml，置于乙二胺四乙酸二鉀抗凝真空無菌采血管內，標本要求：正定型：取5%的ABO 紅細胞懸液1 滴，然后分別加1 滴抗-A、抗-B、抗-D 血清，輕搖混勻后離心15 min；反定型：取樣本血漿2 滴，分別加標準的A、B、O 細胞懸液1 滴，混勻后離心，然后依據根據《輸血技術學》[8]試管法操作標準對患者的血型進行鑒定。

1.3.2 聚凝胺法 采用改良凝聚胺試劑盒（上海血液生物醫藥有限公司，國械注準20163400557），取4支相同試管，分別標記為對照管、Ⅰ管、Ⅱ管、Ⅲ管，對照管中裝陽性對照組血漿，加入1 滴獻血者3%～5%的紅細胞；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中分別裝受血者血漿2滴，加入1 滴3%～5%的不規則抗體篩選紅細胞，所有檢測試管加入0.6 ml 的低離子溶液，混合均勻后置于室溫下孵育1 min；同時，所有試管置入2 滴凝聚胺溶液，混合均勻后以3100 r/min 離心1 min 后，棄去上層清夜，檢測紅細胞是否出現凝聚反應，若未見凝集則需要重做；最后滴入2 滴重懸液，輕輕搖動觀察結果，若是由凝聚胺引起的紅細胞非特異性凝集應在1 min 內散開，若是由免疫抗體引起的凝集反應則不會完全散開。嚴格按照改良凝聚胺試劑盒說明書進行操作[9]。

1.3.3 卡式微柱凝膠技術 采用微柱凝膠卡（美國BIO-RAD 公司，規格：6×AHG），取篩選紅細胞中壓積紅細胞10 μl，置于紅細胞稀釋液（1.2 ml）中，觀察懸液顏色呈均勻淺紅色且無絮狀物后向微柱凝膠卡中加入1.0%混合篩選細胞50 μl 和受測者懸液25 μl，隨后置于37 ℃的卵育器中卵育15 min，然后以1500 r/min 速率離心3 min 取出觀察。嚴格按照卡微柱凝膠卡說明書進行操作[10]。

1.4 觀察指標 比較兩種檢驗方法血型鑒定準確率、紅細胞不規則抗體檢出率。

1.4.1 聚凝胺法結果判定[11，12]陽性：紅細胞不完全散開，即出現凝集反應；陰性：紅細胞迅速散開，并在1 min 內完全散開則無凝集反應，表示血型合適。

1.4.2 卡式微柱凝膠法結果判定[13]陽性：凝集的紅細胞在凝膠表面形成一條紅線，或凝集物分散在凝膠中端或表面；陰性：紅細胞在凝膠管底部處紅細胞完全降解，形成密集的扣形物，表示血型合適。

1.5 統計學方法 采用統計軟件包SPSS 21.0 對本研究數據進行處理，計數資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 試管法鑒定血型結果 200 例輸血患者經試管法檢測，結果顯示正反定型符合率為90.50%（181/200），正反正型不符合率為9.50%（19/200）。

2.2 兩種檢驗方法血型鑒定準確率比較 卡式微柱凝膠技術ABO、RhD 血型鑒定準確率均高于聚凝胺法（P＜0.05），見表1。

表1 兩種檢驗方法血型鑒定準確率比較[n（%）]

2.3 兩種檢驗方法紅細胞不規則抗體檢出率比較卡式微柱凝膠技術檢驗不規則抗體陽性率高于聚凝胺法（P＜0.05），見表2。

表2 兩種檢驗方法紅細胞不規則抗體檢出率比較[n（%）]

3 討論

輸血是臨床常用的治療方法，需要遵循輸同型血原則，但臨床受血液、血液制品抗原、抗體成分多樣性的影響，可能發生不同程度、不同類型的不良反應，尤其異體/自提輸血、免疫刺激等產生的不規則抗體可導致血型正反定型不符，從而影響輸血安全性。因此，輸血前應重視對不規則抗體的篩查，提高輸血安全性的同時，實現良好的輸血臨床作用。常規的輸血檢驗方法具有自動化程度低、人為干擾因素多、操作流程缺乏標準化、最低檢測限較高等不足，會影響不規則抗體檢測結果的準確性[14]。臨床需要輸血治療的患者通常為危急重癥患者，如不及時輸血，可能致殘，甚至致死；若輸注血型不匹配血漿，可引起急性溶血反應，造成血管內溶血，嚴重威脅患者的生命安全[15]。相關研究顯示[16]，不規則抗體引起的輸血反應，主要以免疫溶血反應為主，由于免疫刺激的產生，從而對相應的紅細胞產生致敏作用，并且會直接影響抗體（IgG）效應。而抗-c、抗-C、抗-e、抗-D、抗-E 均屬于IgG 抗體[17]。研究表明[18]，卡式微柱凝膠技術能有效結合離心速率和細小凝膠顆粒網，可將非凝結和凝結的紅細胞快速分離，并且凝膠卡微孔只能通過1 個紅細胞，如果紅細胞凝結則無法通過，通過該方法可實現陽性判斷，一定程度提高檢測準確性率。

本研究結果顯示，200 例輸血患者經試管法檢測，結果顯示正反定型符合率為90.50%，正反正型不符合率9.50%，表明試管法進行血型鑒定準確率較高。同時研究結果顯示，卡式微柱凝膠技術ABO、RhD 血型鑒定準確率高于聚凝胺法（P＜0.05），表明卡式微柱凝膠技術可提高血型鑒定準確率，分析認為紅細胞和不規則抗體結合會發生凝聚，增大紅細胞體積，使其不能通過凝膠間隙漂浮于上層；而卡式微柱凝膠技術能夠在離心速率配合和細小凝膠顆粒網下，實現非凝結和凝結紅細胞的快速分離，使每個微柱孔徑只能通過1 個正常紅細胞，從而有效分離正常紅細胞和發生凝聚紅細胞，一定程度提高提高血型鑒定準確性[19]。此外，卡式微柱凝膠技術檢驗不規則抗體陽性率高于聚凝胺法（P＜0.05），與薄濤[20]的報道基本相似，表明卡式微柱凝膠技術紅細胞不規則抗體檢出率相對較高，分析認為可能是由于IgG 抗體分子鏈均短小，無法進行有效凝聚，使聚凝胺法檢測受到影響；同時，卡式微柱凝膠技術已經趨于標準化定量操作，有效應用凝膠分子篩技術、免疫學檢測技術，可提高檢測方法的靈敏度、安全性。此外，該檢測方法改變了傳統繁瑣的洗滌紅細胞過程，有效預防人血球蛋白被中和，從而降低假陰性的發生，提高檢測的準確性。

綜上所述，卡式微柱凝膠技術在血型鑒定中準確性較高，并且對輸血前紅細胞不規則抗體的檢出率較高，加之規范性、標準化操作，可提高臨床輸血安全性，具有良好的應用價值。