海螵蛸對大鼠胃黏膜細胞損傷保護作用的實驗研究

趙文玲，朱敏敏，孫虎

(1.淄博市第四人民醫(yī)院，山東 淄博 255000；2.安丘市市立醫(yī)院，山東 安丘 262100;3.山東省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，山東 濟南 250014)

海螵蛸為烏賊科動物無針烏賊(Sepiellamaindronide Rochebrune)或金烏賊(SepiaseculentaHoyle)的干燥內殼[1]，為傳統中藥材，味咸、澀，性微溫，具有收斂止血、制酸止痛等功效[2]，臨床應用廣泛。另外，海螵蛸還可用于治療胃十二指腸潰瘍、慢性胃炎等疾病，也可用于收斂止血等治療[3]。研究發(fā)現海螵蛸中的碳酸鈣可以中和胃酸，能減輕應激引發(fā)的胃黏膜損傷，通過減少胃酸的含量，從而保護胃黏膜細胞，達到防治胃黏膜細胞損傷的效果[4]。本研究旨在探索中藥海螵蛸對大鼠胃黏膜的保護作用，觀察海螵蛸對小鼠實驗性胃潰瘍的療效，為臨床用藥提供依據。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗藥物 海螵蛸(山東建聯盛嘉中藥有限公司，批號：190813)；無水乙醇(山東龍玉泉藥用輔料有限公司，批號：190705)。

1.2 實驗儀器 BP211D型電子天平(德國賽多利斯)；XW-80A旋渦振蕩儀(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；Cary60型紫外-可見分光光度計(安捷倫科技<中國>有限公司)；HH-7智能恒溫水浴鍋(力城科技)；LD-2A型離心機(北京醫(yī)用離心機廠)；不銹鋼高精度專業(yè)級機械式游標卡尺(浙江得利公司)；大鼠體重機(Rgz-120)；成像系統(Nikon Eclipse TI-SR)。

1.3 實驗動物 SPF級雄性Wistar大鼠40只，8周齡，體質量180～220 g，購自濟南鵬悅實驗動物中心，許可證號：SCXK(魯)20190003。飼養(yǎng)條件：溫度22～24 ℃，相對濕度50%～65%，自由進食、飲水。

1.4 實驗分組及造模 適應性喂養(yǎng)1周后，將40只大鼠按照隨機分組法分為4組，每組10只，即正常對照組、模型組、海螵蛸500、1 500 mg·kg-1兩個劑量組。海螵蛸低、高劑量組分別灌胃給藥，正常組及模型組給予等體積蒸餾水灌胃，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥前一天禁食，末次給藥后30 min，除正常對照組外，其余各組大鼠均灌胃無水乙醇(0.2 mL/只)誘導急性胃黏膜損傷模型。

1.5 樣本采集 造模2 h后，將大鼠用乙醚麻醉，待大鼠麻醉后將其固定于專用手術臺上，樣本采集過程中如果大鼠有蘇醒跡象則持續(xù)麻醉大鼠。剖開大鼠腹部，從心臟取血置于取血管中備用；將胃幽門和賁門結扎后剪下胃部并將其取出，將胃部剪開把胃內容物收集于離心管內備用[5]。剪下部分胃壁用4 ℃的生理鹽水洗凈，冷藏待用；剩余部分注入適量10%的甲醛溶液固定20 min，待其固定后做病理切片進行觀察[6]。

1.6 胃黏膜損傷指標

1.6.1 胃黏膜損傷指數 將胃用適量10%的甲醛溶液固定20 min后，沿大彎剪開，把內容物洗凈后展開胃黏膜，使用游標卡尺對胃黏膜上的出血點或出血帶的長度和寬度進行測量，評分標準見表1。

表1 急性酒精損傷肉眼觀察評分標準

2 結果

2.1 海螵蛸對大鼠體重的影響 由表2可知，大鼠灌胃1周后，模型組及海螵蛸高、低劑量組大鼠體重均維持在300 g 左右，與空白對照組比較無明顯差異(P>0.05)。實驗期間，各組大鼠均未出現不良反應及死亡現象，表明海螵蛸并未產生毒副作用，且對大鼠體重沒有影響。

表2 海螵蛸對大鼠體重的影響

2.2 海螵蛸對大鼠胃黏膜損傷的影響

2.2.1 胃黏膜肉眼觀察情況 肉眼觀察可見，對照組大鼠胃黏膜色澤正常，觸摸光滑，表面無損傷；模型組大鼠胃黏膜損傷部位顏色呈深紅色，面積最大，損傷最為嚴重；海螵蛸高劑量組損傷部位顏色比模型組淺，在各組中損傷面積最小，損傷程度最輕；海螵蛸低劑量組胃黏膜損傷程度比高劑量組嚴重，顏色較深，損傷面積也要更大，但與模型組相比從顏色和面積上來看損傷程度還是明顯較輕的。以上實驗結果表明海螵蛸具有保護大鼠胃黏膜損傷的作用。

2.2.2 海螵蛸對大鼠胃黏膜損傷指數、抑制率、面積的影響 由表3可知，模型組胃黏膜損傷指數較高，胃黏膜損傷面積較大；與模型部比較，海螵蛸500、1 500 mg·kg-1劑量組大鼠胃黏膜損傷指數明顯降低，損傷面積顯著縮小(P<0.01)。與500 mg·kg-1劑量組相比，海螵蛸1 500 mg·kg-1劑量組的損傷指數較低，損傷面積較小，統計學比較仍有顯著性差異(P<0.05)，胃黏膜損傷抑制率：海螵蛸高劑量組>海螵蛸低劑量組。

表3 海螵蛸對大鼠胃黏膜損傷指數、抑制率、面積的影響

3 討論

無水乙醇是實驗室常用的急性胃黏膜損傷誘導物，灌胃后可直接損傷大鼠的胃黏膜細胞結構，致使大鼠胃部胃酸分泌增多，胃黏膜上皮細胞腫脹，進而造成急性胃黏膜損傷。本實驗中我們采用對胃黏膜上的出血點或出血帶的長度和寬度進行測量得到胃黏膜的損傷指標，通過測量經過胃黏膜潰瘍中心的最大縱徑和橫徑得到胃黏膜的損傷面積，用這兩個指標來評價大鼠胃黏膜損傷模型建立與海螵蛸對胃黏膜的保護作用。

海螵蛸主要成分是碳酸鈣，能有效降低胃液的酸度，具有較強的細胞保護能力。本研究從胃黏膜損傷指數、損傷抑制率、損傷面積的結果來看，海螵蛸能有效減輕急性胃黏膜損傷的形成，降低胃黏膜損傷指數和損傷面積，促進其快速恢復，且呈現出一定的劑量依賴性，表明海螵蛸具有保護胃黏膜損傷的作用，且高劑量組的保護效果較好，從實驗角度進一步驗證了海螵蛸對胃黏膜的保護作用。

當下，現代人的生活節(jié)奏逐步加快，伴隨著精神壓力的增加以及飲食習慣的不規(guī)律，出現消化性胃潰瘍的患者越來越多，且年齡趨于年輕化[9]。當前，由于現代人快節(jié)奏的生活方式，大多數人選擇西醫(yī)治療，見效更快，且便于攜帶[10]。然而，以“治未病”為理念的中醫(yī)藥產業(yè)，在疾病的預防治療方面已經默默地守護了我們上千年的時間，在這歷經歲月考驗的臨床歷史實踐中中醫(yī)藥展現出了其獨特的魅力，在“治未病”方面與西醫(yī)相比，它的優(yōu)勢是非常明顯的[11]。通過本實驗研究，可考慮根據海螵蛸的自身特點開發(fā)成藥食同源的新型功能性食品，讓其發(fā)揮更大的應用價值。