促性腺激素釋放激素類似物對中樞性性早熟女性兒童維生素D 及miR-664-2 水平影響

呂 晴， 劉 凱， 劉 洋， 孟香沂

深圳大學總醫院 兒科，廣東 深圳518055

中樞性性早熟(Central precocious puberty，CPP)又稱促性腺激素釋放激素(Gonadotropin releasing hormone，GnRH)依賴性早熟，由于下丘腦提前提高了GnRH 的分泌與釋放，將性腺軸的功能提前激活后引起性腺發育及分泌性激素，最終導致了內外的生殖器發育與第二性征呈現[1-2]。 目前，臨床針對CPP 主要采用藥物治療、飲食調整等，其中促性腺激素釋放激素類似物(Gonadotropin releasing hormone analogue，GnRHa)應用較為廣泛[3-4]。 有研究發現，GnRHa 在治療CPP 過程中雖無明顯不良反應發生，但遠期會對患兒的生殖系統功能、骨密度等產生影響[5-6]。 維生素D 與人體的骨代謝、鈣磷代謝密切相關，可影響兒童的生長發育，且還具有調控生殖功能的作用[7]。 miR-664-2 可通過增強靶向N-甲基-D-天冬氨酸受體(N methyl D aspartate，NMDA)信號參與早熟的發病機制[8]。 但兩者是否存在一定關系，從而影響GnRHa 治療女性兒童CPP 的效果少見報道。 本研究旨在探討Gn-RHa 治療女性兒童CPP 對維生素D 及miR-664-2水平的影響。 現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取自2019 年8 月至2020 年8 月深圳大學總醫院收治的90 例CPP 女性兒童為研究對象。 納入標準:CPP 符合《中樞性性早熟診斷與治療共識(2015)》中相關標準[9]；未曾接受過GnRHa 治療；女性。 排除標準:經CT 或磁共振檢查存在器質性病變；嚴重心、肝、腎等臟器功能障礙；性腺腫瘤、激素藥物等其他因素導致的性早熟；治療依從性差。 根據miR-664-2 表達水平將患兒分為miR-664-2 高表達組(n ＝52)與miR-664-2 低表達組(n ＝38)。 根據維生素D 水平將患兒分為維生素D 缺乏組(25-羥基維生素D ＜30 ng/ml，n ＝52)與維生素D 不缺乏組(25-羥基維生素D≥30 ng/ml，n ＝38)。 本研究經醫院倫理委員會批準。 研究對象家屬均簽署知情同意書。

1.2 治療方法 所有患兒均接受GnRHa 治療，給予注射用醋酸亮丙瑞林微球，3.75 mg∶1 ml，國藥準字J20150109，每次3.75 mg，檢查黃體生成素水平，一般治療24 個月。

1.3 觀察指標 采集患兒治療前、治療24 周3 ml空腹靜脈血，3 000 r/min 離心10 min，取上清，酶聯免疫吸附法檢測25-羥基維生素D、miR-664-2、雌二醇、泌乳素、黃體生成素及卵泡刺激素水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS 23.0 統計學軟件對數據進行處理。 計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t 檢驗；計數資料用例(百分率)表示，組間比較采用χ2檢驗。 采用雙變量Pearson 直線相關性檢驗維生素D 與miR-664-2 水平的相關性。 以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患兒治療前后血清學指標比較 治療后患兒25-羥基維生素D 水平為(54.65 ±33.00)ng/ml，高于治療前的(36.72 ±15.72)ng/ml，差異有統計學意義(P ＜0.05)。 患兒治療后miR-664-2 水平為(0.97 ±0.31)、雌二醇水平為(8.18 ±1.91)ng/L、泌乳素水平為(9.23 ±3.08)μg/L、黃體生成素水平為(1.66 ±0.74)IU/L、卵泡刺激素水平為(9.45 ±2.27)，分別低于治療前的(1.89 ±0.69)、(9.48 ±2.19)ng/L、(11.64 ±4.05)ng/L、(1.54 ±0.75)IU/L、(4.45±0.82)IU/L，差異有統計學意義(P ＜0.05)。

2.2 miR-664-2 高表達組與miR-664-2 低表達組血清學指標比較 miR-664-2 高表達組治療后25-羥基維生素D、雌二醇水平低于miR-664-2 低表達組，卵泡刺激素水平高于miR-664-2 低表達組，差異有統計學意義(P ＜0.05)。 見表1。

表1 miR-664-2 高表達組與miR-664-2 低表達組血清學指標比較(ˉx±s)

2.3 維生素D 缺乏組與維生素D 不缺乏組血清學 指標比較 維生素D 缺乏組治療后miR-664-2、雌二醇、卵泡刺激素水平高于維生素D 不缺乏組，差 異有統計學意義(P ＜0.05)。 見表2。

表2 維生素D 缺乏組與維生素D 不缺乏組血清學指標比較(ˉx±s)

2.4 相關性分析結果 維生素D 水平與miR-664-2表達水平呈負相關(r ＝ -0.949，P ＜0.05)。 見圖1。

圖1 維生素D 與miR-664-2 相關性散點圖

3 討論

近年來，我國女性兒童的初潮年齡呈提前趨勢發展，且CPP 發病年齡也相對提前[10]。 女性兒童CPP 的發病率遠高于男性兒童，嚴重影響患兒的正常發育及身心健康[11]。 GnRHa 是治療CPP 的有效藥物，不僅高度耐降解，且與垂體GnRH 受體存在高度的親和作用，作用效果強效、持久，可降低垂體靶細胞，調節機體激素水平至正常范圍，幫助患兒改善臨床癥狀[12-14]。 此外，GnRHa 可參與患兒機體中調控營養代謝的過程，通過調控生殖軸促使中樞信號啟動，有效抑制CPP 的性腺發育，減緩骨齡進展。 相關研究表明，維生素D 可影響生長發育，維生素D 缺乏后機體中雌二醇與黃體生成素的水平顯著提高[15-16]。 本研究結果顯示，患兒治療后的25-羥基維生素D 水平高于治療前，miR-664-2、雌二醇、黃體生成素、卵泡刺激素低于治療前，其中miR-664-2、泌乳素、黃體生成素、卵泡刺激素基本達到正常范圍，提示采用GnRHa 治療CPP 女性兒童可獲得較好的臨床療效，有效改善內分泌代謝指標水平。 曹玲等[17]研究發現，GnRHa 可以有效調節特發性中樞性性早熟女性兒童內分泌代謝、骨代謝水平，而對脂代謝無明顯影響，且不良反應輕微，與本研究結果一致，分析原因可能為GnRHa 可有效阻斷受體反饋機制的通路，抑制黃體生成素的合成，從而抑制患兒機體中性腺的分泌[18-19]。

miR-664-2 與性早熟的發生密切相關，通過靶向NMDA-1 受體信號參與性早熟[20-21]。 Ju 等[22]研究報道，GnRH 是下丘腦-垂體-性腺軸激活的出發因子，NMDA 可促進搏動性GnRH 分泌，加速青春期開始。 Johnson 等[23]在一項動物研究中提出，乳腺上皮或脂肪細胞缺乏維生素D 受體(vitamin D receptor，VDR)與乳腺上皮細胞的凋亡減少、增殖增加相關，可加快乳腺導管形成，而腺泡的生長離不開乳腺上皮細胞的VDR 誘導調節，缺乏VDR 可導致乳房提前發育，推測維生素D 依賴的VDR 信號途徑在青春期乳腺發育中發揮重要作用。 Villamor等[24]研究表明，維生素D 缺乏可造成女性兒童初潮時間提前。 因此，在治療期間需密切監測維生素D 及miR-664-2 表達，以調整治療方案及劑量，進一步提升療效。 本研究進一步采用雙變量Pearson 直線相關性檢驗維生素D 與miR-664-2 水平的相關性發現，兩者呈負相關，分析原因可能為miR-664-2能夠抑制維生素D 與VDR 的結合，同時刺激c-Jun氨基端激酶信號通路激活。

綜上所述，維生素D 水平與miR-664-2 表達呈負相關，采用GnRHa 治療女性兒童CPP 可獲得較佳的療效，有效提高維生素D 水平，降低miR-664-2水平，改善患兒內分泌代謝等相關指標。 本研究仍存在不足，納入患兒較少，未觀察長期療效，未研究關于GnRHa 治療的不良反應等，仍需進一步擴大樣本量，延長隨訪時間等進行深入研究。