PTGER4、RUNX1和PTEN在視網膜母細胞瘤中的表達及與組織病理學的關系

張旭 劉曦 楊丹 歐舟 曾韜

視網膜母細胞瘤（Retinoblastoma，Rb）來源于胚胎型光感受器前體細胞，多見于嬰幼兒時期，絕大多數患者發病在三歲以內，是兒童眼內惡性腫瘤較為常見的一種［1］。Rb 腫瘤惡化程度高，容易出現全身性轉移，對患者的發育及健康造成了嚴重影響［2］。目前醫學盡管在Rb 發病機制的分子和細胞靶點方面取得了一定成就，但是缺乏對其途徑的深入了解。相關報道顯示［3］，前列腺素E2 受體4（prostaglandin receptor 4，PTGER4）在多種癌細胞中呈現異常表達，還與非小細胞癌的侵襲與生長具有緊密關系；矮小相關轉錄因子（runt?related protein，RUNX1）在許多腫瘤中發揮致瘤或腫瘤抑制作用；第10 同源染色體丟失性磷酸酶?張力蛋白基因（Phosphatase and tensin homolog，PTEN）是一種新的腫瘤抑制基因，與腫瘤的發生、發展密切相關，產生的PTEN 蛋白具有脂質磷酸酶活性和蛋白硫酸酶活性。本文旨在研究PTGER4、RUNX1、PTEN 在Rb中的表達及與組織病理學的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2020年6月四川省宜賓市第二人民醫院收入行手術治療的88 例Rb 患兒的視網膜組織標本作為研究組，其中男性49 例，女性39 例，平均年齡為（2.13±0.84）歲。納入標準：①均符合視網膜母細胞瘤的診斷標準［4］，且術后病理檢查確診；②臨床病歷資料完整無缺漏；③均為單眼發病；排除標準：①有血液系統疾病者；②有其他惡性腫瘤者；③有心、肝等臟器功能異常者；④拒絕檢查或未完成相關檢查的患者。

另選取62 例因外傷摘除眼球的正常視網膜組織作為對照組。62 例因外傷摘除眼球的患兒經檢查證實無任何腫瘤性疾病，其中男性37 例，女性25 例，平均年齡為（2.09±0.81）歲。兩組基本資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經院醫學倫理委員會批準通過，患兒監護人已簽署知情同意書。

1.2 方法

鼠抗人PTGER4 單克隆抗體、鼠抗人RUNX1單克隆抗體、鼠抗人PTEN 單克隆抗體、SP 試劑盒、DAB 顯色試劑均購自上海研生實業有限公司。將PTGER4、RUNX1 及PTEN 標本經常規石蠟切片、脫水，根據S?P 免疫組化染色法對標本進行檢測，整個實驗操作過程嚴格按照說明進行。

1.3 判定標準

由病理科醫師在光學顯微鏡下隨機觀察5 個視野，要求每個視野至少計數100 個完整的腫瘤細胞。PTGER4、RUNX1 及PTEN免疫組化陽性判定標準［5］：實驗結果顯示腫瘤細胞胞質或細胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，反之則為陰性。陽性細胞比例評分：≤5%為0 分，>5%～25%為1 分，>25%～50%為2 分，>50%～75%為3 分，>75%為4 分；染色強度評分：未染色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2分，棕褐色為3 分。染色指數=陽性細胞比例評分＋染色強度評分。染色指數>3 分為陽性；染色指數≤3分為陰性。陽性率=（陽性例數/總例數）×100%。

1.4 隨訪

患者出院后均進行為期1年的隨訪（隨訪截止時間：2021年6月），隨訪采取門診或電話隨訪，直至隨訪期結束或者患者死亡。

1.5 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計軟件進行統計分析，以（）表示計量資料，采用t檢驗；以n（%）表示計數資料，采用χ2檢驗；采用Logistic 回歸分析影響Rb 患者預后的獨立危險因素；以P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組PTGER4、RUNX1 及PTEN 表達情況比較

研究組PTGER4、RUNX1 陽性表達率高于對照組，PTEN 陽性表達率低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1、圖1。

圖1 Rb 中PTGER4、RUNX1、PTEN 表達情況（SP，×400）Figure 1 Expression of ptger4，Runx1 and PTEN in Rb（SP，×400）

表1 兩組PTGER4、RUNX1 及PTEN 表達情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of the expression of PTGER4，RUNX1 and PTEN between the two groups［n（%）］

2.2 PTGER4、RUNX1、PTEN 表達與臨床病理特征的關系分析

PTGER4、RUNX1 陽性及PTEN 陰性患者的視神經受損情況、腫瘤有無轉移、是否化療及病理分型與TGER4、RUNX1 陰性及PTEN 陽性表達患者比較，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 PTGER4、RUNX1 及PTEN 表達與臨床病理特征的關系［n（%）］Table 2 The relationship between the expression of PTGER4，RUNX1 and PTEN and clinicopathological characteristics［n（%）］

2.3 影響Rb 患者預后的單因素分析

隨訪資料顯示，88 例Rb 患者死亡15 例（17.05%），存活73 例（82.95%）。視神經受損、腫瘤轉移、未進行過化療、病理分型（未分化型）為影響Rb 患者預后的單因素（P<0.05）。見表3。

表3 影響Rb 患者預后的單因素分析［n（%）］Table 3 Analysis of single factors affecting the prognosis of patients with retinoblastoma［n（%）］

2.4 影響Rb 患者預后的獨立危險因素分析

Logistic 回歸模型分析顯示，視神經受損、腫瘤轉移、病理分型（未分化型）、PTGER4（陽性）、RUNX1（陽性）、PTEN（陰性）為影響Rb 患者預后的獨立危險因素（P<0.05）。見表4。

表4 影響Rb 患者預后的獨立危險因素分析Table 4 Analysis of independent risk factors affecting the prognosis of patients with retinoblastoma

2.5 三項指標對Rb 患者的診斷價值

PTGER4、RUNX1及PTEN三者聯合曲線下面積為0.979，大于三者單獨檢測（P<0.05）。見表5、圖2。

表5 IL?35、IL?1β 及IFN?γ 水平檢測對慢性牙周炎的預測價值Table 5 IL?35，IL?1 β And IFN?γ Predictive value of level detection in chronic periodontitis

圖2 預測價值曲線圖Figure 2 Predictive value

3 討論

Rb 是一種常見的原發性惡性腫瘤疾病，近年來，隨著對該疾病研究的深入，臨床上上對于該疾病的治療方式逐漸多樣化，提高了患者的生存率［6］。有研究發現，Rb 的發生發展由多種因素共同作用所導致，其中PTGER4、RUNX1 的激活與PTEN 的失活或缺失之間可能存在相互協同作，從而參與了Rb 的發生發展、轉移及浸潤等生物學行為［7］。

PTGER4 在血管生成中占據主導地位，多在腫瘤細胞中過度表達，已經在包括肺癌細胞在內的許多癌細胞中得到證實［8］。在許多實驗系統中PTGER4 可促進非小細胞肺癌的生長和侵襲，導致患者預后不良，有學者提出可將PTGER4 作為潛在的抗癌治療靶點［9］。本文研究結果中，PTGER4 在Rb 患者中同樣呈現陽性表達，這與既往研究結果相符合［10］。同時在研究中得出PTGER4 陽性表達的患者與PTGER4 陰性表達患者的臨床病理特征比較差異有統計意義，說明PTGER4 參與了Rb 的調控。

RUNX1 作為RUNX 轉錄因子蛋白家族的成員之一，具有調節造血細胞分化、凋亡及自我更新的作用，已經被證實在急性骨髓性白血癥中具有重要影響［11］。有文獻報道，RUNX1 在不同腫瘤細胞中發揮著不同作用，比如在人類乳腺腫瘤中呈現高表達，而在胃癌細胞中表達下調［12］。本文研究結果顯示，RUNX1 在Rb 患者中的表達上調，與該疾病的臨床病理特征具有一定關系，提示RUNX1 在Rb 的發生發展中具有致瘤作用。

PTEN基因是近年來發現的一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，具有抑制絲裂原活化的蛋白激酶通路的作用［13］。據國內外文獻報道，包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌、口腔鱗狀細胞癌等多種惡性腫瘤中均存在PTEN基因缺失，認為PTEN基因與惡性腫瘤發生、發展密切相關［14］。本文研究結果顯示，PTEN 在Rb 患者中陽性表達率低，這與既往研究結果報道相一致［15］。

通過分析TGER4、RUNX1、PTEN 的表達與臨床病理特征的關系，本研究發現，PTGER4、RUNX1陽性患者與PTGER4、RUNX1 陰性患者、及PTEN陰性患者與PTEN 陽性患者之間的視神經受損情況、腫瘤有無轉移、是否化療及病理分型比較差異具有統計學意義，考慮PTGER4、RUNX1、PTEN 的表達與患者的臨床病理特征具有一定聯系。Logistic 回歸模型分析顯示，視神經受損、細胞瘤轉移、病理分型（未分化型）、PTGER4（陽性）、RUNX1（陽性）、PTEN（陰性）為影響Rb 患者預后的獨立危險因素。提示臨床對伴有獨立危險因素的患者在手術前后采取針對性預防和治療措施，是改善患者預后的重要舉措。

進一步ROC 曲線分析結果顯示，PTGER4、RUNX1、PTEN 三者聯合曲線下面積為0.979，大于三者單獨檢測，提示三者聯合檢測對Rb 患者的具有一定診斷價值。

綜上所述，PTGER4、RUNX1、PTEN 在Rb 患者機體中呈異常表達，通過檢測三者可為患者的病情及預后評估提供可靠資料。