復發性流產患者NKT細胞、DNT細胞、T細胞亞群的變化探討

李想 李滿元 王宏亮 孫雨婷 王佳美

與同一配偶發生連續≥2次自然流產稱為復發性流產,是婦女妊娠期一種常見的并發癥［1］。嚴重影響女性生理及心理健康,造成復發性流產的病因復雜,已知病因包括生殖道異常、染色體異常、內分泌失調、自身免疫性因素等。引起不孕不育的因素很多,相關研究結果表明,免疫學因素對于不育及正常妊娠起到了至關重要的影響［2］。自然性殺傷T細胞(natural killert,NKT細胞)是一群同時具有NK細胞標志,又具有很多T細胞受體(TCR)的獨特淋巴細胞亞群。NKT免疫細胞可以在人體內分泌大量的細胞免疫因子,參與控制人體的自身先天性免疫和自身適應性免疫。NKT細胞對于在治療惡性腫瘤者自身免疫、抗病毒自身免疫以及其他自身免疫功能性疾病中都具有很大的促進作用。雙陰性調節性 T 細胞(double negative regulatory T cells,DNT細胞)是一種即可以通過免疫誘導產生免疫耐受又可以主動調控自身免疫功能的細胞［3］。本文通過研究復發性流產患者DNT細胞、NKT細胞以及T細胞亞群的變化,旨在為不育癥提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2020年9月～2021年4月在生殖門診就診的265例復發性流產患者作為復發性流產組,145例進行健康體檢婦女作為健康對照組。復發性流產組年齡25～42歲,平均年齡(30.25±4.35)歲；≤30歲129例,年齡＞30歲136例。健康對照組年齡22～45歲,平均年齡(29.15±5.68)歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 采用EDTAK2采集兩組研究對象的清晨空腹靜脈血2 ml并立即送檢,檢測外周血DNT細胞(CD3+CD4-CD8-)、NKT細胞(CD3+CD56+CD16+)及T細胞亞群(CD3+T、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc)水 平,不能立即檢測可放4℃冰箱保存24 h。準備2只流式專用管分別加入CD45-FITC/CD8-PE/CD4-ECD/CD3-P5CD45-FITC/CD56-PE/CD19-ECD/CD3-P5亞群試劑(深圳邁瑞公司)各15 μl,再分別加入50 μl抗凝全血振蕩30 s后避光反應15 min,然后再加入450 μl的溶血劑,振蕩30 s再次避光反應15 min后用邁瑞的流式細胞儀上機檢測。采用CD45設門圈定白細胞群。在十字門圖中圈出相應細胞。

1.3 觀察指標 比較兩組DNT細胞(CD3+CD4-CD8-)、NKT細胞(CD3+CD56+CD16+)及T細胞亞群(CD3+T、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc、Th/Tc)水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差 ()表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組DNT細胞、NKT細胞水平比較 兩組DNT細胞比較,差異無統計學意義(P＞0.05)；復發性流產組NKT細胞水平高于健康對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組DNT細胞、NKT細胞水平比較(,%)

表1 兩組DNT細胞、NKT細胞水平比較(,%)

注：與健康對照組比較,aP＜0.05

2.2 兩組T 細胞亞群水平比較 兩組CD3+T、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc及Th/Tc比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組T 細胞亞群水平比較(,%)

表2 兩組T 細胞亞群水平比較(,%)

注：兩組比較,P＞0.05

3 討論

NKT細胞是1984年Hercend T等命名的,是一群既具有NK細胞功能又有T細胞功能的細胞。其在復發性流產患者中備受關注［4］。NKT細胞的來源目前各種說法不一,但絕大多數人認為NKT細胞對胸腺有依賴。Kronenberg等［5］通過對小鼠進行研究,發現大多數細NKT胞都是從圍生期的小鼠胸腺中產生,并由DNT細胞偏離了主流進行分化發育而來。也有一些科學研究認為NKT細胞主要是從傳統胸腺T細胞系統中的一個子系細胞演變而來。Baron等［6］根據NKT細胞在某些特定條件下是否存在對α-半乳糖基神經酰胺(α-galactosylceramide,α-GalCer)/CDld復合體進行反應,分為經典型和非經典型。發生復合反應的一類細胞就是經典NKT細胞,反之則是非經典的NKT細胞。

目前經典NKT細胞簡稱Ⅰ型,是研究較多的。Ⅰ型NKT細胞能夠通過調控 Th1 與Th2有關細胞因子的生成、穿孔素介導細胞毒物質的作用和自身免疫反應問題［7］。非經典NKT細胞也被人們稱為Noninkt細胞,其幾乎占據了絕大多數蛻膜細胞NKT細胞,分泌Th2相關的各種細胞因子,維持正常的妊娠環境［8］。同時還可以抑制體液免疫、遲發型超敏反應的發生［9］。有報道稱［10］,經典的NKT細胞在人與小鼠中具有高活性,能上調Th1相關的細胞因γ-干擾素(IFN-γ)與腫瘤壞子因子-α(TNF-α)的表達。進一步研究可以明確推斷經典型的NKT細胞及其誘導下的Th1參與介導的自體免疫,阻止了男性精子與卵子結合并影響其成功著床,損傷蛻膜及滋養細胞而可能引起流產。司斯［11］發現某些習慣性流產或體外受精失敗的患者體內具有高水平 NKT 細胞的表達。Boyson等［12］進一步研究發現NKT細胞活化后不但導致妊娠早、中期流產,還可引起早產。也有學者報道稱［13］,NKT細胞通過產生白細胞介素-4(IL-4) 誘導Th2型免疫應答,調控 Th1/Th2 平衡,維持母胎的免疫耐受,從而獲得妊娠成功。妊娠是一種免疫耐受/抑制平衡的一種狀態。袁靜等［14］研究發現少量的NKT細胞對維持妊娠狀態有一定的促進作用。而大量的NKT細胞則會發生相反的結果造成流產［15］。本文數據與上述研究的結論相符,也進一步充分證明了NKT細胞在復發性流產患者中重要性。DNT細胞也是近年來被發現的一群T細胞,參與機體的固有免疫。目前已經被發現在惡性腫瘤、傳染性疾病以及其他免疫系統疾病等方面都存在異常增高,并且會促進疾病的發展［16］。能夠起到調節免疫的作用［17］。輔助性T淋巴細胞(Th細胞表型為CD3+CD4+CD8-)、NKT細胞(Tc細胞表型為CD3+CD8+CD4-)也被認為是重要的一種免疫調控細胞,當 Th/ Tc濃度升高時就會提示細胞的免疫功能亢進,反之則會提示細胞的免疫功能減退。

本文研究結果顯示,兩組DNT細胞、CD3+T、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Tc及Th/Tc比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。復發性流產組NKT細胞水平高于健康對照組,差異具有統計學意義(P＜0.05)。由此發現NKT 細胞具有雙重調節機制,既可以增強免疫反應導致流產,也可以維持正常妊娠狀態。進一步分析可以得出造成流產的NKT細胞是經典型的NKT細胞,維持正常妊娠的是非經典型NKT細胞。

綜上所述,對復發性流產患者進行外周血NKT細胞的檢測有著重要的意義,其即能有效提示臨床復發性流產患者存在免疫系統功能異常,又能快速明確病因,對免疫異常者進行有效的干預,可幫助復發性流產患者順利實現妊娠。