MiRNA-208水平與老年慢性心力衰竭病人心功能及臨床預后的關系

何香 張郁青

CHF是心室收縮和(或)舒張功能障礙的一種綜合征。據統計，老年人群的CHF發病率為10%～20%[1-2]。然而目前CHF發生和發展機制仍有待深入研究[3]。微小RNA(MiRNA)因可調節多種疾病發生過程中相關基因的表達，逐漸成為現代心臟病學研究中的熱點。MiRNA-208可通過引起心肌重構、心律失常以及心肌肥大等影響心臟功能，有可能成為心肌損傷的潛在標記物[4]。多個動物模型研究證實，MiRNA-208對心力衰竭(心衰)的轉歸有重要影響。本研究檢測老年CHF病人血清中MiRNA-208的水平，探討其與病人心功能及其臨床預后的關系。

1 對象和方法

1.1 研究對象 選擇2017～2018年期間到我院就診的107例老年CHF病人(CHF組)，心功能NYHA分級：Ⅱ級33例，Ⅲ級51例，Ⅳ級23例。另選取同期健康體檢人群45例為對照組，對照組在性別、年齡、BMI等一般情況上與CHF組差異無統計學意義。本試驗獲得醫院倫理委員會審批；所有納入對象經溝通，對研究內容充分知情，簽署知情同意書。

1.2 納入標準和排除標準 納入標準：(1)根據相關指南[5]進行診斷并符合診斷要求，且心功能NYHA分級為Ⅱ～Ⅳ級；(2)年齡60～80歲；(3)初次治療或試驗前3個月內未使用過心血管相關藥物；(4)病人原始資料齊全。排除標準：(1)有先天性或家族性心臟病史者；(2)伴發心肌炎、心肌梗死等心臟相關疾病者；(3)合并有臟器功能嚴重受損者；(4)患感染類相關疾病、血液類疾病、惡性腫瘤或精神方面疾病者。

1.3 方法

1.3.1 儀器與試劑：RNeasyPlus Mini Kit試劑盒購自OMEGA公司；逆轉錄試劑盒購自MBI fermentas公司；實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(qRT-PCR)試劑盒購自賽默飛公司；BioRad-1Q5型qRT-PCR儀購自Bio-Rad公司；ND-1000超微粒分光光度計購自美國Nanodrop公司；彩色超聲儀購自美國ACUSON公司。

1.3.2 qRT-PCR檢測MiRNA-208水平：病人入組后第2日清晨空腹條件下，采集肘靜脈血5 mL，離心后取上層血清置于-80 ℃環境保存。按照試劑盒說明書進行血清總RNA的提取和純化，并計算RNA濃度[6]。將所提RNA按照試劑盒說明書進行逆轉錄，轉錄產物進行qRT-PCR反應，采用2-ΔΔCt方法計算MiRNA-208水平。

1.3.3 心功能測定：檢測位置位于病人胸骨長軸水平線旁，應用彩超拍攝左心室二維圖像；再依次沿左心室長軸檢測左室舒張末期內徑(LVEDD)、左室收縮末期內徑(LVESD)、室間隔厚度(IVSD)、后壁舒張末期厚度(PWD)及后壁收縮末期厚度(PWS)；左心室的室間隔末期收縮期厚度(IVSS)、舒張末期容積(IVEDV)、LVEF及收縮期末容積(LVESV)則通過Simpson方法從四尖室測量。心肌重量(LVM)=0.8×1.04[(PWD+LVEDD+IVSD)+PWD)3-(LVEDD)3]+0.6(g)；心肌質量指數(LVMI)=LVM/體表面積(BSA)；平均室壁應力(MWS)=(LVEDD+LVESD)/4(PWS+IVSS+IVSD+PWD)/4×SBP。

1.3.4 預后評估：所有病人出院后均進行回訪，于第6個月評估其病情轉歸、中途是否出現再次住院或死亡，以及病人是否有心臟相關事件發生。

1.4 統計學處理 本研究所有數據均使用SPSS 25.0軟件進行分析，計量資料用均數±標準差表示，2組比較采用t檢驗，多組比較采用單因素方差分析；采用Pearson相關系數描述MiRNA-208水平與心功能指標的相關性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2 組MiRNA-208水平及心功能指標比較 CHF組MiRNA-208、MWS及LVMI水平均明顯高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)；不同心功能分級CHF病人血清MiRNA-208、LVMI及MWS水平差異均具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組MiRNA-208水平及心功能指標比較

2.2 血清MiRNA-208水平與心功能指標的相關性 Pearson相關分析顯示，血清MiRNA-208水平與MWS、LVMI均呈正相關(r=0.723、0.756，P均<0.001)。

2.3 血清MiRNA-208水平對老年CHF病人預后的影響 出院半年后隨訪發現，CHF病人中有25例發生了心臟相關事件。依據是否發生心臟相關事件進行分組分析發現，無心臟事件組入院時MiRNA-208水平、MWS、LVMI顯著低于有心臟事件組(P<0.05)。見表2。

表2 MiRNA-208水平對老年CHF病人預后影響

3 討論

隨著介入心臟病學的發展及神經體液-內分泌系統藥物的應用，人們對CHF治療的信心大大增強。但是，心衰發生、發展機制復雜，目前針對CHF仍缺乏強有力的控制措施和治療手段[7]。我國人口基數大且趨向老齡化，患CHF的老年病人比例仍在持續上升[2]。據統計，心衰病人4年死亡率超過50%，嚴重者1年死亡率超過半數，給社會及經濟造成極大負擔。

作為多種疾病的調節因子，MiRNA在心血管疾病中的作用，尤其是在心肌重構方面的作用受到越來越多的關注[8]。心室重構與神經-內分泌因子、炎性相關因子等的激活密切相關[9]。近年來大量研究已證實,MiRNA-208的異常表達影響病人心肌重構，導致心肌收縮無力，泵血功能減弱，最終惡化為心衰[5,10]。有研究表明，MiRNA-208可作為心臟性死亡和心衰的有力預測標記物[11]。本研究發現CHF組MiRNA-208水平顯著高于對照組，且隨著心功能的惡化，MiRNA-208水平逐步升高，該結果提示，MiRNA-208水平與心衰的發生和發展存在聯系。

CHF發生機制復雜，主要表現為心肌收縮力減弱[12]。超聲技術的發展為客觀評價心衰病人的左心室功能提供可能。MWS和LVMI為常用的衡量心室重構的指標，能夠有效反映發生CHF時病人心肌功能的改變及肥厚水平[13]。本研究通過測定老年CHF病人的MWS和LVMI水平，發現CHF組明顯高于對照組，且隨疾病加重，MWS和LVMI值越高，提示在心衰的發展過程中，可能伴隨心室重構的嚴重病理變化。本研究結果證實，老年CHF病人的血清MiRNA-208水平與心功能指標MWS和LVMI均呈正相關(r=0.723，0.756、P均<0.001)，提示CHF導致的心室重構與血清中的MiRNA-208表達關系密切。

影響心臟疾病的因素很多，有研究發現MiRNA-208可作為獨立危險因素發生作用，增加心臟疾病發生率。賈亭街等[14]研究發現，急性心肌梗死病人的血清MiRNA-208a水平迅速升高，且隨著疾病發作時間延長而明顯改變，3 h左右最高，可達正常表達值數十倍。本研究對CHF病人隨訪半年發現，并發心臟相關事件的病人血清MiRNA-208水平較未并發心臟相關事件者明顯升高。由此可推測，血清MiRNA-208水平高低可間接反映并發心臟相關事件的風險，MiRNA-208水平越高提示老年CHF病人預后越差。

綜上，老年CHF病人血清MiRNA-208表達水平與心功能指標呈正相關，可作為老年CHF的診斷及預后預測因子。但本研究樣本量小，隨訪時間短，研究結果存在一定的局限性，需要進一步研究證實。