Autotaxin對兒童難治性肺炎支原體肺炎的預測價值及其與炎性細胞因子的相關性

付彬彬 鐘蘭蘭 葉婷婷 韓燕媚 邱小翠

（1.海口市婦幼保健院檢驗科，海南海口 570100；2.海口市婦幼保健院兒科，海南海口 570100）

肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniaepneumonia，MPP）是由肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）感染導致的常見兒童呼吸道疾病，大部分患兒病情較輕，預后較好［1］，但仍有部分病例發展為難治性肺炎支原體肺炎（refractoryMycoplasma pneumoniaepneumonia，RMPP），表現為肺壞死、肺實變、胸腔積液及肺外多臟器損害，病情進展迅速、預后較差，嚴重時可造成患兒死亡［2］。因此，在RMPP臨床診療過程中，如何早期診斷RMPP并及時治療，對改善患兒預后具有重大意義。研究表明，炎性細胞因子在RMPP的發病過程中起到極為關鍵的作用，其中白細胞介素‐6（interleukin‐6，IL‐6）、白細胞介素‐8（interleukin‐8，IL‐8）及C‐反應蛋白（C‐reactive protein，CRP）均與RMPP 的發生發展密切相關［3-4］。近年來研究發現，自分泌運動因子（autotaxin）是一種具有溶血磷脂酶D活性的分泌型糖蛋白，參與細胞的增殖遷移、脂質代謝、血管生成及炎癥病變等過程，在肺部疾病的進展過程中發揮重要作用［5］。然而，關于autotaxin在RMPP中的表達及其應用價值尚未清楚。為此，本研究通過檢測RMPP患兒血清和支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中autotaxin 水平的情況，探討autotaxin 水平對兒童RMPP的預測價值，并分析其與IL‐6、IL‐8 及CRP 的相關性，以期為兒童RMPP 的早期診斷和臨床治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1 研究對象

回顧性選取2019 年1 月至2021 年12 月收治的MPP患兒238例，男140例，女98例，診斷年齡2～13歲，平均（5.7±2.4）歲。納入標準：（1）符合MPP 的 診 斷 標 準［6］，單 份 血 清MP 抗 體 滴 度≥1∶160，鼻咽抽吸物或BALF 中MP‐DNA 拷貝數＞500/mL；（2）均接受支氣管鏡檢查，有發熱、咳嗽等癥狀，結合肺部影像學檢查確診。排除標準：（1）合并免疫性疾病、惡性腫瘤及其他呼吸道疾病者；（2）肺部影像學檢查和病原學檢測結果缺失，不能配合本次研究者。根據RMPP 的診斷標準［7］：在確診MPP 基礎上，應用大環內酯類藥物治療≥1 周無效，合并肺外多系統并發癥，仍持續存在臨床發熱、咳嗽等癥狀，肺部影像學檢查無好轉或加重者，238 例MPP 患兒分為RMPP 組（82例）和普通肺炎支原體肺炎（generalMycoplasma pneumoniaepneumonia，GMPP）組（156例）。

本研究經我院醫學倫理委員會批準（20191105），并獲得研究對象監護人知情同意。

1.2 資料收集

收集所有患兒的臨床資料，包括年齡、性別、體重，臨床表現［高熱≥39℃、呼吸急促（1～5歲兒童呼吸頻率≥40 次/min，5歲以上兒童呼吸頻率≥30 次/min）、咳嗽、發紺、肺部細濕啰音和哮鳴音］，實驗室檢查（白細胞計數、血小板計數、中性粒細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、血紅蛋白、白蛋白、乳酸脫氫酶、鐵蛋白）及肺部影像學檢查（胸腔積液、肺實變、肺不張及肺壞死）等。

1.3 標本采集

所有患兒均于發病第1天（急性期）抽取靜脈血3 mL 置于無抗凝劑的離心管中，3 500 r/min 離心10 min，取血清置于EP 管；所有患兒均于入院第1天（急性期）選擇病變重的肺段進行纖維支氣管鏡肺泡灌洗，收集BALF 混勻，3 500 r/min 離心15 min，取上清液置于EP 管，均在-70℃保存待檢。RMPP患兒繼續給予內科保守治療，其中73例RMPP患兒治療病情好轉后（恢復期）再次接受纖維支氣管鏡檢查，進行第2次采集血液和BALF。

1.4 檢測方法

應用博科全自動酶聯免疫分析儀（山東博科生物有限公司，型號BK‐EL10C），酶聯免疫吸附法檢測血清和BALF中autotaxin、IL‐6及IL‐8水平，試劑盒由廣州生物科技公司提供。另使用7180 日立全自動生化儀及配套試劑，免疫透射比濁法檢測CRP水平。操作過程嚴格按照說明書進行。

1.5 統計學分析

采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析。符合正態分布計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩樣本或配對t檢驗；非正態分布的計量資料以中位數（四分位數間距）［M（P25，P75）］表示，組間比較采用Mann‐WhitneyU檢驗。計數資料以例數和頻率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher 確切概率法。繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC） 曲線分析autotaxin水平對兒童RMPP的預測價值，曲線下面積（area under the cure，AUC）比較采用Z檢驗。相關性分析采用Pearson法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RMPP組和GMPP組患兒臨床資料比較

RMPP 組患兒住院時間長于GMPP 組，高熱、胸腔積液、肺實變、肺不張的比例，以及中性粒細胞百分比、乳酸脫氫酶及鐵蛋白水平均高于GMPP 組，RMPP 組白蛋白水平低于GMPP 組（P＜0.05），見表1。

表1 RMPP組和GMPP組患兒臨床資料比較

2.2 RMPP 組 和GMPP 組 血 清 和BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比較

RMPP 組血清和BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平均高于GMPP組（P＜0.001），見表2。

表2 RMPP組和GMPP組血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比較 （±s）

表2 RMPP組和GMPP組血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比較 （±s）

注：［autotaxin］自分泌運動因子；［IL‐6］白細胞介素‐6；［IL‐8］白細胞介素‐8；［CRP］C‐反應蛋白；［GMPP］普通肺炎支原體肺炎；［RMPP］難治性肺炎支原體肺炎；［BALF］支氣管肺泡灌洗液。

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2.3 RMPP 患兒急性期和恢復期血清和BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比較

RMPP患兒急性期血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平均高于恢復期（P＜0.001）。見表3。

表3 RMPP患兒急性期和恢復期血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比較 （±s）

表3 RMPP患兒急性期和恢復期血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比較 （±s）

注：［autotaxin］自分泌運動因子；［IL‐6］白細胞介素‐6；［IL‐8］白細胞介素‐8；［CRP］C‐反應蛋白；［BALF］支氣管肺泡灌洗液。

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2.4 血清autotaxin、IL‐6、IL‐8 及CRP 水平對兒童RMPP的預測價值

以RMPP 為研究對象，GMPP 作為參考線繪制ROC曲線，結果顯示血清autotaxin水平最佳截斷值為14.25 mg/L 時，其預測兒童RMPP 的AUC 大于IL‐6、IL‐8 及CRP（分別Z=6.217、7.248、6.105，P＜0.001），靈敏度為87.4%，特異度為83.7%。見表4和圖1。

表4 血清autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平對兒童RMPP的預測價值

圖1 血清autotaxin、IL‐6、IL‐8 及CRP 水平預測兒童RMPP的ROC曲線

2.5 BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8 及CRP 水平對兒童RMPP的預測價值

以RMPP為研究對象，GMPP作為參考線繪制ROC曲線，結果顯示BALF中autotaxin水平最佳截斷值為10.86 mg/L時，其預測兒童RMPP的AUC大于IL‐6、IL‐8及CRP（分別Z=5.163、6.637、6.824，P＜0.05），靈敏度為81.4%，特異度為86.0%。見表5和圖2。

圖2 BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平預測兒童RMPP的ROC曲線

表5 BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平對兒童RMPP的預測價值

2.6 RMPP 患兒血清和BALF 中autotaxin 水平與各臨床指標的相關性

Pearson 相關分析顯示，RMPP 患兒血清和BALF 中autotaxin 水平‐5 IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均呈正相關（P＜0.001）。見表6。

表6 RMPP患兒血清和BALF中autotaxin水平與各臨床指標的相關性

3 討論

近年來，RMPP發病率呈升高趨勢，診治難度大、病情較重、療效不佳，常合并多種嚴重肺內外并發癥，嚴重危及患兒生命［8］。本研究發現，RMPP 組患兒住院時間長于GMPP 組，高熱、胸腔積液、肺實變、肺不張的比例，以及中性粒細胞百分比、乳酸脫氫酶及鐵蛋白水平均高于GMPP組，RMPP 組白蛋白水平低于GMPP 組。目前RMPP 缺乏有效的生物學指標，嚴重影響了RMPP的早期診斷和臨床治療。因此，如何對RMPP進行有效的早期診斷尤為重要。autotaxin是一種被認為起源于脂肪組織的分泌型糖蛋白，在大多數情況下的生物液體中都可以檢測到，包括血液和BALF，autotaxin 通過細胞外產生溶血磷脂酸參與許多慢性炎癥疾病的發病機制過程，如血管內環境穩定、骨骼和基質重塑、淋巴細胞運輸和免疫調節等，在慢性炎癥疾病中具有重要意義［9］。研究認為，autotaxin在肺細胞和免疫細胞中具有多種作用，與血管炎癥、糖脂代謝及肺部炎癥反應有關［10］。

本研究中RMPP 組血清和BALF 中autotaxin 水平明顯高于GMPP 組，且RMPP 患兒急性期autotaxin 水平明顯高于恢復期。提示autotaxin 水平變化與RMPP發生和病情恢復程度有關；恢復期患兒病情得到有效控制，autotaxin 水平明顯下降。autotaxin作為一種能夠加強細胞遷移的因子，在生物體內發揮著廣泛的生物學效應，其可能通過調節機體免疫炎癥反應來參與RMPP的發病過程，具有很大的潛在應用價值。Gao 等［11］研究指出，血清autotaxin水平升高與病情進展有關，是預測急性肺損傷患者死亡的獨立危險因子，可作為判斷疾病嚴重程度和預后的生物學指標。

炎性細胞因子在RMPP的發病機制中起關鍵作用，炎性細胞因子水平升高是過度炎癥反應的表現，是影響RMPP 發生發展的重要因素［12］。研究認為，過度的細胞免疫性反應和過高的炎性細胞因子表達在RMPP 發病過程中起著重要的作用［13-14］。IL‐6是一種重要的炎性細胞因子，具有很強的促炎作用，參與機體的炎癥反應，在RMPP的發病過程起到很大的作用［15］。IL‐8主要由單核-巨噬細胞產生，具有促進炎癥發展的作用，是判斷呼吸道疾病嚴重程度的輔助指標［16］。CRP 是一種急性時相反應蛋白，在機體感染或炎癥損傷時可顯著升高，參與炎癥反應過程，可作為監測感染性疾病嚴重程度的有效指標［17］。本研究顯示，RMPP 組血清和BALF 中IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均明顯高于GMPP組，且RMPP患兒急性期IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均明顯高于恢復期。提示IL‐6、IL‐8及CRP 水平變化與RMPP 發病和病情恢復程度有關。這主要是機體感染病原體后，不同淋巴細胞與非淋巴細胞自發或受刺激后形成，促進IL‐6、IL‐8及CRP大量產生，最終炎性細胞因子之間的相互作用共同參與RMPP 發病和進展；恢復期患兒，炎癥反應減輕，由促炎因子引發的過度炎癥反應得到控制，減少了機體損害。關敏等［18］研究表明，血清IL‐6、IL‐8及CRP水平在MPP患兒急性期時顯著升高，與病情嚴重程度有關，對重癥MPP的診斷及病情評估均有很好的幫助。

本研究ROC 曲線分析顯示，血清autotaxin 水平≥14.25 mg/L 或BALF 中autotaxin 水平≥10.86 mg/L時，其預測兒童RMPP 的AUC 均大于0.850，而且其AUC 均 大 于IL‐6、IL‐8 及CRP。說 明 血 清 和BALF 中autotaxin 水平對兒童RMPP 均具有較好的預測價值，有望作為預測兒童RMPP 的生物學指標。相關分析顯示，RMPP 患兒血清和BALF 中autotaxin 水平與IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均呈正相關，提示autotaxin 水平升高可能促進RMPP 患兒IL‐6、IL‐8及CRP的釋放，引發過度的細胞炎癥反應，進而共同參與RMPP的發生發展。既往研究認為，急性肺損傷患者血清autotaxin 水平明顯升高，對促進內皮功能障礙有重要作用，與疾病的過度炎癥和死亡有關［19］。

綜上所述，RMPP 患兒血清和BALF autotaxin水平明顯升高，其與病情恢復程度和炎性細胞因子有關，有望作為預測兒童RMPP 的生物學指標，對指導臨床治療具有一定幫助。但本研究為單中心的臨床研究，樣本選擇可能存在偏倚，未來仍需大規模、多中心的前瞻性研究來進一步證實。