口腔癌組織MK、SPARC表達量與臨床病理及預后轉歸的關系

王現玲 孫吏聰 郭培云 呂艷麗

近年來，口腔癌患病率逐年增加，尤以年輕人居多，由于口腔癌早期癥狀不太明顯，被臨床發現時往往確診為中晚期，導致患者生存率不高[1]。因此，早期診斷對改善口腔癌患者的生存率具有重要意義。中期因子(midkine，MK)是1988年Kadomatsu等發現的肝素結合生長因子，可以修復創傷，加快神經生長，增強纖維溶酶活性[2]。有研究報道[3]，MK在腎癌患者中的表達高于良性病變患者，可以提高腎癌的臨床診斷準確率。富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是1981年Termine等分離提純的細胞基質蛋白，在血管新生、組織修復、細胞遷移等方面發揮重要作用[4]。已有研究證實，SPARC在多種惡性腫瘤中存在高表達，但在口腔癌的相關報道較少[5]。本研究探討口腔癌組織MK、SPARC表達量與臨床病理及預后轉歸的關系，旨在為口腔癌的早期診斷給出有價值的參考指標。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2016年3月至2017年10月行手術切除的口腔癌標本組織84例，另取癌旁正常口腔組織作為對照。納入標準：①經病理及組織學檢查確診為口腔癌；②年齡大于18周歲。排除標準：①合并臟器疾病；②合并全身慢性疾病；③其他惡性腫瘤；④精神類疾病；⑤手術前沒有進行過化療。入選患者中男性46例，女性38例；年齡28～79歲，平均(64.32±5.82)歲；癌旁正常口腔組織距離腫瘤邊緣5 cm以上，經病理證實無腫瘤浸潤。

1.2 方法

對MK、SPARC進行免疫組織化學染色，操作嚴格按照試劑盒(北京中山生物技術有限公司)說明書進行。(1)在光鏡(×400)下，MK陽性標準為細胞膜/質中觀察到清晰的棕黃色顆粒。隨機選取10個視野，陽性細胞數15%以上為高表達，小于15%為低表達[6]。(2)采用半定量積分法判定SPARC結果，SPARC陽性為細胞質和細胞間質呈黃色。以染色強度計分：棕褐色3分，棕黃色2分，淺黃色1分，無色0分。在光鏡(×400)下，隨機選取5個視野，陽性細胞百分比>75%為4分，>50%～75%為3分，>10%～50%為2分，≤10%為1分，陰性為0分。兩項的乘積大于或等于3分，為免疫組化陽性，反之陰性[7]。

1.3 隨訪

于術后通過電話詢問、門診復診等方式隨訪，統計患者的死亡率，以患者死亡為觀察終點，隨訪截止時間是2020年10月。

1.4 觀察指標

癌組織和癌旁組織中MK和SPARC的表達差異，MK和SPARC表達水平與臨床病理特征以及患者3年生存率的關系。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 2組組織中MK和SPARC表達情況比較

口腔癌組織中MK的高表達率為52.38%(44/84)，高于癌旁組織的2.38%(2/84)(χ2=52.807,P<0.001)；SPARC的陽性表達率為40.48%(34/84)，低于癌旁組織的65.48%(55/84)(χ2=10.537,P=0.001)。

2.2 癌組織中MK、SPARC表達水平與臨床病理特征的關系

MK在分化程度低、有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的口腔癌組織中，高表達率高于分化程度高、無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的口腔癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑的口腔癌組織中無明顯差異(P>0.05)；SPARC在分化程度低、無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的口腔癌組織中，陽性率高于分化程度高、有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的口腔癌組織(P<0.05)，而在不同年齡、性別、腫瘤直徑的口腔癌組織中無明顯差異(P>0.05)。見表1。

表1 MK、SPARC表達水平與口腔癌臨床病理的關系(例，%)

2.3 不同MK和SPARC表達水平與患者預后關系

對84例口腔癌患者進行隨訪，隨訪36個月，以患者口腔癌復發死亡為觀察終點，死亡45例，3年總生存率是46.43%(39/84)。MK高、低表達者3年生存率分別是38.64%(17/44)、55.00%(22/40)，差異有統計學意義(χ2=4.095，P=0.043)，見圖1。SPARC陰、陽性患者3年生存率分別是22.00%(11/50)、82.35%(28/34)，差異有統計學意義(χ2=29.638，P<0.001)，見圖2。

圖1 不同MK表達口腔癌患者生存曲線圖

圖2 不同SPARC表達口腔癌患者生存曲線圖

3 討論

口腔癌多發于頭頸部，與患者吸煙飲酒、局部刺激、病毒入侵等因素有關，目前，還沒有研究報道給出明確的發病機制[8]。MK是肝素結合生長因子家族中的一員，名稱是由妊娠中期首字母與腎臟英文首字母的合成，最早在小鼠胚胎瘤細胞中被發現[9]。有研究指出，MK與腫瘤的發展關系密切。正常組織中MK低表達或幾乎不表達，而在已有的文獻報道中，大腸癌、宮頸癌、肝癌、卵巢癌等癌組織中均呈現高表達[10]。研究結果顯示，與癌旁組織相比，口腔癌組織中MK的高表達率更高；且在分化程度低、有淋巴結轉移、臨床分期為Ⅲ、Ⅳ的口腔癌組織中，MK的高表達率更高，提示MK參與了口腔癌的發生和發展，有望成為口腔癌早期診斷的監測指標。錢濤等[11]研究表明，MK高表達率在肝內膽管癌腫瘤組織中表達更高，且表達水平與淋巴結轉移、分化程度、臨床分期有關；研究結果與其一致。MK可通過誘導增加交感神經元的數量，促進神經母腫瘤細胞的發生；還可以上調Notch信號通路相關蛋白，促進口腔癌細胞的增殖與遷移，進而促進口腔癌組織的生長與分化。MK生存曲線圖顯示，MK高表達口腔癌患者的生存率低于低表達者，與方慧英等[12]研究結論基本一致，提示MK與口腔癌預后關系密切。

SPARC是由成纖維細胞、內皮細胞等不同類別細胞分泌的糖蛋白，主要位于細胞外基質中，可作用于細胞基質，使其成分和結構發生變化來阻斷基質合成過程，同時可促進間質降解酶、膠原酶等多種蛋白酶的合成，在血管生成、腫瘤細胞表達中發揮作用[13]。SPARC在腫瘤組織中的表達呈兩級分化，在有些癌組織中低表達甚至幾乎不表達，而在部分癌組織中高表達，如前列腺癌、肺癌、黑色素瘤等。張書勤等[14]研究發現，SPARC在乳腺癌腫瘤組織中高表達，具有促癌作用。在細胞外基質中，SPARC可以降解基質蛋白，破壞細胞外基質的屏障保護功能，有助于腫瘤細胞遷移。此外，SPARC還能通過增加基底膜溶解產生的鈣離子結合肽，促進生成腫瘤血管，進而促進腫瘤的侵襲能力和轉移過程。本研究SPARC的表達結果與其相反。研究中，與癌旁組織相比，口腔癌組織中SPARC的陽性表達率更低；且在分化程度高、無淋巴結轉移、臨床分期為Ⅰ、Ⅱ的口腔癌組織中，SPARC的陽性表達率更高，提示SPARC參與了口腔癌的發生和發展，有望成為口腔癌早期診斷的監測指標。SPARC在口腔癌中具有抑癌效果，作用機制有3個方面：(1)可以抑制基質金屬蛋白酶-7等腫瘤細胞因子的表達，減少腫瘤血管生成；(2)作用于內皮細胞DNA的合成過程，從而限制癌細胞的生長；(3)提高腫瘤細胞在放、化療中的敏感性，有助于加速腫瘤細胞凋亡。生存分析顯示，SPARC陽性患者的生存期低于陰性患者，提示SPARC陽性表達可以提高口腔癌患者的生存率。

綜上所述，MK和SPARC在口腔癌組織中表達水平比癌旁組織中更高。MK和SPAR在口腔癌組織中表達水平均與分化程度、有無淋巴結轉移、臨床分期有關；生存分析顯示，MK低表達和SPARC陽性的口腔癌患者生存率更高。MK和SPARC可以作為口腔癌疾病發展及預后的指標，檢測其水平有助于臨床及時干預治療，進而提高口腔癌患者的生存率。