雞傳染性貧血病免疫程序的合理制定與評估

張鵬 張承新 丁斌 王懷娜 包丹丹 趙清華 王雨婷 郭龍宗 李玉燕

摘 要：雞傳染性貧血病（CIA）是危害養禽業發展的重要病毒病之一，是一種免疫抑制性疾病。CIA常會與其他病毒、細菌病共感染，加重疾病進程，從而給養殖業造成巨大經濟損失。目前養殖場主要通過疫苗免疫來預防CIA的感染，免疫程序的合理制定與調整評估都是根據雞群抗體的變化規律來制定。本試驗選取2個祖代哈伯德肉種雞群和2個父母代哈伯德肉種雞群進行CIA抗體的檢測，以期評估CIA免疫程序的合理性。

關鍵詞：雞傳染性貧血病;免疫抑制性疾病;免疫程序;抗體監測

中圖分類號：S852.6 文獻標識碼：B 文章編號：1673-1085（2022）06-0059-03

雞傳染性貧血病（CIA）是一種免疫抑制病，能夠對機體的免疫系統造成損害，從而使機體抵抗病原微生物感染的能力下降。育成雞群發病表現生長遲緩，體重下降明顯，免疫抑制造成其它病種免疫失敗;若產蛋雞群在開產初期感染CIA，會導致產蛋率上升慢，而且無產蛋高峰;在高峰期發病則導致產蛋率下降10%～25%，嚴重影響經濟效益，同時種雞感染引起垂直傳播，使其后代雛雞死亡率增加，導致下游客戶養殖難度加大;若商品雞群感染，引起飼料轉化率下降、料肉比增加。最關鍵的是CIA常與其它病原混合感染，從而發生嚴重免疫抑制，甚至加重其它病情，增加養殖業對疾病的控制難度。近年來為了應對CIA頻發帶來的經濟損失，加強免疫是重要的手段之一，因此對CIA疫苗免疫效果的評估是必不可少的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本采集 本試驗選取膠東某養殖集團的2個祖代肉種雞場和2個父母代肉種雞場的雞群，分別在1～10周和13、16、19、26、34、42、52周等不同周齡采集血清，每個周齡各采集40份樣品，連續跟蹤檢測CIA抗體。

1.1.2 種雞場雞傳染性貧血病免疫程序 50日齡首次免疫雞傳染性貧血病活疫苗，免疫方式為刺種;132日齡加強免疫雞傳染性貧血病凍干活疫苗，免疫方式為將傳染性貧血病疫苗加入到新支法關四聯油苗，進行肌肉注射。

1.1.3 試驗試劑 雞傳染性貧血病病毒ELISA抗體檢測試劑盒購自美國IDEXX公司，批號為KT515，有效期為2023年8月3日。

1.1.4 試驗儀器 MK3酶標儀（美國ThermoFisher公司）、洗板機（TECAN公司）、移液器、2.5 mL一次性無菌注射器等。

1.2 方法

1.2.1 雞傳染性貧血病抗體檢測試驗方法和依據 雞傳染性貧血病抗體檢測方法為酶聯免疫吸附試驗（ELISA），檢測依據為雞傳染性貧血病診斷技術NY/T 1187-2019。所有試劑使用前需要恢復至室溫2 h，血清樣本解凍后要充分混勻，標記好孔位和樣本信息進行100倍稀釋。ELISA具體的試驗操作按照《IDEXX雞傳染性貧血病試劑盒說明書》進行。

1.2.2 血清樣品的準備 首先制定詳細的采血計劃，按照計劃隨機抽樣，采集4個雞群的血清，每周齡采集40只雞。血清自然析出后，轉移至離心管中-20 ℃凍存，血清樣本禁止反復凍融。待4個種雞群的血清全部采集完成后集中檢測，以減少因試劑盒批號不同、實驗條件差異、操作人員差異而產生誤差。

1.2.3 ELISA試驗結果判讀 試驗終止后用酶標儀讀取每一份樣品的OD650數值，通過公式S/N值=樣品OD650/陰性對照平均值和Log10滴度=（S/N-2.72）/-0.64，計算S/N值和滴度值，或通過IDEXX分析軟件進行計算。試劑盒判定標準：S/N值≤0.6為陽性，或抗體滴度>999為陽性。

2 結果

2.1 1～8周的血清CIA抗體檢測

根據4個種雞群1～8周的血清CIA抗體檢測結果，發現：母源抗體在一周內迅速下降，在14日齡基本完全消失（表1）。

2.2 9～52周的血清CIA抗體檢測

根據4個種雞群9～52周的血清CIA抗體檢測結果顯示：種雞群在50日齡首免CIA活疫苗后2周開始產生抗體，免疫后3周抗體可達到理想的水平，從而使種雞在育成期得到很好的保護;種雞群在19周加強免疫CIA活疫苗后，可使整個產蛋期的抗體維持較高水平，也給后代雛雞提供較好的母源抗體保護（表2）。

2.3 結果分析

根據IDEXX的分析數據可知：雞群CIA抗體在1 000～2 460范圍內可以阻止母雞排毒，降低水平傳播的風險;雞群抗體高于2 460可以阻止垂直傳播。

根據各周齡CIA免疫后的抗體檢測結果，得出：本試驗4個種雞群的CIA免疫程序及免疫方式比較合理，可以保護種雞群在育成期和開產前獲得高陽性率和高抗體滴度，保護種雞群不受CIA病毒威脅，同時可提供給后代雛雞足夠的母源抗體。父母代A、B組和祖代A、B組1～52周CIA抗體趨勢見圖1。

3 討論

種雞群CIA免疫的保護性抗體水平、最佳免疫時間以及免疫頻率都需要依據抗體變化規律來制定。通過實驗室監測免疫雞群的CAI抗體水平，既可有效地評估不同種類CIA疫苗的免疫效果，也可以評估雞群的免疫合格率，從而根據免疫效果和免疫合格率選擇合適的疫苗、制定合理的免疫程序。有研究表明雞傳染性貧血病病毒抗體從種雞到后代的傳遞效率在50%～60%，因此為了保證種雞在整個產蛋期有足夠的抗體傳遞給后代雛雞，種雞群需在開產前獲得高抗體滴度和高陽性率，以保證后代雛雞有足夠的母源抗體，這是預防雞傳染性貧血病的關鍵。根據檢測數據表明，種雞在開產前100%的抗體滴度應在6 500以上;產蛋中期（38～42周）90%的抗體滴度應在6 500以上，10%的抗體滴度應在5 000以上;淘汰前80%抗體滴度應在6 500以上，沒有低于2 460的抗體滴度。達到以上抗體滴度水平，種雞群可不受CIA病毒的威脅，同時可向后代雛雞提供有效的母源抗體保護。

從表1的檢測數據顯示：無論是種雞還是商品雞，母源抗體在14日齡完全消失，如果此時有CIA病毒攻擊雞群，很容易造成雞群感染。CIA活疫苗的免疫時間不可早于50日齡，易引起免疫抑制，免疫后產生抗體需要2周的時間。因此，種雞群在14～64日齡、商品雞在14日齡到出欄的時間存在免疫空檔期，在這段時期除了加強飼養管理、做好生物安全措施外，還應考慮增加一次油苗免疫來提高CIA抗體水平，以防止CIA病毒的感染。

*基金項目：“財政部和農業農村部：國家現代農業產業技術體系資助”（CARS-41）;山東省重點研發計劃，項目編號：2021CXGC010805。

作者簡介：張鵬（1980—），女，本科，主要從事規模化種雞場禽病預防研究，E-mail：zhangpeng80815@163.com;

并列第一作者：張承新（1985—），男，本科，主要從事父母代種雞場綜合管理與研究，E-mail：zcxysgf@163.com。

**通信作者：郭龍宗（1981—），男，碩士，高級獸醫師，主要從事規模化種雞場實驗室管理，E-mail：guolongzong1981@163.com;

并列通信作者：李玉燕（1982—），女，碩士，高級獸醫師，主要從事規模化養殖場疾病預防研究，E-mail：lyuyan918@163.com。