VEGF、IL-17、IL-35 和LDH 在多發性骨髓瘤患者中的表達水平及臨床意義分析

李雯雯 周章軍

多發性骨髓瘤是血液系統第二位常見惡性腫瘤,是一種由克隆漿細胞惡性增殖、異常積聚所引起的疾病,多發于老年人群,且無法治愈［1］。多發性骨髓瘤具有起病隱匿的特點［2］,早期臨床癥狀復雜多樣且缺乏特異性,常見癥狀包括貧血、骨病、腎功能損害等骨髓瘤相關靶器官損傷,以及感染、繼發淀粉樣變性等相關表現。本病在生物學行為、臨床表現及預后方面都有極大的異質性,不同患者對治療反應及生存期長短差異較大。目前臨床上尚未完全明確該病的病因,但認為同細胞遺傳學、造血微環境等因素有關。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在腫瘤的發生、轉移中具有重要作用,可評估多種惡性腫瘤的療效及預后。乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)廣泛存在于人體組織中［3］,

能反映腫瘤負荷,其水平的升高與腫瘤性疾病進展有關,也被視為多種血液腫瘤的預后指標。另外白介素-17(interleukin-17,IL-17)、白介素-35(interleukin-35,IL-35)分別為促炎因子、抗炎因子,在多種惡性腫瘤的發生中起到關鍵作用。本文就上述4 種指標在多發性骨髓瘤中的表達水平進行檢測和分析,旨在為該病的臨床診療提供更豐富的信息。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月～2021 年11 月就診于廈門市海滄醫院腫瘤血液科的65 例初診多發性骨髓瘤患者作為疾病組,選取同期的健康成年體檢者60 例作為健康組。疾病組中,男40 例,女25 例；年齡46～80歲,平均年齡(63.25±5.81)歲；免疫分型：免疫球蛋白(Ig)A型20例,IgD型3例,IgG型32例,輕鏈型10例；根據2005年國際骨髓瘤工作組(International Myeloma Working Group,IMWG)制定的ISS分期系統［4］,ISS 分期：Ⅰ期15 例,Ⅱ期16 例,Ⅲ期34 例。健康組中,男36 例,女24 例；年齡45～79 歲,平均年齡(63.18±5.86)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。納入標準：疾病組均為經免疫學、分子生物學、骨髓形態學等檢查確診的多發性骨髓瘤患者,診斷符合《中國多發性骨髓瘤診治指南(2017 年修訂)》［5］中相關診斷標準,且所有患者均為初治；均為成年患者；神志清楚、自愿參與此次研究者。排除標準：存在其他血液系統疾病者；合并其他惡性腫瘤者；存在免疫缺陷、活動性感染者；存在嚴重肝腎功能不全者。

1.2 方法 檢測方法：應用肝素抗凝管采集所有受檢對象的晨起空腹靜脈血4 ml,以3000 r/min的速度離心10 min,分離出血清。應用酶標儀和酶聯免疫吸附法對VEGF、IL-17、IL-35 進行檢測,應用全自動生化檢測儀和免疫比濁法對LDH 進行測定。根據試劑盒和儀器說明書進行嚴格、規范操作。疾病組在治療前及誘導化療3 個周期后采集上述指標并分析。

治療方案：所有疾病組患者均接受以硼替佐米為基礎的誘導治療,方案包括VRd(硼替佐米/來那度胺/地塞米松)、VTd(硼替佐米/沙利度胺/地塞米松)或VCd(硼替佐米/環磷酰胺/地塞米松),21 d為1個周期。治療3 個周期后評估療效,再按療效分為治療有效組和疾病進展組,復查上述指標。

1.3 觀察指標 觀察比較疾病組初診治療前患者和健康組的檢測結果。對疾病組中不同臨床分期,誘導治療后不同治療效果患者的檢測結果進行觀察比較。分析疾病組中血清IL-17 與其他指標之間的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS25.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗,多組間計量資料比較采用F檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組檢測結果比較 治療前,疾病組患者的VEGF、IL-17、LDH 均高于健康組,IL-35 水平低于健康組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組檢測結果比較()

表1 兩組檢測結果比較()

注：與健康組比較,aP＜0.05

2.2 疾病組不同ISS分期患者指標水平比較 疾病組中,ISSⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者的VEGF、IL-17、IL-35、LDH 水平比較,差異有統計學意義(P＜0.05)；ISSⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者VEGF、IL-17、IL-35、LDH 水平兩兩比較,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 疾病組不同ISS 分期患者指標水平比較()

表2 疾病組不同ISS 分期患者指標水平比較()

注：ISSⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期各指標比較,P＜0.05

2.3 疾病組不同治療效果患者指標水平比較 疾病組經3 個周期誘導化療后評估,治療有效55 例,其中完全緩解13例,非常好的部分緩解15例,部分緩解27例。疾病進展10 例。治療有效組的VEGF、IL-17、LDH均低于疾病進展組,IL-35高于疾病進展組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 疾病組不同治療效果患者指標水平比較()

表3 疾病組不同治療效果患者指標水平比較()

注：與疾病進展組比較,aP＜0.05

2.4 相關性分析 經pearson相關性分析顯示,疾病組患者治療前的血清IL-17與IL-35為負相關(r=-0.516,P＜0.05),與VEGF、LDH 均為正相關(r=0.721、0.684,P＜0.05)。

3 討論

多發性骨髓瘤為惡性漿細胞疾病［6］,起源于生發中心后B 細胞并能夠產生單克隆免疫球蛋白。由于骨髓中克隆性漿細胞異常增生,腫瘤細胞的浸潤,會出現骨質破壞、貧血、神經系統癥狀、腎臟病變等器官或組織損傷,且患者的正常免疫球蛋白的生成受到抑制,容易合并感染。隨著新藥研發、新治療手段的出現,多發性骨髓瘤患者的生存和預后都有了很大改善,但仍有部分患者病情難以控制或早期復發,該病在臨床表現和預后上都存在著很大的異質性［7］,因此,能夠選擇合理的指標判斷疾病進展,早期識別出高危患者對改善患者預后十分重要。

正常漿細胞及所有髓內階段的骨髓瘤細胞都依賴于骨髓微環境生長、發育和分化。炎癥微環境在腫瘤發生、發展中具有重要意義［8］,而免疫缺陷、免疫失衡會促進疾病進展。多發性骨髓瘤骨髓微環境中免疫活化物的增加,會導致大量生長因子、細胞因子、趨化因子的分泌,如白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、γ 干擾素等,這些因子在促進瘤細胞的增殖、生長、耐藥和遷移中發揮重要作用,從而引起疾病進展、惡化。腫瘤的分期和預后評估應當充分體現疾病的異質性特點。傳統的預后因素主要為反映腫瘤負荷的指標,如漿細胞特性,終末器官受累等。綜合傳統因素,各工作組提出了許多不同預后評估體系,其中基于細胞遺傳學的預后體系對識別高危患者顯示了較高的效率。但由于部分患者無法獲得足夠的中期分裂相供分析,使得常規核型分析具有一定局限性。而FISH 檢測對實驗室技術水平要求較高,也不利于在基層醫院開展。因此能夠聯合更多具有預后意義的指標如腫瘤微環境的細胞因子及血清學指標來更好地反映疾病的發病機制和生物學特性具有重要意義,從而也能更好地指導疾病的診療。

隨著臨床研究的不斷深入,發現新生血管的形成同實體腫瘤、血液系統腫瘤的進展、預后密切相關。VEGF 在調節血管新生中起關鍵作用,同腫瘤的生長、轉移有著緊密的聯系［9］。VEGF 能夠刺激血管內皮細胞增殖,且與細胞膜上受體特異性結合可促進血管生成、腫瘤組織周圍淋巴血管增生,導致腫瘤出現遠處轉移。多發性骨髓瘤患者骨髓中微血管密度明顯增加,血管新生為骨髓瘤細胞生長創造有利的微環境,VEGF是由骨髓瘤細胞分泌產生［10］,其水平的變化提示微血管通透性增加,并與該病的多種生物學行為表現關系密切。目前已有多種抑制血管新生藥物應用于臨床,如沙利度胺、來那度胺、泊馬度胺等,能夠抑制促血管新生因子分泌,封閉促血管新生因子活性,抑制促血管新生因子所誘導的血管內皮細胞增殖和遷移,或誘導凋亡,與化療和放療有協同作用。本研究也顯示,予抗血管新生治療聯合誘導化療有效的患者其VEGF表達水平顯著下降,可為預后及療效反應的判定提供依據。

輔助性T 細胞17(Th17)主要分泌IL-17、白介素-22(IL-22)等炎癥因子,在感染、免疫性、腫瘤性疾病的發生、發展中起重要作用,并可對腫瘤免疫進行調控［11］。Th17 細胞通過對信號轉錄因子進行調節,誘導內皮細胞、上皮細胞分泌IL-6,激活破骨細胞引起骨髓瘤細胞增殖,同時還可誘導血管生成因子表達,引起腫瘤內新生血管生成［12］。IL-17 是由Th17 細胞分泌產生的一種促炎因子,其結合受體,誘導特定轉錄因子可啟動靶基因轉錄,提高IL-6、白介素-10(IL-10)等炎癥因子的表達水平,激活破骨細胞,抑制成骨細胞,引起骨質破壞。同時IL-17 還可抑制腫瘤細胞的凋亡。IL-35 是由調節性T 細胞(Treg)分泌產生,具有免疫抑制作用,并對不同T細胞亞群具有選擇活性,在未致敏的T細胞中呈異常表達,可增加調節活性,促使Th1、Treg 細胞增殖,進而促進γ-干擾素的合成,在活化T-bet 的同時可抑制Th17 細胞的活化,抑制腫瘤細胞增殖［13,14］。

LDH 是糖酵解途中重要的酶,在某些惡性腫瘤尤其血液系統腫瘤中血清LDH 水平常顯著增高。其水平反映了腫瘤負荷及其增殖活躍程度。另外多發性骨髓瘤患者貧血、感染、炎癥介質釋放等因素也可導致細胞損傷、無氧酵解增強,其代謝產物蓄積,致使LDH釋放,引起血清LDH 水平升高。本研究發現,腫瘤患者血清LDH 水平明顯高于健康組,且水平升高趨勢與ISS 分期相一致,提示LDH 水平增高與腫瘤的惡性疾病過程及預后相關,與國內學者研究報道一致［15,16］。目前,臨床常用的ISS 分期系統,也將LDH 納入其預后評估體系,高水平LDH 與多發性骨髓瘤患者的不良預后有關［17］。

本次研究顯示,治療前,疾病組患者的VEGF、IL-17、LDH 均高于健康組,IL-35 水平低于健康組,差異有統計學意義(P＜0.05)。疾病組中,ISSⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者的VEGF、IL-17、IL-35、LDH水平比較,差異有統計學意義(P＜0.05)；ISSⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者VEGF、IL-17、IL-35、LDH 水平兩兩比較,差異有統計學意義(P＜0.05)。疾病組經3 個周期誘導化療后評估,治療有效55例,其中完全緩解13例,非常好的部分緩解15 例,部分緩解27 例。疾病進展10 例。治療有效組的VEGF、IL-17、LDH 均低于疾病進展組,IL-35 高于疾病進展組,差異有統計學意義(P＜0.05)。提示根據上述檢測結果的變化可對多發性骨髓瘤的診療提供指導。另外經pearson相關性分析顯示,疾病組患者治療前的血清IL-17與IL-35為負相關(r=-0.516,P＜0.05),與VEGF、LDH 均為正相關(r=0.721、0.684,P＜0.05)。機體在某種因素刺激下,Tregs細胞水平升高,破壞Treg/Th17平衡,Th17細胞會增加IL-17等細胞因子的分泌量,促使瘤細胞增殖,并降低IL-35水平,機體免疫失衡,促使疾病進展［18］。

綜上所述,VEGF、IL-17、IL-35 和LDH 表達水平的變化在臨床上判斷多發性骨髓瘤的發生發展及療效具有重要作用,監測上述指標對多發性骨髓瘤患者的預后具有一定的提示性。