烏梅丸中人參的薄層鑒別

越 亮 孫建彬 胡 彬 喻貴英 彭 爽 王 欣 羅維早

①重慶市中藥研究院 ②太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司

目的：建立烏梅丸中人參的薄層色譜鑒別方法。方法：使用硅膠G高效薄層板，以環(huán)已烷-乙酸乙酯-正丁醇-無水乙醇-甲酸-水（1.5:3:3:1.5:0.5:0.5）為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，進(jìn)行薄層色譜分析。結(jié)果：供試品色譜圖中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，各組分的分離良好，斑點(diǎn)均勻清晰。結(jié)論：所用方法專屬性強(qiáng)、耐用性好，完善了烏梅丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

烏梅丸由烏梅肉、花椒、細(xì)辛、黃連、黃柏、干姜、炮附子、桂枝、人參、當(dāng)歸組成。具有緩肝調(diào)中，清上溫下的功效。用于治療蛔厥，久痢，厥陰頭痛[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中鑒別項(xiàng)下只有烏梅、附子、黃連和黃柏的顯微鑒別；黃連、黃柏中鹽酸小檗堿，當(dāng)歸、干姜的薄層鑒別。為了完善該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以人參中的有效成分人參皂苷Rf、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re及人參皂苷Rb1為指標(biāo)，研究建立的烏梅丸中人參的薄層鑒別方法。

1 儀器與試藥

CPA225D型電子天平：十萬分之一，Sartorius；BS224S型電子天平：萬分之一，Sartorius；KQ5200型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市華歐實(shí)驗(yàn)儀器廠；CS101-2EBN電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠。硅膠G高效薄層板：規(guī)格為50×100mm，100×100mm，青島譜科分離材料有限公司。人參對(duì)照藥材（批號(hào)：120917-201211）、人參皂苷Rf（批號(hào)：111719-201104）、人參皂苷Rg1（批號(hào)：110703-201731）、人參皂苷Re（批號(hào)：110754-201525）及人參皂苷Rb1（批號(hào)：110704-201424）由中國食品藥品檢定研究院提供；烏梅丸（批號(hào)：201808001、201808002）及烏梅丸-人參陰性樣品由太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司提供；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

（1）對(duì)照品溶液的配備：取人參皂苷Rf對(duì)照品、人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品及人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，加甲醇制成每 l ml含1mg人參皂苷Rf、1mg人參皂苷Rg1、1mg人參皂苷Re及1mg人參皂苷Rb1的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

（2）對(duì)照藥材溶液的制備：取人參對(duì)照藥材1g，分別加50ml、50 ml水飽和正丁醇，超聲處理二次，每次30分鐘，過濾，合并濾液，濾液用等量氨試液萃取兩次，取上層正丁醇液，蒸干，用10ml三氯甲烷超聲溶解，過濾，再用三氯甲烷洗滌殘?jiān)鼉纱危看?ml，棄濾液，殘?jiān)?5ml甲醇溶解，濃縮甲醇至1ml，離心，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。

（3）供試品溶液的制備：取本品粉末30g，分別加150ml、100 ml水飽和正丁醇，超聲處理二次，每次30分鐘，過濾，合并濾液，濾液用等量氨試液萃取兩次，取上層正丁醇液，蒸干，用10ml三氯甲烷超聲溶解，過濾，再用三氯甲烷洗滌殘?jiān)鼉纱?，每?ml，棄濾液，殘?jiān)?5ml甲醇溶解，濃縮甲醇至1ml，離心，取上清液作為供試品溶液。另取烏梅丸人參陰性粉末30g，同法制成陰性供試品溶液。

（4）薄層鑒別：照薄層色譜法（通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-乙酸乙酯-正丁醇-無水乙醇-甲酸-水（1.5:3:3:1.5:0.5:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；而人參陰性樣品在藥材色譜相應(yīng)的位置上，無相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1。

圖1 烏梅丸中人參薄層圖

（5）展開條件的耐用性：對(duì)展開條件進(jìn)行了 4～10、25℃、30 ℃的溫度考察以及 18%、75% 相對(duì)濕度考察，分離效果均良好，證明該薄層鑒別方法耐用性良好，見圖2～圖6。

圖2 在30℃薄層圖

圖3 在25℃薄層圖

圖4 在4℃薄層圖

圖5 在相對(duì)濕度18%薄層圖

圖6 在相對(duì)濕度75%下的薄層圖

3 討論

（1）供試品制備方法的考察：我們借鑒《中國藥典》2020版一部人參項(xiàng)下薄層色譜鑒別的供試品制備方法制備供試品，發(fā)現(xiàn)在與對(duì)照品相應(yīng)位置上斑點(diǎn)不清晰，不易分辨。我們對(duì)供試品制備方法進(jìn)行了改進(jìn)，先采用水飽和正丁醇提取，再用三氯甲烷除雜質(zhì)，然后用較多的甲醇充分溶解樣品之后再濃縮至1ml，作為供試品溶液，點(diǎn)樣量3μl時(shí)，能夠顯示清晰的斑點(diǎn)。

（2）展開劑及顯色劑的考察：《中國藥典》2020版一部人參項(xiàng)下薄層色譜鑒別展開劑為三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）10°C以下放置的下層溶液，由于三氯甲烷的沸點(diǎn)較低，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其展開效果受溫度影響較大，并有時(shí)存在分離度不理想的問題。分別考察了以下幾個(gè)系統(tǒng)：環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水、環(huán)己烷-乙酸乙酯-無水乙醇-甲酸-水、環(huán)己烷-乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-甲酸-水、環(huán)己烷-乙酸乙酯-正丁醇-無水乙醇-甲酸-水。對(duì)以上系統(tǒng)進(jìn)行不同比例的調(diào)整和反復(fù)試驗(yàn)，最后確定環(huán)已烷-乙酸乙酯-正丁醇-無水乙醇-甲酸-水（1.5:3:3:1.5:0.5:0.5）為展開劑。比較了5%香草醛硫酸溶液和10%硫酸乙醇溶液的顯色效果，發(fā)現(xiàn)5%香草醛硫酸溶液較10%硫酸乙醇溶液的顯色效果好，最后確定5%香草醛硫酸溶液為顯色劑。