老年原發性肝癌患者血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平變化及與肝纖維化的相關性分析

靖潔

原發性肝癌是一種常見的惡性腫瘤，全球每年新發病例約60萬，而我國患病率約為全球的55%[1]。該腫瘤惡性程度高，腫瘤細胞播散轉移快，患者術后容易復發[2]。因此深入了解該病發病機制，加強防范意識，使肝癌在早期得以診治，對于提高患者生存率具有重要意義。可溶性甘露糖受體（Soluble mannose receptor，sMR）是一種模式識別受體[3]，膽堿酯酶是經肝臟合成并分泌的非特異性酶[4]，神經生長因子（Nerve growth factor，NGF）是一種神經營養因子[5]，這3種物質與肝癌的發生及發展存在一定關系。研究顯示[6]，目前肝纖維化在人群中比較常見，由病毒、酒精、毒物等因素所致，是發展為原發性肝癌的關鍵因素。另有研究顯示[7]，合并肝纖維化是肝癌術后復發的危險因素，術前肝纖維化指數＞5.4對肝癌患者術后預后不良有著一定的預測價值。為此，本研究檢測了老年原發性肝癌患者血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平變化情況，并分析其水平與肝纖維化的相關性，希望為臨床診治原發性肝癌提供新的方向。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年5月～2021年5月我院收治的127例原發性肝癌患者為惡性組，80例肝臟良性腫瘤患者為良性組，同期在我院行體檢的健康者80例為對照組。惡性組中男78例，女49例；年齡60～81歲，平均（67.43±3.77）歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期76例，Ⅲ～Ⅳ期51例；淋巴結轉移：未轉移87例，轉移40例；肝纖維化指數[8]：≤5.4 74例，＞5.4 53例。良性組中男47例，女33例；年齡60～82歲，平均（68.28±3.60）歲；類型：肝血管瘤33例，肝細胞腺瘤27例，肝囊腫20例。對照組中男49例，女31例；年齡60～83歲，平均（68.79±3.16）歲。納入標準：原發性肝癌經病理學檢查確診[9]；無其他部位腫瘤疾病；病歷資料完整；年齡≥60歲；心、腦、腎等器官無功能異常；簽署知情同意書。排除標準：入院前進行過手術、放化療等治療者；合并肝臟血管畸形者；合并血液系統疾病者；合并精神性疾病者；合并自身免疫性肝病者；合并腎臟疾病者；合并冠心病或糖尿病者；中途退出研究者。本研究獲得我院醫學倫理委員會批準（批準號WDRY2018-Q007）。

1.2 方法

1.2.1 血清標本采集 入院次日清晨空腹收集外周靜脈血5ml，使用德國SIGMA臺式高速冷凍離心機3-18KS（北京博勱行儀器有限公司）將外周血以3 000r/min離心10min后取上清液，冰箱保存待測。

1.2.2 血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平檢測 用酶聯免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）[10]，CMax Plus光吸收型單功能酶標儀（上海美谷分子儀器有限公司）、sMR試劑盒（上海聯邁生物工程有限公司）、膽堿酯酶試劑盒（上海群己生物科技有限公司）、NGF試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）測定血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平。

1.2.3 肝纖維化四項測定 用放射免疫法[11]、FJ-2008P型全自動放射免疫分析儀（上海實維實驗儀器技術有限公司）、肝纖維化系列試劑盒（北京華大吉比愛生物技術有限公司）測定血清層粘連蛋白、透明質酸、Ⅳ型膠原及Ⅲ型前膠原肽水平。

1.2.4 評價項目 比較3組血清sMR、膽堿酯酶、NGF、肝纖維化四項水平，比較不同病理特點（TNM分期、淋巴結轉移、肝纖維化指數）的原發性肝癌患者血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平，分析血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平變化與患者肝纖維化的相關性。

1.3 統計學分析 使用SPSS 22.0軟件進行統計分析，計量資料以±s表示，2組間比較采用t檢驗，3組間比較采用單因素方差分析（其中兩兩比較采用SNK-Q檢驗）。計數資料以n表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 3組血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平比較 惡性組sMR、NGF水平顯著高于良性組和對照組（P＜0.05），膽堿酯酶水平顯著低于良性組和對照組（P＜0.05），且良性組3項指標與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3組血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平比較（±s）

表1 3組血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與良性組比較，#P＜0.05

組別 例數 sMR（ng/ml） 膽堿酯酶（U/L）NGF（pg/ml）對照組 80 119.29±18.02 7480.60±638.09 11.12±6.32良性組 80 181.15±42.20* 5200.12±452.27* 22.39±10.03*惡性組 127 288.80±58.70*#2711.19±219.96*#34.27±17.42*#F 357.730 2975.990 77.130 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 3組肝纖維化指標比較 惡性組肝纖維化四項水平顯著高于良性組和對照組（P＜0.05），良性組和對照組肝纖維化四項水平比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 不同病理特點的原發性肝癌患者血清sMR、膽堿酯酶與NGF水平比較 TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、發生淋巴結轉移、肝纖維化指數＞5.4患者血清sMR、NGF水平顯著高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、未發生淋巴結轉移、肝纖維化指數≤5.4患者，而血清膽堿酯酶水平顯著低于Ⅰ～Ⅱ期、未發生淋巴結轉移、肝纖維化指數≤5.4患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 相關性分析 血清sMR、NGF水平與患者肝纖維化四項及肝纖維化指數呈正相關（P＜0.05），血清膽堿酯酶水平與患者肝纖維化四項及肝纖維化指數呈負相關（P＜0.05）。見表4。

表2 3組肝纖維化指標比較（±s，μg/L）

表2 3組肝纖維化指標比較（±s，μg/L）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與良性組比較，#P＜0.05

組別 例數 透明質酸 層粘連蛋白 Ⅲ型前膠原肽 Ⅳ型膠原對照組 80 56.53±8.11 90.25±10.52 95.28±11.90 54.24±8.07良性組 80 57.12±9.03 91.09±11.68 96.01±10.67 55.13±7.27惡性組 127 519.96±70.00*# 126.30±15.41*# 145.57±19.26*# 133.31±17.18*#F 3428.220 258.230 374.510 1336.420 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

表3 不同病理特點的原發性肝癌患者血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平比較（±s）

表3 不同病理特點的原發性肝癌患者血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平比較（±s）

病理特點 n sMR（ng/ml） t P 膽堿酯酶（U/L） t P NGF（pg/ml） t P TNM分期 -8.196 ＜0.001 49.972 ＜0.001 -3.313 0.001Ⅰ～Ⅱ期 76 250.12±47.74 3662.18±336.63 28.80±13.32Ⅲ～Ⅳ期 51 336.31±64.11 1527.72±130.39 40.16±21.92淋巴結轉移 5.782 ＜0.001 53.940 ＜0.001 -3.114 0.002無87 257.62±50.00 3880.07±340.12 27.45±13.68有40 317.41±62.29 1634.41±127.06 39.22±22.03肝纖維化指數 -7.654 ＜0.001 50.256 ＜0.001 -2.383 0.017≤5.4 74 242.18±46.34 3777.26±323.31 30.29±12.79＞5.4 53 325.56±68.93 1702.21±124.46 38.80±23.64

表4 血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平變化及與患者肝纖維化的相關性

3 討論

甘露糖受體（Mannose receptor，MR）為先天免疫系統中關鍵的內吞受體與模式識別受體，屬C型凝集素（C-type lectin，CTL）超家族成員，有多個胞外結構域，主要表達于樹突狀細胞膜表面和巨噬細胞膜表面，在誘導細胞因子合成、病原體識別、遞呈抗原及機體內環境穩定維持、清除膠原蛋白中起重要作用，可應用于慢性乙型肝炎、肝硬化等肝病和胰腺癌、結腸癌等惡性腫瘤的早期診斷和預后評估，并與肝纖維化形成關系密切。MR與配體之間相互作用能夠引起細胞內信號級聯放大，抑制或促進一氧化氮和白細胞介素1（Interleukin 1，IL-1）、腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α）等多種細胞因子表達。sMR保留了MR的特性，表達于外周血中[12]。研究顯示[13]，慢性乙肝肝纖維化患者不同病理分期循環血中sMR表達水平異常，且sMR能夠預測患者中重度肝纖維化的發生。報道提示[14]，sMR在肝癌中水平異常，與肝癌發病及進展有關。本研究結果顯示血清sMR在老年原發性肝癌中呈高表達，并與TNM分期、發生淋巴結轉移呈正相關，證明sMR與肝癌發生、病情發展及腫瘤惡性程度之間存在密切關系，與既往研究結果一致[15]。作者推測sMR可能通過與L-選擇素或者其他腫瘤相關抗原相互作用而介導腫瘤進展。

膽堿酯酶是一類糖蛋白，以同工酶形式分布于體內，由擬膽堿酯酶和乙酰膽堿酯酶組成，其中乙酰膽堿酯酶主要存在于機體腦脊液、紅細胞及中樞神經系統灰質內，而擬膽堿酯酶主要分布于機體淋巴液、肝臟及外周血中。血清膽堿酯酶通常是指擬膽堿酯酶，當機體肝細胞變性壞死或者受損時，血清膽堿酯酶含量會下降，其水平檢測有助于判斷肝細胞合成蛋白功能[16]。肝臟病變后血清膽堿酯酶水平會下降，并且不會受到血漿蛋白或輸血的干擾，對各類肝臟疾病及肝病嚴重程度有不同程度的評估價值[17]。研究發現[18]，血清膽堿酯酶與肝臟病變程度呈負相關，即血清膽堿酯酶水平可隨肝功能分級的增高而降低。本研究中，惡性組膽堿酯酶水平顯著低于良性組和對照組，且隨著TNM分期增高及淋巴結轉移的發生，血清膽堿酯酶含量呈下調趨勢，說明肝癌患者可能因為肝細胞變性壞死或者受損而引起血清膽堿酯酶含量降低。

NGF是一種神經營養因子，能夠促突起生長，對神經細胞發育、分化、再生、生長及功能特性表達予以調控。近年來，有學者發現該因子與腫瘤的發生、侵襲和轉移等生物學行為相關，能夠參與腫瘤細胞凋亡、轉移及腫瘤血管新生，如肺癌、食管癌、膽管癌、胰腺癌、胃腺癌等[19]。有報道[20]外源性NGF對肝癌細胞增殖和遷移具有促進作用，并與肝癌患者臨床病理特點相關，如腫瘤直徑、臨床分期、組織分化程度等。本研究結果顯示，惡性組血清NGF水平顯著高于良性組和對照組，提示肝癌患者血清中NGF為高表達，此結果與相關研究結果一致[21]。進一步分析發現，NGF水平隨著患者TNM分期的增高、發生淋巴結轉移而顯著升高，提示NGF可能參與肝癌進展。可能原因為NGF通過上調肝癌患者癌細胞內肝素酶合成分泌而促使腫瘤細胞增殖、轉移。

肝纖維化是由各致病因子誘發的肝結締組織增生異常致使肝細胞反復壞死或反復損傷的過程，也是細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）合成增多及ECM降解減少在肝臟內異常沉淀的結果。肝纖維化為各類肝病的常見病理改變，可反映肝臟病變程度。研究發現[22]，肝纖維化與肝癌的發生和發展有密切關系，肝纖維化是影響肝癌預后的關鍵因素之一，與肝癌復發風險相關。血清肝纖維化四項指標分別為層粘連蛋白、透明質酸、Ⅳ型膠原及Ⅲ型前膠原肽，均屬于ECM蛋白或者其降解產物，這四項指標能夠一定程度地反映肝纖維化進程。醫學資料顯示[23]，肝纖維化四項在原發性肝癌患者中呈高含量狀態，患者通過抗腫瘤治療干預后，四項指標水平顯著下降。本研究顯示，惡性組肝纖維化四項水平顯著高于良性組和對照組，提示肝癌患者可能存在不同程度的肝纖維化傾向，考慮與此類患者肝細胞受損程度大、腫瘤包膜破壞、ECM分解代謝活躍有關。此外，與肝纖維化指數≤5.4患者比較，肝纖維化指數＞5.4患者的血清sMR、NGF水平顯著升高，血清膽堿酯酶水平顯著降低，說明血清sMR、NGF水平與患者肝纖維化四項及肝纖維化指數呈正相關，血清膽堿酯酶水平與患者肝纖維化四項及肝纖維化指數呈負相關，提示血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平測定有助于評估原發性肝癌患者肝纖維化程度。

綜上所述，血清sMR、膽堿酯酶、NGF水平變化與老年原發性肝癌發病、進展及肝纖維化關聯密切，在其臨床診治中有潛在的應用價值。但本研究僅限于臨床患者，缺乏基因干擾、分子生物學等基礎方面的實驗，對各指標與肝癌的關系有待于更深入的研究。