日糧添加復合甘草素對肉雞生長性能和免疫功能的影響

劉 莉，郝福星，韓健寶，衣 蕾，胡元亮，武 毅*

（1.江蘇農牧科技職業學院，江蘇泰州 225300；2.南京農業大學，江蘇南京 210000）

甘草酸又名甘草甜素，是甘草的主要成分之一，是一種三萜類皂苷，具有抗病毒、抗癌、免疫調節和脂質代謝等多種活性作用（董永軍等，2008 ；王麗榮等，2004）。正常情況下，甘草酸在甘草根部以無機鹽的形式存在，表現出多種生物活性（楊銳等，2019 ；楊銳等，2016），如甘草酸二銨，可抑制GDF15、AF3 等與細胞凋亡相關基因的表達，阻斷HMOX1 的信號傳遞，由此可用作新型抗氧化劑，來修復胃病和氧化應激造成的黏膜損傷（衣蕾，2019 ；邵琦等，2016）。除此之外，甘草酸還可較明顯的改善大鼠體內的脂質代謝，攝入更少的高熱量來降低模型的肥胖率（陸倫根等，2004）。研究還發現，甘草酸能有效改善小鼠因藥物造成的記憶損傷，并且展現了一定的抗炎和抗氧化作用（刁亞英等，1999）。

為了更深入的了解甘草提取物和磷酸化甘草多糖在體內的免疫調節作用，本研究以甘草提取物及磷酸化甘草多糖為原料制作復合甘草素，以肉雞作為實驗動物，研究其體內活性作用。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物 復合甘草素，原料為質量比1 ：3的磷酸化甘草多糖和甘草提取物，以鄭州普羅動物藥業購買的烏茲別克甘草水提取液和甘草分別制作提取。

1.2 試驗材料 多聚甲醛，批號20200418 ；生理鹽水；甲醇（分析純），批號20200922；怡寶純凈水，批號20200910。IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2 和IL-12 ELISA 試劑盒，sIgA 和IL-17 ELISA試劑盒，均購自南京奧青生物科技有限公司。

甘草酸，批號20201021，購自南京道斯夫生物科技有限公司。

1 日齡未免疫健康白羽（817）優質肉雞，購自南京高淳宏旺養雞專業合作社。

1.3 疫苗和免疫程序 4 日齡：新- 支二聯活疫苗2 倍量滴鼻點眼；中牧股份南京藥械廠，批號，20200609。

7 日齡：新- 流二聯滅活疫苗0.3mL/ 只份，頸背部皮下注射；中牧股份南京藥械廠，批號，20200603。

12 日齡：法氏囊中等毒力活疫苗 2 倍劑量飲水；南京乾元浩生物股份有限公司，批號，20200607。

22 日齡：新城疫-IV 弱毒疫苗 2 倍劑量飲水免疫；南京乾元浩生物股份有限公司，批號，20200607。

1.4 動物分組及處理 試驗選用180 只1 日齡未免疫健康白羽（817）肉雞，隨機分為4 組，每組45 只，常規免疫新城疫疫苗。其中，3 個試驗組（FGSL、FGSM、FGSH）分別拌料投喂低（1 g/kg）、中（2 g/kg）、高（4 g/kg）濃度的復合甘草素，對照組采用常規日糧飼養。

1.5 復合甘草素中甘草酸和磷酸化甘草多糖含量的測定 以甘草酸和甘草次酸對照品為標準制作標準曲線，將所用復合甘草素進行處理與其相比對。

1.6 生長性能測定 于7、14、21、28、35 日齡，每組各取5 只稱重，比較各組體重變化。

1.7 新城疫抗體效價的測定 于7、14、21、28、35 日齡，每組各取5 只采血，將血樣置于37 ℃2 h，分離血清，用HA-HI 法測定血清抗體效價。

1.8 血清細胞因子及十二指腸洗液的sIgA 和細胞因子測定 于7、14、21、28、35 日齡，每組各取5 只翼下靜脈采血，分離血清，取5 cm 長的十二指腸，用生理鹽水沖洗3 次，收集洗液，4℃ 8000 r/min 離心10 min，收集上清液。按照ELISA 試劑盒說明測定血清中的IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-2 和IL-12 及十二指腸洗液中sIgA 和IL-17的含量。

1.9 數據分析 數據以“Means±SD”表示，用SPSS 軟件中的單因素方差分析程序進行分析，采用Duncan’s 法進行多重比較。P ＜0.05 表示組間差異顯著。

2 結果

2.1 體重變化 由表1 可知，在D7、D21，FGSM組體重顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D14、D28，各組體重無顯著差異（P ＞0.05）；在D35，FGSL和FGSM組的體重高于對照組，但無顯著差異（P ＞0.05）。

表1 各組體重變化

2.2 血清抗體效價的變化 由圖1 可知，在各時間段，試驗組效價最高，D7 各組差異不明顯（P ＞0.05），但D21、D28、D35，試驗組抗體效價均高于對照組（P ＜0.05）。

圖1 血清抗體效價的變化

2.3 血清細胞因子含量的變化

2.3.1 IFN-γ 含 量 的 變 化 由 表2 可 知，在D7，FGSH組 血 清IFN-γ 含 量 顯 著 高 于 對 照組（P ＜0.05）；在D14、D21、D28，FGSL、FGSM和FGSH組血清IFN-γ 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D35，FGSM和FGSH組 血 清IFN-γ 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表2 各組血清IFN-γ 含量的變化 Pg/mL

2.3.2 IL-2 含量的變化 由表3 可知，在D7、D21，FGSL、FGSM和FGSH組 的 血 清IL-2 含量高于對照組，但無顯著差異（P ＞0.05）；在D14，FGSH組的血清IL-2 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D28、D35，FGSL、FGSM和FGSH組血清IL-2 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表3 各組血清IL-2 含量的變化 Pg/mL

2.4 十二指腸洗液sIgA 和IL-17 含量的變化

2.4.1 sIgA 含量的變化 由表4 可知，在D7、D14、D28 和D35，FGSL、FGSM和FGSH組的血清sIgA 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）；在D21，FGSL組與對照組血清sIgA 含量無顯著差異（P ＞0.05），但FGSM和FGSH組血清sIgA 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表4 各組血清sIgA 含量的變化 mg/mL

2.4.2 IL-17 含 量 的 變 化 由 表5 可 知，在D7、D14，各 組 血 清IL-17 含 量 無 顯 著 差 異（P ＞0.05）； 在D28、D35，FGSL、FGSM和FGSH組的血清IL-17 含量顯著高于對照組（P ＜0.05）。

表5 各組血清IL-17 含量的變化 ng/mL

3 討論

3.1 復合甘草素對肉雞生長性能的影響 研究表明，中藥可通過增強機體免疫力來提高動物的生長性能（王麗榮，2015）。與對照組相比，雖然本試驗肉雞在1 ～35 日齡時肉雞初始體重偏低，復合甘草素在提高肉雞機體免疫力的同時也增強了基礎代謝，但隨著日齡的增加，日糧添加復合甘草素可顯著提高肉雞生長性能。

3.2 復合甘草素對細胞因子的影響 研究表明，細胞因子參與免疫應答與免疫調節，通過結合細胞表面相應的受體來發揮一系列的作用，血清中的細胞因子含量變化與T 細胞的活化有關，某些細胞因子能介導細胞免疫（董永軍等，2012）。在本研究中，在各時間段，試驗組中的IFN-α、IFN-β 等細胞因子的含量高于對照組。因此可以發現，血清中上述細胞因子的含量變化能更深一步的反應動物的免疫水平。

3.3 復合甘草素對免疫器官指數的影響 法氏囊、胸腺等是雞的主要免疫器官，免疫器官的良好發育可以為機體提供正常的免疫保護，因此，觀察免疫器官形態，分析免疫器官指數，可以很好的反應免疫器官的發育，更進一步的看出免疫器官的發育狀況，分析機體免疫水平。本研究結果展示，FGSH組可以在一定時間提升肉雞免疫器官指數，進一步提升機體免疫水平。

4 討論

綜上所述，在規?；B殖背景下，肉雞生長性能和免疫能力直接決定了養殖場（戶）的養殖效益和肉雞存活率。本研究在日糧中添加低（1 g/kg）、中（2 g/kg）、高（4 g/kg）濃度的復合甘草素，可有效改善肉雞生長性能和免疫功能?？紤]整個試驗期肉雞的飼料報酬，日糧添加中濃度的復合甘草素效果最佳。