季節因素對山羊超數排卵效果的影響

王成麗，鄧少鋒，田其真，曹 斌，桑樂樂，張振英，高淑煥，王樂雯，王 楠，宋宇皓，孫 昀，袁玉國*

（1.江蘇農牧科技職業學院，江蘇泰州 225300；2.揚州大學獸醫學院，江蘇揚州 225009）

隨著我國畜牧行業的蓬勃發展，畜牧業在我國經濟活動中占據著舉足輕重的地位。自改革開放以來，我國畜牧業生產取得了快速發展和進步（孟凡東，2012）。近幾年，人們對牛、羊等畜產品的需求不斷增長，牛、羊的養殖數量也大幅增加。總體看，我國牛、羊品種存在諸多缺陷，如生長較緩慢、畜產品產量低等，因此，引進國外優良品種改善我國牛羊品種已成為一種趨勢（李福俊，2002）。而胚胎移植可最大限度的發揮國外引進的優秀母畜在品種改良和育種中的作用，同時又是體外受精、轉基因、克隆等胚胎工程的基礎性環節，因此，胚胎移植在近些年成為研究熱點，不斷改進和完善胚胎移植的各個環節，并推廣應用于實際生產中（楊煒峰等，2002）。超數排卵作為胚胎移植技術中的基礎性環節，可誘導大量卵泡成熟排卵，增加可移植的胚胎數量，在胚胎移植中起著至關重要的作用（吳延光等，2002）。

超數排卵技術作為胚胎移植、轉基因、克隆等胚胎工程的基礎環節，在實際生產實踐中起至關重要的作用。在生產實踐和研究中，超數排卵技術主要運用于引進外來優良母畜，發揮優良母畜的繁殖潛力（亓美玉，2004），讓良種母畜卵巢上更多的卵泡成熟排卵，進而將胚胎移植到其他母畜子宮中發育，從而大幅度提高優良母畜可以獲得的后代數目（張春等，2000）。另一方面，超排技術作為胚胎移植技術的基礎，可以促進家畜的改良速度，加速遺傳進展，改變家畜種群的遺傳組成，防止出現因近親繁殖而造成的種群退化問題。此外，對優良母畜或稀有哺乳動物進行有計劃的胚胎保存，建立起“胚胎庫”也具有重大的生物學意義（李俊杰等，2007）。

超數排卵技術是進行胚胎移植和克隆等其他生物工程技術的基礎性環節，研究超數排卵技術和超數排卵效果影響因素具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 試驗奶山羊由上海轉基因研究中心實驗牧場提供，年齡在2 ～4 歲，體重30 ～40 kg，發育正常、健康無疾病。均超排一次，沒有進行重復超排。所有奶山羊均采用舍飼養殖，進行常規的飼養管理。

1.1.2 試驗藥品和器械 氯前列烯醇（PGF2α，上海市計劃生育科學研究所獸藥生產部，批號：060292200）；垂體促濾泡素（FSH，寧波激素制品有限公司，批號：20080509）；注射用促黃體素釋放激素A2（LHRH-A2，寧波激素制品有限公司，批號：060416）；陸眠靈（吉林省華牧動物保健品有限公司，批號：060303）

手提式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司）；羊用手術架（自制）；常用手術器械（國產）；超凈工作臺（蘇州市電壓調節器廠）；檢卵針（自制）；培養皿（Nunc 公司）；體視顯微鏡（北京泰克儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 試驗奶山羊每5 頭為1 組，作同期發情與超數排卵處理，進行常規的防疫和常規的飼養管理。試驗分別在春秋冬3 個季節進行，試驗時間從2014 年9 月到2015 年5 月。每個季節的試驗奶山羊至少保證50 頭以上，以減少因奶山羊個體差異而導致的試驗誤差。

1.2.2 同步發情和超排處理 每組奶山羊肌肉注射PG 0.1 mg/只，間隔9 ～12 d 進行第二次注射，劑量同第1 次。再間隔9 ～12 d 肌肉注射FSH，注射總劑量為300 IU，每間隔12 h 注射1 次，分6 次注射，劑量每24 h 遞減1 次。在注射最后一針FSH 的同時，肌肉注射PG 1 mL/ 只，24 h 后注射LHRH 75 IU/ 只，各組奶山羊同期發情和超排方案相同。

表1 試驗奶山羊超數排卵方案

1.2.3 手術回收卵母細胞 在試驗奶山羊肌肉注射LHRH 后27 h 進行手術，回收卵母細胞。術前奶山羊停食24 h，停水12 h。肌肉注射靜松靈進行全身麻醉，3 ～5 min 后奶山羊全身肌肉松弛，上手術架進行手術，回收卵母細胞。手術部位一般選在乳房前腹中線部位。用剃刀對手術部位刮毛后，用清水清洗局部，然后涂以4% 的碘酊，再用75% 的酒精脫碘，覆蓋滅菌創巾。常規外科手術打開腹腔，術者將食指及中指伸入腹腔，將兩側子宮角連同該側卵巢依次引至切口外，暴露子宮、輸卵管、卵巢，用沖卵液將卵母細胞從輸卵管內沖出，同時記錄卵巢發育狀況、排卵點、回收卵母細胞數量及卵母細胞的狀態等。

1.2.4 術后護理 試驗羊回收卵母細胞手術完成后，肌肉注射青霉素，術后當天給水及草料。

1.3 數據統計分析 本試驗所得數據采用t 檢驗進行統計分析。

2 試驗結果

2.1 不同季節山羊的超排效果 由表2 可知，在超排方法、奶山羊情況和激素等條件都相同的情況下，在非繁殖季節（春季）對奶山羊供體進行超排時，超排奶山羊的平均排卵點和平均獲卵數都低于繁殖季節（秋季和冬季）的超排效果，兩者差異顯著（P ＜0.05）。而秋季和冬季兩個繁殖季節之間的超排效果差異不顯著（P ＞0.05）。

表2 季節對山羊超排效果的影響

2.2 上海地區不同季節的主要氣候條件 由表3可知，上海一年四季的主要氣候條件包括平均氣溫和平均日照時間等。這些季節性因素對山羊超排具有重要影響。

表3 上海地區不同季節主要氣候條件

3 討論

影響奶山羊超排效果的因素很多，包括動物因素、藥物因素和其他環境因素等。試驗表明，奶山羊是嚴格的季節性發情動物，季節因素對山羊超排效果具有顯著影響，（周洪等，2007），而不同季節中平均氣溫和平均日照時間等季節氣候因素不同，是導致季節因素對于山羊超排效果產生影響的最根本因素。

3.1 氣溫對山羊超排效果的影響 在影響山羊超排效果的眾多季節性因素中，氣溫是主要因素之一。在奶山羊情況、超排方法和藥物因素等條件都相同的情況下，奶山羊在繁殖季節（秋冬季）的超排效果顯著高于非繁殖季節（春季）（P ＜0.05），原因之一是非繁殖季節的平均氣溫（15.3℃）顯著高于繁殖季節的平均氣溫（12.8℃），氣溫高使奶山羊的卵巢處于休眠狀態，對外源性促性腺激素的敏感性差，超排效果不明顯（袁玉國等，2011）。并且氣溫越高，超排效果越不理想，這也是夏季奶山羊超排效果最差的原因。在一定溫度范圍內，較低的溫度較有利于山羊的超排，但并不是溫度越低超排效果越好，如果溫度過低，會引起山羊冷應激，導致內分泌紊亂，對超排效果產生很大的負面影響。在本試驗中，由于上海地區的冬季平均溫度在山羊的適宜溫度范圍內，因此，冬季的超排效果并沒有因氣溫低而受到影響。

3.2 日照時數對山羊超排效果的影響 日照時間也是影響奶山羊超排效果的主要季節性因素之一。奶山羊是短日照繁殖動物，母羊由長日照過渡到短日照后開始發情。這是由于光照能通過調節短日照繁殖動物體內褪黑激素的分泌而提高FSH 濃度，延長FSH 的作用時間，推遲FSH 峰的出現，促進卵泡發育，同時顯著提高排卵時LH 濃度，促進排卵（Martemucci 等，1995）。從表2 和表3 可以看出，由夏季過渡到秋季，隨著日照時數的減少，奶山羊的超排效果顯著上升，但由冬季到春季，超排效果隨著日照時數的增加而降低。

4 結論

春秋冬3 個季節，奶山羊超排的平均排卵點和平均獲卵數分別為9.20 個、7.15 枚，10.58 個、9.48 枚和10.42 個、10.49 枚，春季平均排卵點和平均獲卵數均顯著低于秋冬季節，表明季節因素對奶山羊的超排效果具有顯著影響。

我們通過對奶山羊分組進行同期發情與超數排卵處理，每個季節的試驗奶山羊至少保證50 頭以上，以減少因奶山羊個體差異而導致的試驗誤差，然后進行同步發情和超排處理，最后手術回收卵母細胞。再對數據進行分析，結果發現，主要氣候條件包括平均氣溫和平均日照時間等。這些季節性因素的改變對不同季節山羊超排效果的差異具有重要意義。對日后研究山羊排卵的試驗提供一些基本數據。