腦血栓患者血清Dickkopf相關蛋白1、骨硬化蛋白表達水平及其與疾病嚴重程度的關系

王偉偉, 徐家萍, 賈軍輝, 張浩亮

(延安大學咸陽醫院 新生兒重癥監護室, 陜西 咸陽, 712000)

腦血栓是一種缺血性腦血管疾病，死亡率較高，同時還存在失語、偏癱等后遺癥[1-2]。腦血栓易損斑塊的整個發病過程與炎癥反應密切相關[3]。Dickkopf相關蛋白1(DKK-1)是一種血漿蛋白，具有2個富含半胱氨酸的區域。研究[4]表明, DKK-1可以參與調控腫瘤細胞生物學活動(增殖、遷移、侵襲)、胚胎發育期間的頭部形成、破骨細胞生成、炎癥反應等各種生理和病理過程。DKK-1在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者血清中表達上調，參與炎癥反應，加重動脈粥樣硬化程度[5]。

骨硬化蛋白(SOST)主要由骨細胞分泌，能夠抑制骨生長，并可在血清或血漿中鑒定到[6]。SOST的遺傳缺陷或缺失會導致罕見的高骨量硬化癥和范布赫姆病，抑制SOST水平會增加骨形成并減少骨吸收，導致骨量、骨礦物質密度和骨強度增加，降低骨折風險[7]。研究[8]顯示, SOST通過ERK1/2-MARK通路參與調控鼓室硬化過程中的炎癥反應，促進鼓室硬化的形成。Wnt信號通路參與調控動脈粥樣硬化和多種炎癥性疾病, DKK-1、SOST均為Wnt信號通路中重要的內源性抑制蛋白[9]。但DKK-1、SOST與腦血栓患者疾病嚴重程度的關系尚未闡明。本研究探究腦血栓患者血清DKK-1、SOST表達水平與疾病嚴重程度的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月—2021年6月收治的110例腦血栓患者(腦血栓組)為研究對象，其中男78例，女32例; 平均年齡(65.70±7.20)歲。根據美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)[10]將110例患者分為3組: NIHSS<4分為輕度組(33例), NIHSS 4～<10分為中度組(55例), NIHSS≥10分為重度組(22例)。另選取同期一般資料相匹配的體檢健康者110例為對照組，男81例，女29例; 平均年齡(64.80±8.60)歲。納入標準: 發病后72 h內就診者; 符合腦血栓診斷標準[11]者; 年齡58～78歲者。排除標準: 有敗血癥、風濕病者; 合并腎臟、肝臟疾病者; 合并心力衰竭者。患者及家屬自愿參加，且本研究通過倫理委員會批準。

1.2 方法

入組患者均采集10 mL外周血，分別使用血清DKK-1 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(貨號: EK0867, 武漢博士德生物公司)和SOST ELISA試劑盒(貨號: EK0968, 武漢博士德生物公司)檢測血清DKK-1、SOST水平。全自動生化分析儀檢測總膽固醇、超敏C反應蛋白、高密度脂蛋白等生化指標。

1.3 統計學分析

2 結 果

2.1 對照組與腦血栓組患者基線資料比較

2組患者年齡、高血壓病、超敏C反應蛋白等資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組研究對象基線資料

2.2 腦血栓組與對照組患者血清DKK-1、SOST水平比較

腦血栓組血清DKK-1、SOST水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 腦血栓組與對照組血清DKK-1、SOST比較 pg/mL

2.3 各組腦血栓患者血清DKK-1、SOST水平及NIHSS評分比較

輕度、中度、重度組患者血清DKK-1、SOST水平及NIHSS評分呈升高趨勢，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組腦血栓患者血清DKK-1、SOST水平及NIHSS評分比較

2.4 腦血栓患者血清DKK-1、SOST水平的相關性分析

Pearson相關性分析結果顯示，腦血栓患者血清DKK-1與SOST水平呈正相關(r=0.705,P=0.001)。見圖1。

圖1 血清DKK-1、SOST的相關性

2.5 血清DKK-1、SOST水平分別與NIHSS評分的相關性

腦血栓患者血清DKK-1水平與NIHSS評分呈正相關(r=0.625,P<0.001); 血清SOST水平與NIHSS評分也呈正相關(r=0.674,P<0.001)。

2.6 DKK-1、SOST診斷重度腦血栓的效能

ROC曲線分析結果顯示, DKK-1診斷重度腦血栓的曲線下面積(AUC)為0.879(95%CI: 0.808～0.950), 最佳截斷值為701.69 pg/mL, 特異度為73.90%, 敏感度為90.90%; SOST診斷重度腦血栓的AUC為0.815(95%CI: 0.710～0.919), 敏感度為86.40%, 特異度為72.70%, 最佳截斷值為380.51 pg/mL; DKK-1聯合SOST診斷的AUC為0.911(95%CI: 0.849～0.973), 敏感度和特異度分別為86.40%、84.10%。見圖2。

圖2 DKK-1、SOST診斷重度腦血栓的ROC曲線

3 討 論

腦血栓是因動脈粥樣硬化使血管增厚、管腔狹窄等造成局部供血不足，從而出現局部腦組織壞死[12]。動脈粥樣硬化的發展離不開炎癥反應，研究[13]發現，炎癥因子與老年急性腦梗死頸動脈粥樣硬化嚴重程度相關。Wnt信號通路參與調控動脈粥樣硬化和多種炎癥性疾病, DKK-1、SOST是Wnt通路中被研究最多的因子[9]。然而, DKK-1、SOST與腦血栓之間的關系尚不清楚。

DKK-1屬于DKK家族的一種分泌蛋白，能夠與LRP5/6結合以抑制Wnt信號通路，從而調節骨細胞分化。研究[14]表明, DKK-1與缺血性心臟病、腦血管疾病、冠狀動脈鈣化以及炎癥有關。據報道[5], DKK-1在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病中高表達，加重了炎癥反應，并使病情惡化。研究[9]表明，冠心病患者血漿DKK-1及炎癥指標超敏 C 反應蛋白、白細胞介素(IL)-6水平增加, DKK-1的高表達與冠心病患者冠狀動脈病變程度有關。一項前瞻性研究[15]發現，血清DKK-1與未來心血管事件存在獨立關聯。此外，在感染性疾病(支氣管炎、肺炎以及病毒感染)或血液疾病(骨髓衰竭和范可尼貧血)中，外周血DKK-1水平也會急劇增加[16]。結合本研究結果，輕度、中度、重度組DKK-1水平逐步升高，并且與NIHSS評分呈正相關性，說明DKK-1與腦血栓發展有關。上述研究進展提示, DKK-1可能通過誘導炎性細胞因子表達，加快腦血栓炎癥反應，推動與該病相關的炎癥循環。

SOST是由SOST基因編碼的分泌型糖蛋白，通過介導Wnt/β-鏈蛋白信號通路抑制骨形成[17]。研究[18]發現，終末期腎臟病患者血清SOST水平升高，且SOST水平與患者血管鈣化積分呈正相關。有關維持血液透析患者的研究[19]顯示，患者體內SOST表達異常上調，并且與血管鈣化程度有關。趙俊麗等[20]研究顯示，隨著SOST水平的升高，冠狀動脈鈣化率顯著增加、鈣化程度加重。SOST還參與炎癥反應。ERK1/2-MAPK通路在炎癥反應中處于關鍵地位，而SOST可以磷酸化ERK1/2, 介導鼓室硬化發生發展中的炎癥反應，促進鼓室硬化[8]。本研究中，腦血栓組患者血清SOST水平顯著高于對照組; 隨著患者腦血栓病變程度的加重，血清SOST水平逐步增高，提示SOST與腦血栓發病過程密切相關。血清SOST水平與腦血栓患者NIHSS評分呈正相關(r=0.674,P≤0.001)。提示SOST一方面可能通過調節炎性細胞因子參與腦血栓的發病過程，另一方面SOST在腦血栓中也可能受到其他因子調控，參與動脈粥樣硬化的血管鈣化，介導腦血栓的發生發展，然而其具體機制有待探究。血清DKK-1、SOST水平或可作為預測腦血栓患者疾病嚴重程度的潛在指標，本研究ROC曲線顯示, DKK-1、SOST診斷重度腦血栓的AUC分別為0.879(95%CI: 0.808～0.950)、0.815(95%CI: 0.710～0.919); DKK-1聯合SOST診斷的AUC為0.911(95%CI: 0.849～0.973), 優于DKK-1、SOST單獨診斷效能，說明DKK-1、SOST聯合檢測有助于臨床診斷重度腦血栓。

綜上所述，腦血栓患者血清中DKK-1、SOST水平較高，均與腦血栓嚴重程度呈正相關。DKK-1聯合SOST診斷重度腦血栓的效能較好, DKK-1、SOST水平變化具有作為臨床評估腦血栓疾病嚴重程度的生物標志物的潛能。但本研究存在局限性，樣本量較小，且DKK-1、SOST在腦血栓發生發展中的機制尚需進一步研究。