miR-29b及相關(guān)炎癥因子水平與冠脈CTA鈣化積分的相關(guān)性*

司東雷，李靜，李文洪，董麗娟**，王瑋娜，胡杰，趙夢(mèng)鷗，王書行

(1.河北醫(yī)科大學(xué)附屬石家莊第三醫(yī)院 CT/MRI科，河北 石家莊 050011；2.邯鄲市第二醫(yī)院 心內(nèi)二科，河北 邯鄲 056001；3.河北醫(yī)科大學(xué)附屬石家莊第三醫(yī)院 醫(yī)?？?，河北 石家莊 050011)

冠心病又稱冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，是較為常見的心血管疾病之一，多發(fā)于中老年人[1]。冠狀動(dòng)脈鈣化是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展到一定程度的體現(xiàn)，也是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的標(biāo)志[2]。臨床對(duì)冠心病的診斷主要依據(jù)為冠狀動(dòng)脈的狹窄程度，冠狀動(dòng)脈成像(coronary CT angiography，CTA)用于評(píng)估冠脈血管狹窄程度效果較好，在此基礎(chǔ)上得出的鈣化積分(coronary artery calcium score，CACS)則具有更好的敏感度和特異性[3]。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展通常伴隨炎癥的發(fā)生，炎癥反應(yīng)離不開炎癥細(xì)胞及炎癥因子的作用，近年的研究發(fā)現(xiàn)微小RNA也對(duì)粥樣硬化的形成有一定影響，Glaucylara G等[4]研究發(fā)現(xiàn)微小RNA對(duì)機(jī)體組織炎性反應(yīng)及冠心病病情等均有一定作用，本研究觀察miR-29b及炎癥因子水平與CACS的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年3月—2020年3月收治的60例冠狀動(dòng)脈造影診斷為冠心病的患者為觀察組，同期60例冠狀動(dòng)脈造影正常的其他患者為對(duì)照組。觀察組患者根據(jù)CACS再分為輕度鈣化組(n=13，≤100分)、中度鈣化組(n=27，>100～<400分)、重度鈣化組(n=20，≥400分)。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2019-21號(hào))。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)年齡≥18歲；(3)首次確診冠心病；(4)患者及家屬簽署知情同意書。觀察組排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并惡性腫瘤患者；(2)肝、腎及肺功能異?；颊?；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病患者；(4)有精神障礙者；(4)合并傳染性疾病患者；(5)接受過冠狀動(dòng)脈相關(guān)手術(shù)治療患者；(6)有鈣代謝異?；颊摺?/p>

1.2 方法

1.2.1基本資料 記錄受試者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、高血壓史、糖尿病史、吸煙史、飲酒史等基本資料，高血壓診斷符合《中國(guó)高血壓防治指南2018年修訂版》[6]標(biāo)準(zhǔn)，糖尿病診斷符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南(2017年版)》[7]標(biāo)準(zhǔn)，吸煙史指每天吸1支煙及以上累積達(dá)1年，飲酒史指每周飲酒超過30 g達(dá)半年以上。

1.2.2血清指標(biāo)檢測(cè) 于2組患者入院時(shí)抽取早晨空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心5 min，分離血清備用；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，檢測(cè)儀器為美國(guó)卡迪克公司的血脂檢測(cè)儀，試劑盒由上海西唐生物科技有限公司生產(chǎn)；采用免疫透射比濁法檢測(cè)血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)水平，檢測(cè)儀器為北京普朗新技術(shù)有限公司的全自動(dòng)生化分析儀，試劑盒由上海西唐生物科技有限公司生產(chǎn)；提取血清總RNA，通過miR Base數(shù)據(jù)庫(kù)獲取微小RNA-29b(miR-29b)相關(guān)成熟序列，設(shè)計(jì)引物，采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)微小RNA純度和濃度，計(jì)算miR-29b的相對(duì)表達(dá)量，試劑盒武漢致眾科技股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 基本資料比較

兩組被檢者性別、年齡、BMI、高血壓史、糖尿病史、吸煙史、飲酒史比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組被檢者基本資料比較Tab.1 Comparison of basic data between two groups

2.2 血清學(xué)指標(biāo)

結(jié)果顯示，觀察組患者血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平高于對(duì)照組，HDL-C、miR-29b水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組被檢者血清指標(biāo)比較Tab.2 Comparison of serum indexes between

2.3 不同程度鈣化組冠心病患者基本資料比較

不同程度鈣化組冠心病患者性別、年齡、BMI、高血壓史、糖尿病史、吸煙史、飲酒史、TC、TG、LDL-C、HDL-C比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同CACS患者基本資料比較Tab.3 Comparison of basic data of patients with different CACS

2.4 不同程度鈣化組冠心病患者血清指標(biāo)

不同程度鈣化組冠心病患者TC、TG、LDL-C、HDL-C比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；隨著患鈣化程度的加重，miR-29b逐漸降低，CRP、IL-6、IL-10逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 3組不同程度鈣化組冠心病患者血清學(xué)指標(biāo)比較Tab.4 Comparison of serum indexes in patients with different

2.5 冠心病患者與CACS的多因素回歸分析

回歸分析顯示，血清miR-29b(OR=1.392，95%CI為1.207～2.004)、CRP(OR=1.701，95%CI為1.039～2.897)、IL-6(OR=1.218，95%CI為1.114～1.385)及IL-10(OR=1.714，95%CI為1.197～2.215)是冠心病患者重度鈣化的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表5。

表5 冠心病患者狹窄冠狀動(dòng)脈鈣化程度的多因素回歸分析Tab.5 Multivariate regression analysis of calcification degree in stenotic coronary arteries of the patients with coronary heart disease

2.6 miR-29b、CRP、IL-6、IL-10與CACS的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清miR-29b水平與CACS呈負(fù)相關(guān)(r=-0.583，P<0.001)，與血清CRP、IL-6、IL-10 與CACS呈正相關(guān)(r=0.677、0.641、0.496，P<0.001)。見表6。

表6 血清miR-29b、CRP、IL-6、IL-10與CACS的相關(guān)性分析Tab.6 Association of serum miR-29b,CRP,IL-6,and IL-10 with CACS

3 討論

冠脈鈣化在臨床中對(duì)冠心病具有預(yù)警作用，也是冠心病患者治療后評(píng)估療效的可靠指標(biāo)，出現(xiàn)鈣化往往意味著動(dòng)脈粥樣硬化存在，而高鈣化面積對(duì)于預(yù)測(cè)動(dòng)脈狹窄具有高敏感度和特異性[8]。CACS用于心血管事件的預(yù)測(cè)安全且有效，目前常用檢測(cè)方式為影像學(xué)技術(shù)，CTA檢測(cè)具有簡(jiǎn)單、方便、風(fēng)險(xiǎn)小、費(fèi)用少、能重復(fù)等特點(diǎn)，還能對(duì)冠脈的鈣化程度和狹窄程度進(jìn)行定量分析[9]。但目前有關(guān)冠心病患者miR-29b及炎癥因子水平與CACS的關(guān)系的研究較少，本研究旨在通過探討miR-29b及炎癥因子水平與CACS的關(guān)系，為臨床診斷及治療此類患者提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，觀察組患者血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平高于對(duì)照組，HDL-C、miR-29b水平低于對(duì)照組，提示血清TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10、HDL-C、miR-29b與冠心病密切相關(guān)，在冠心病患者中TC、TG、LDL-C、CRP、IL-6、IL-10水平較高，HDL-C、miR-29b水平較低。有研究證實(shí)，血脂異常是導(dǎo)致冠心病的最重要的危險(xiǎn)因素，TC、TG、LDL-C過高或HDL-C過低都會(huì)引發(fā)冠心病，冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)與TC、TG、LDL-C水平呈正相關(guān)，與HDL-C水平呈負(fù)相關(guān)[10-12]，這與本研究結(jié)果相似。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA是一種重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，與粥樣硬化形成相關(guān)，其廣泛存在于正常細(xì)胞內(nèi)，能調(diào)控遺傳因素、染色體和氧化應(yīng)激相關(guān)因子，同時(shí)具有調(diào)節(jié)脂代謝的作用[13]。miR-29b作為一種新發(fā)現(xiàn)的與脂代謝相關(guān)的因子，與冠心病和冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的形成關(guān)系密切，miR-29b能調(diào)節(jié)上皮及間質(zhì)里的巨噬細(xì)胞，形成脂質(zhì)核心，并最終導(dǎo)致脂肪肝[14]。冠心病的形成與發(fā)展中一直伴隨有慢性炎癥發(fā)生，炎性細(xì)胞及炎癥因子在冠心病的發(fā)生到斑塊破裂中起重要作用，其中CRP與粥樣硬化的形成直接相關(guān)，CRP能誘導(dǎo)單核細(xì)胞黏附分子和細(xì)胞趨化蛋白-1產(chǎn)生并使血管內(nèi)皮功能紊亂，增加斑塊的不穩(wěn)定性[15]。IL-6貫穿冠心病炎癥發(fā)生的全程，IL-6濃度上升會(huì)導(dǎo)致斑塊產(chǎn)生破裂，斑塊面積持續(xù)增加，引發(fā)急性心肌梗死[16]。IL-10能抑制組織因子表達(dá)，通過抑制單核/巨噬細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞合成致炎因子，減少炎癥發(fā)生，減緩冠脈粥樣硬化進(jìn)程，穩(wěn)定斑塊[17]。因此檢測(cè)冠心病患者miR-29b及炎癥因子水平對(duì)后續(xù)病情的診斷與研究可提供有意義的參考。

本次研究顯示，隨著患者鈣化程度加重，miR-29b逐漸降低，CRP、IL-6、IL-10逐漸升高，且經(jīng)相關(guān)性分析證實(shí)miR-29b與CACS呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，CRP、IL-6、IL-10與CACS呈現(xiàn)正相關(guān)，提示miR-29b、CRP、IL-6、IL-10與冠脈鈣化程度及冠脈病變程度相關(guān)。miR-29b通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞參與冠心病病變，同時(shí)miR-29b低表達(dá)能促進(jìn)淋巴細(xì)胞聚集和膽固醇形成，調(diào)節(jié)局部的炎性微環(huán)境，能減少炎癥反應(yīng)發(fā)生[18]。有研究指出，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化并非都伴有鈣化，CRP和非鈣化的軟斑塊有關(guān)，CRP導(dǎo)致斑塊破裂與纖維帽內(nèi)的炎癥反應(yīng)相關(guān)，CRP引發(fā)心臟突發(fā)事件體現(xiàn)的是斑塊的組成成分和穩(wěn)定性，而非負(fù)荷量，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的鈣化是機(jī)體為了維持冠脈系統(tǒng)穩(wěn)定做出的反應(yīng)機(jī)制，認(rèn)為CRP與CACS無明顯相關(guān)性，但其對(duì)心血管事件的預(yù)測(cè)仍有重要價(jià)值[19]，這與本研究的結(jié)果存在一定差異，可在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。IL-6在炎癥反應(yīng)中具有核心調(diào)節(jié)作用，能誘發(fā)CRP合成，造成血黏度上升，促凝因子生成增加，導(dǎo)致冠脈粥樣硬化疾病進(jìn)展，而IL-10同時(shí)發(fā)揮抗炎作用，IL-10的升高也意味著炎癥反應(yīng)也在升高，這也間接反映了冠心病的病變程度[20]。

綜上所述，miR-29b及炎癥因子水平與CACS密切相關(guān)，對(duì)冠心病的鈣化程度及病情評(píng)估具有一定參考價(jià)值。