妊娠高血壓綜合征患者血清高分子量脂聯(lián)素水平對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)和繼發(fā)妊娠子癇的影響

廖文珺 王 潔 (.惠州市惠東縣人民醫(yī)院，廣東 惠州 56300；.惠州市惠東縣第二人民醫(yī)院，廣東 惠州 5635)

妊娠期高血壓是孕婦在妊娠期常患有的一種比較特殊的疾病，在我國(guó)近年來(lái)的調(diào)查研究表明，妊娠期高血壓發(fā)病率較其他妊娠期疾病高，其對(duì)孕婦的生理以及心理均會(huì)產(chǎn)生極大的影響，嚴(yán)重者則會(huì)危機(jī)患者其他器官組織和腺體，從而影響胎兒的正常發(fā)育[1-2]。脂聯(lián)素(ADP)作為一種由脂肪細(xì)胞特異性分泌的細(xì)胞因子，其在體內(nèi)以三聚體、六聚體和高分子質(zhì)量(HMW)多聚體等結(jié)構(gòu)形式存在，HMW-ADP是其主要活性形式[3]。臨床研究[4]發(fā)現(xiàn)，一些妊娠期高血壓患者體內(nèi)的ADP水平表現(xiàn)出了顯著的降低，但目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)原發(fā)性高血壓人群HMW-ADP的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。凋亡是滋養(yǎng)細(xì)胞在應(yīng)對(duì)應(yīng)激反應(yīng)時(shí)表現(xiàn)出的一種重要調(diào)節(jié)性死亡方式，該通路可由多種信號(hào)通路相互作用相互介導(dǎo)形成，其中p53作為最重要的一個(gè)調(diào)控因子，該因子的累積水平的升高常常伴隨著凋亡水平升高，從而誘發(fā)子癇等一系列與妊娠相關(guān)的疾病[5]。本研究選取妊娠期高血壓患者共計(jì)100例，從而研究妊高征患者血清HMW-ADP水平對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)和繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2016年11月～2018年11月期間我科的妊娠期高血壓患者共計(jì)100例，平均年齡為(24.35±6.98)歲。按照患者的患病程度將其分為輕度先兆子癇患者共計(jì)33例，患者平均年齡為(24.35±6.98)歲，懷孕時(shí)長(zhǎng)為(31.98±2.15)周；中度先兆子癇患者共計(jì)33例，患者平均年齡為(26.09±4.31)歲，懷孕時(shí)長(zhǎng)為(32.11±4.11)周；重度先兆子癇患者共計(jì)34例，患者平均年齡為(25.33±3.69)歲，懷孕時(shí)長(zhǎng)為(31.76±3.21)周。以32例健康孕婦作為對(duì)照組。兩組孕婦的年齡、體重以及身體其他指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均表現(xiàn)為妊娠期高血壓；均為單胎發(fā)育；高血壓孕婦未選擇其他方式進(jìn)行治療；患者均為自愿參與本次調(diào)查研究，患者本人以及家屬均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：孕前患有高血壓和腎臟相關(guān)等疾病；入選者臨床資料信息不完整；無(wú)法積極配合本次研究。本次研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2方法：清晨，取孕婦空腹?fàn)顟B(tài)下3 ml靜脈血于抗凝管中，在溫度為4℃的條件下按照2 500 r/min的速度離心處理10 min，取處理后的上清液貯存于溫度為-80℃的超低溫冰箱中備用；于清晨取所有孕婦尿液10 ml，根據(jù)試劑盒相關(guān)使用說(shuō)明測(cè)定相關(guān)指標(biāo)；當(dāng)各孕婦胎盤經(jīng)剖宮產(chǎn)娩出后，在無(wú)菌條件下剝離胎盤與母體分離面的膜狀組織，靠近臍帶插入點(diǎn)于分離面隨機(jī)切取面積約為5 cm2的胎盤組織，組織厚度不能超過(guò)0.5 cm，液氮罐中速凍備用。胎盤病理免疫組織化表達(dá)，見(jiàn)圖1。

1.3觀測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平比較分析:采用NII356-ATA型全自動(dòng)生化分析儀中測(cè)定各樣品中的血清HMW-ADP、瘦素(LEP)、血清胱抑素C(CysC)和血清肌酐(Scr)水平；同時(shí)詳細(xì)記錄各組孕產(chǎn)婦收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)水平，計(jì)算平均動(dòng)脈壓(MAP)。

圖1 胎盤病理免疫組織化表達(dá)(×200)

1.3.2各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較分析:取各組患者生產(chǎn)后的胎盤組織，組織分離后將組織浸于預(yù)冷的生理鹽水中清洗3次后，采用RNA抽提和RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞TSG mRNA和蛋白表達(dá)水平。

1.3.3各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力比較:取各組患者生產(chǎn)后的胎盤組織，組織分離后將組織浸于預(yù)冷的生理鹽水中清洗3次后，收集并重懸細(xì)胞，采用CCK-8法檢測(cè)各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖情況；通過(guò)24孔、孔徑8 μm的Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力體外經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。

1.3.4各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率和胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較:統(tǒng)計(jì)各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率以及各組孕產(chǎn)婦分娩后記錄各組胎兒胎齡、體重、體重指數(shù)(BMI)及胎盤質(zhì)量等指標(biāo)。

1.3.5相關(guān)性分析：以血清HMW-ADP為因變量多元逐步回歸分析及Spearman相關(guān)分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件(美國(guó)IBM公司)進(jìn)行單因素方差分析，t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用多元回歸分析Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平比較:各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平相互比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中對(duì)照組孕婦的HMW-ADP和LEP水平較輕度組、中度組和對(duì)照組高，而CysC和Scr則較低，并且隨著孕婦患病程度加重，HMWA-ADP和LEP水平越來(lái)越低，CysC和Scr水平越來(lái)越高；患病組孕婦的SBP、DBP和MAP均表現(xiàn)為異常，隨著孕婦患病程度加重，各壓力指標(biāo)也隨之增大。見(jiàn)表1。

表1 各組孕婦血清HMW-ADP及血壓等水平比較

2.2各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較：患病組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平相互比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，各組水平表現(xiàn)出了增加的趨勢(shì)，而對(duì)照組孕婦的p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中重度組孕婦的p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平在0 h到72 h分別由(0.87±0.31)和(0.81±0.46)增加到了(1.24±0.33)和(1.14±0.25)，而輕度組孕婦僅由(0.44±0.08)和(0.57±0.23)增加到了(0.90±0.21)和(0.91±0.34)。見(jiàn)表2，圖2，圖3。

2.3各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力比較：各組組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力相互比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，各組水平表現(xiàn)出了增加的趨勢(shì)，另外，患病組細(xì)胞的增殖和遷移能力均小于對(duì)照組。其中重度組孕婦的p53增殖和遷移能力在0 h到72 h分別由(1.06±0.34)和(0.98±0.39)增加到了(1.51±0.98)和(1.55±0.62)，而輕度組孕婦則由(1.56±0.84)和(2.09±1.07)增加到了(3.53±1.49)和(3.21±1.98)。見(jiàn)表3。

表2 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平比較

圖2 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53 mRNA表達(dá)條形圖

圖3 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53蛋白表達(dá)條形圖

表3 各組孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞p53增殖和遷移能力比較

2.4各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率和胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較：各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率相比均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中對(duì)照組繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率為0%，而輕度組、中度組和重度組的發(fā)生率則分別為12.12%、23.33%和35.29%，表明患有妊娠高血壓綜合征的孕婦出現(xiàn)繼發(fā)妊娠子癇的概率較健康孕婦高；各組胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)胎齡、體重、BMI以及胎盤質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

2.5以血清HMW-ADP為因變量的多元逐步回歸結(jié)果分析：以血清HMW-ADP為因變量，LEP、CysC、Scr、SBP、DBP和MAP作為自變量，結(jié)果表明，血清HMW-ADP為因變量與LEP(OR=-0.002，95%CI：0.021～-0.004，P=0.001)、CysC(OR=-0.325，95%CI：-0.543～-0.091，P=0.004)、Scr(OR=-0.934，95%CI：0.345～1.823，P=0.012)、SBP(OR=0.321，95%CI：0.119～1.723，P=0.009)、DBP(OR=0.092，95%CI：0.076～1.931，P=0.002)和MAP(OR=0.173，95%CI：0.123～0.934，P=0.018)各指標(biāo)之間存在密切的相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表4 各組孕婦繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率和胎兒發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較

表5 以血清HMW-ADP為因變量的多元逐步回歸結(jié)果

2.6血清HMW-ADP水平、滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)、繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生與先兆子癇嚴(yán)重程度相關(guān)性分析：血清HMW-ADP水平與滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)和繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生之間存在顯著的相關(guān)性，輕度組、中度組和重度組與HMWA、p53 mRNA和p53蛋白水平以及繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率之間均存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。見(jiàn)表6。

表6 血清HMW-ADP水平與滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)、繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生與先兆子癇嚴(yán)重程度相關(guān)性分析(r值)

3 討論

妊娠期高血壓患者若不能得到及時(shí)診斷和有效治療則存在迅速惡化的可能性，引發(fā)一系列不良妊娠結(jié)果，如胎盤早剝以及出血性休克等嚴(yán)重的并發(fā)癥，同時(shí)還會(huì)導(dǎo)致胎兒發(fā)育不良[6-8]。因此，準(zhǔn)確判斷妊娠期高血壓患者病情的發(fā)生和發(fā)展就尤為重要。脂聯(lián)素是脂肪組織特異性分泌的一種膠原樣細(xì)胞因子，HMW-ADP在體內(nèi)主要參與糖脂代謝的調(diào)節(jié)以及免疫等重要的過(guò)程。妊娠期高血壓的發(fā)生不但與肥胖、胰島素抵抗和糖尿病等疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切的相關(guān)性，同時(shí)還會(huì)調(diào)控妊娠期孕婦體內(nèi)糖代謝過(guò)程[9-10]。妊娠期高血壓患者胰島素抵抗較健康孕婦顯著增強(qiáng)，而HMW-ADP又能增強(qiáng)體內(nèi)胰島素的敏感性，因而HMW-ADP水平變化與妊娠期高血壓之間存在密切的聯(lián)系[11]。凋亡的發(fā)生是滋養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)對(duì)應(yīng)激的一種重要調(diào)節(jié)性死亡方式，結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，妊娠期高血壓會(huì)引發(fā)體內(nèi)p53大量累積，滋養(yǎng)細(xì)胞p53穩(wěn)態(tài)化就會(huì)失衡[12]。本研究結(jié)果顯示，妊娠期高血壓患者血清HMW-ADP水平會(huì)隨著孕婦患病程度加重而降低，且p53 mRNA和蛋白表達(dá)水平失衡，繼發(fā)妊娠子癇發(fā)生率越來(lái)越高，這樣就表明低HMW-ADP水平可能參與了繼發(fā)妊娠子癇的發(fā)生發(fā)展。

子癇的發(fā)病機(jī)制是較為復(fù)雜的，而其中一個(gè)最重要的發(fā)病機(jī)制就算胎盤缺血或者缺氧導(dǎo)致的，這一過(guò)程的發(fā)生會(huì)進(jìn)一步引發(fā)胰島素抵抗、氧化應(yīng)激和免疫失衡，從而導(dǎo)致母體高血壓的發(fā)生[13-15]。血清HMW-ADP與子癇的發(fā)病密切相關(guān)，在子癇前期的發(fā)病過(guò)程中起到了一定的作用。在整個(gè)妊娠過(guò)程中，任何一個(gè)階段任何一個(gè)因素發(fā)生失調(diào)都可能導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞p53功能出現(xiàn)異常而引發(fā)妊娠期間的相關(guān)疾病[16-18]。若胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞p53侵襲不足就會(huì)引發(fā)孕婦自然流產(chǎn)、子癇前期以及胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限等病理疾病，而滋養(yǎng)細(xì)胞p53侵襲過(guò)度則會(huì)導(dǎo)致葡萄胎、絨癌以及胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等[19-20]，因此，深入探索影響滋養(yǎng)細(xì)胞p53的生物學(xué)功能，也就有利于進(jìn)一步揭示子癇前期的發(fā)病機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示HMW-ADP的變化參與了繼發(fā)妊娠子癇的發(fā)生發(fā)展以及滋養(yǎng)細(xì)胞p53的平衡性，本研究結(jié)果在促進(jìn)妊娠期高血壓患者快速恢復(fù)的同時(shí)，也為該疾病的后續(xù)深入治療研究奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。