中藥調(diào)控阿爾茨海默病tau蛋白過度磷酸化的研究進(jìn)展

周 君，李明成，米彩云，王虎平

甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730000

目前全球人口格局呈現(xiàn)老齡化發(fā)展態(tài)勢(shì)，阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的患病率逐年攀升，30年后全球老年癡呆患者總量將高達(dá)1.38億，其中絕大多數(shù)為AD患者[1]。受當(dāng)前新型冠狀病毒疫情的影響，AD患者的護(hù)工數(shù)量銳減[2]，加劇了龐大的AD患者群體對(duì)個(gè)人，家庭，乃至整個(gè)社會(huì)的壓力。AD的起病及病程演變尚不可控，進(jìn)行性情感和認(rèn)知障礙及記憶力衰退是其顯著的臨床表現(xiàn)。tau蛋白過度磷酸化是導(dǎo)致神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NTFs)的主要因素，而NFTs正是AD的主要病理特征[3]。tau蛋白是一種微管相關(guān)蛋白，tau蛋白與微管結(jié)合后可保障微管結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定[4]，從而維持微管的生理功能。位于tau蛋白上的蘇氨酸(Thr)、絲氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)稱為可磷酸化位點(diǎn)，在激酶的作用下發(fā)生磷酸化[5]，形成磷酸化tau蛋白；磷酸化tau蛋白與已結(jié)合的微管發(fā)生解離，導(dǎo)致微管穩(wěn)定性降低進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞骨架坍塌，解離下來的磷酸化tau蛋白形成雙螺旋結(jié)構(gòu)后形成NFTs；磷酸酶可去除磷酸化tau蛋白上的磷酸基團(tuán)，恢復(fù)tau蛋白的生理功能(見圖1)。總而言之，tau蛋白磷酸化水平有賴于激酶與磷酸酶的共同調(diào)控[6]。

圖1 tau蛋白受激酶和磷酸酶的調(diào)控示意圖

AD在中醫(yī)中類屬“癡呆”的范疇，中醫(yī)有辨證論治、整體觀念、病證結(jié)合等特點(diǎn)，運(yùn)用中藥在防治AD方面具有獨(dú)到優(yōu)勢(shì)。據(jù)現(xiàn)有臨床和動(dòng)物研究表明，中藥防治AD有多途徑抑制tau蛋白過度磷酸化的優(yōu)勢(shì)(如表1、2所示)，如中藥通過調(diào)控激酶、磷酸酶的活性，達(dá)到降低tau蛋白磷酸化水平，繼而減緩NFTs形成的目的。由此，本文從中藥調(diào)控激酶和磷酸酶的角度，探究中藥干預(yù)tau蛋白過度磷酸化，防治AD的相關(guān)機(jī)制。

1 中藥對(duì)tau蛋白激酶的調(diào)控

1.1 單味中藥對(duì)tau蛋白激酶的調(diào)控

吳茱萸提取物——吳茱萸次堿干預(yù)高糖誘導(dǎo)的AD大鼠后緩解了大鼠的認(rèn)知障礙，降低GSK-3β的活性，進(jìn)而降低tau蛋白磷酸化水平[10]。淫羊藿提取物——淫羊藿苷灌胃干預(yù)用β-淀粉樣蛋白(amyloidβ-protein，Aβ)誘導(dǎo)的AD小鼠后，其認(rèn)知障礙得到有效改善，海馬區(qū)tau蛋白磷酸化現(xiàn)象得到緩解，同時(shí)激素膜受體和c-Jun水平也受到調(diào)控[11]；用淫羊藿苷預(yù)處理后誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為其可通過調(diào)控磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)/GSK-3β信號(hào)通路，降低tau蛋白磷酸化水平[12]，淫羊藿苷有一定抗AD的功效。五味子提取物——北五味子酸性多糖(acidic polysaccharose of schisandrae chinensis，SCP-A)灌胃干預(yù)Aβ25-35誘導(dǎo)的AD小鼠后，測(cè)得GSK-3β活性減弱，削弱其對(duì)tau蛋白的磷酸化力度，此外小鼠的認(rèn)知功能也得到改善[13]。采取腹腔注射D-半乳糖聯(lián)合雙側(cè)海馬注射Aβ25-35的方式建立AD模型大鼠后，用不同劑量的黃連素(黃連提取物)對(duì)其灌胃，發(fā)現(xiàn)黃連素劑量在150 mg/kg時(shí)對(duì)AD大鼠的GSK-3β和磷酸化tau蛋白表達(dá)的下調(diào)作用最強(qiáng)[14]，另一項(xiàng)對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行黃連素灌胃的研究表明，黃連素可抑制核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor kappa-B，NF-κB)信號(hào)通路，緩解tau蛋白過度磷酸化，減輕小鼠的認(rèn)知障礙，抑制神經(jīng)炎癥[15]。Yang等[16]用人參皂苷Rb1溶液培養(yǎng)Aβ1-42誘導(dǎo)的AD模型小鼠腦片，結(jié)果顯示人參皂苷Rb1能夠下調(diào)因造模引起的tau蛋白過度磷酸化水平，并通過抑制激酶ERK1/2的活性來減少NFTs的形成。Xiong等[17]認(rèn)為荔枝核的有效成分可通過調(diào)控胰島素受體基因-1(insulin receptor substrate-1，IRS-1)/PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路來降低GSK-3β的活性，進(jìn)而抑制tau蛋白過度磷酸化。芹菜籽提取物——丁苯酞干預(yù)由Aβ1-42誘導(dǎo)的AD模型大鼠后，丁苯酞組大鼠形態(tài)學(xué)表現(xiàn)介于正常組與AD模型組之間，且丁苯酞中、高劑量組的表現(xiàn)優(yōu)于低劑量組[18]；海馬CA1區(qū)GSK-3β活性與磷酸化tau蛋白水平降低[19]；還能改善腦內(nèi)炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善認(rèn)知功能[20]。葛根提取物——葛根素干預(yù)通過腹腔注射D-半乳糖建立的AD模型大鼠，可削弱因造模引起的GSK-3β強(qiáng)活性與嗅球內(nèi)tau蛋白的磷酸化[21]。獨(dú)活提取物——蛇床子素灌胃APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠6周后，改善了小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，海馬CA3區(qū)錐體細(xì)胞和尼氏體數(shù)量增多，細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)較佳，p-GSK-3β/GSK-3β的表達(dá)增高，tau蛋白Ser202位點(diǎn)的磷酸化效應(yīng)受到削弱，但實(shí)驗(yàn)中未指出p-GSK-3β的檢測(cè)位點(diǎn)[22]。Chen等[23]用激活GSK-3β的方式建立AD模型大鼠，建模后用頭頂一顆珠(trillium tschonoskii maxim，TTM)水煎液對(duì)AD大鼠進(jìn)行灌胃干預(yù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力得到改善，TTM中、高劑量能改善海馬CA1和CA3區(qū)尼氏體的數(shù)量與形態(tài)，高、中、低劑量均能降低海馬內(nèi)GSK-3β活性并提高GSK-3β在Ser9位點(diǎn)的磷酸化，還能上調(diào)蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)和Akt活性，抑制tau蛋白磷酸化，改善AD癥狀。知母提取物——知母皂苷干預(yù)Aβ1-42誘導(dǎo)的AD大鼠后，大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶障礙得到改善，膽堿乙酰基轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase，ChAT)蛋白表達(dá)增加，磷酸化Akt增多，促進(jìn)GSK-3β在Ser9位點(diǎn)磷酸化，達(dá)到抑制GSK-3β活性的目的，進(jìn)而降低因造模引起的海馬區(qū)tau蛋白過度磷酸化，但同時(shí)發(fā)現(xiàn)GSK-3β的表達(dá)增多[24]。丹參酮IIA是中藥材丹參的脂溶性有效成分，Lin等[8]在注射Aβ1-42建立AD模型大鼠時(shí)，發(fā)現(xiàn)Aβ1-42具有促進(jìn)GSK-3β在Tyr216位點(diǎn)磷酸化，并抑制GSK-3β在Ser9位點(diǎn)磷酸化的作用；建模后用丹參酮IIA對(duì)AD大鼠進(jìn)行灌胃干預(yù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參酮IIA可逆轉(zhuǎn)由造模引起的學(xué)習(xí)記憶障礙，可改善腦內(nèi)細(xì)胞形態(tài)，且海馬區(qū)tau蛋白磷酸化程度與丹參酮IIA劑量具有相關(guān)性，此外GSK-3β在Ser9位點(diǎn)磷酸化水平升高，Tyr216位點(diǎn)磷酸化水平降低，伴磷酸化ERK增多，tau蛋白的磷酸化水平降低。

1.2 復(fù)方對(duì)tau蛋白激酶的調(diào)控

黃連解毒湯(黃連、黃芩、黃柏、梔子)灌胃干預(yù)由Aβ25-35誘導(dǎo)的AD模型大鼠，發(fā)現(xiàn)其可改善AD大鼠的學(xué)習(xí)能力[25]，抑制GSK-3β和CDK-5的活性，還可對(duì)tau蛋白多個(gè)位點(diǎn)的磷酸化進(jìn)行干預(yù)[26]，進(jìn)而起到防治AD的作用。雙側(cè)海馬注射Aβ25-35建立AD模型大鼠后，用不同劑量的烏芩健腦方藥液(制首烏、郁金、黃芪、川芎等)對(duì)其實(shí)施干預(yù)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該藥液可改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，能通過弱化CDK5與GSK-3β活性從而減輕tau蛋白過度磷酸化程度[27]。復(fù)智散干預(yù)Wistar大鼠皮層神經(jīng)元，采取Aβ25-35養(yǎng)的方式建立AD模型，發(fā)現(xiàn)復(fù)智散可弱化CDK5活性，同時(shí)可在多個(gè)位點(diǎn)抑制tau蛋白的磷酸化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示調(diào)控calpain-p25/CDK5通路進(jìn)而抑制tau蛋白過度磷酸化或許是復(fù)智散抑制tau蛋白過度磷酸化的主要途徑[28]。Guo等[29]對(duì)兩種AD模型小鼠(東莨菪堿腹腔注射小鼠和認(rèn)知障礙與年齡相關(guān)的SAMP8小鼠)展開好忘方(續(xù)斷、肉蓯蓉、茯苓、遠(yuǎn)志、菖蒲)與鹽酸多奈哌齊的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，好忘方可改善AD小鼠的認(rèn)知障礙，減少記憶丟失，并對(duì)PKA/GSK-3β/tau信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控，抑制tau蛋白的磷酸化，緩解腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)的下降趨勢(shì)，增強(qiáng)突觸的可塑性。益智聰明湯(人參、肉蓯蓉、赤芍、知母、菖蒲等)干預(yù)由Aβ25-35誘導(dǎo)的AD模型小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙得到改善，海馬區(qū)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)較佳，益智聰明湯中、高劑量組抑制tau蛋白的Ser404和Thr231位點(diǎn)磷酸化效果最明顯，高劑量組還對(duì)tau蛋白的Thr181和Ser396位點(diǎn)的磷酸化有抑制作用，同時(shí)強(qiáng)化PI3K在p85位點(diǎn)、Akt在Ser473位點(diǎn)與GSK-3β在Ser9位點(diǎn)磷酸化的表達(dá)[30-32]。表明益智聰明湯可通過激活PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路對(duì)tau蛋白的磷酸化進(jìn)行調(diào)控，繼而防治AD。

2 中藥對(duì)tau蛋白磷酸酶的調(diào)控

磷酸酶活性降低時(shí)，脫磷酸效應(yīng)隨之降低，這將無法扭轉(zhuǎn)磷酸化tau蛋白逐步增多的局面，最終導(dǎo)致tau蛋白過度磷酸化。中藥可通過調(diào)控磷酸酶的活性達(dá)到防治AD的目的，在眾多的磷酸酶中，蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)的脫磷酸效應(yīng)強(qiáng)度占總脫磷酸效應(yīng)的大多數(shù)[33]，因此PP2A常作為檢測(cè)磷酸酶效應(yīng)的指標(biāo)。

2.1 單味中藥對(duì)tau蛋白磷酸酶的調(diào)控

板橋黨參干預(yù)岡田酸誘導(dǎo)的AD模型大鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示板橋黨參可提升PP2A活性，降低tau蛋白磷酸化水平，修復(fù)神經(jīng)元損傷[34]。TTM水煎液干預(yù)岡田酸誘導(dǎo)的AD大鼠后，AD大鼠的空間學(xué)習(xí)能力得到改善，且海馬內(nèi)PP2A活性上升，tau蛋白磷酸化水平降低，其中TTM高劑量組的尼氏體含量顯著增加[35]。人參提取物——人參皂苷Rb1干預(yù)岡田酸誘導(dǎo)的AD模型大鼠，檢測(cè)海馬后發(fā)現(xiàn)PP2A活性明顯提高，且tau蛋白磷酸化水平下降，神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)得到改善[36]。山茱萸提取物——山茱萸環(huán)烯醚萜苷(cornel iridoid glycoside，CIG)干預(yù)tau蛋白過表達(dá)的rTg4510轉(zhuǎn)基因AD小鼠，3個(gè)月后發(fā)現(xiàn)小鼠的認(rèn)知及記憶力得到改善，對(duì)小鼠大腦進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)CIG增強(qiáng)了PP2A活性，降低tau蛋白過度磷酸化程度和聚集程度[37]。

2.2 復(fù)方對(duì)tau蛋白磷酸酶的調(diào)控

扶正祛邪方(人參、川芎、黃連)灌胃處理SAMP8小鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方可維持海馬CA1區(qū)內(nèi)神經(jīng)元總量變化，提高PP2A活性，抑制tau蛋白過度磷酸化，改善學(xué)習(xí)記憶能力[38]。柴胡疏肝散(柴胡、枳殼、香附、川芎、白芍、陳皮、甘草)干預(yù)通過腹腔注射D-半乳糖聯(lián)合雙側(cè)海馬注射Aβ1-42建立的AD模型大鼠，發(fā)現(xiàn)柴胡疏肝散可增加PP2A的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)由造模引起的tau蛋白過度磷酸化狀態(tài)，改善AD大鼠的認(rèn)知和學(xué)習(xí)障礙[39]。

3 中藥對(duì)tau蛋白激酶和磷酸酶的共同調(diào)控

tau蛋白過度磷酸化導(dǎo)致的NFTs是AD的主要病理特征之一[3]，用于描述AD患者腦內(nèi)神經(jīng)元受損程度。激酶和磷酸酶的活性變化在tau蛋白過度磷酸化的進(jìn)程中起關(guān)鍵性作用，當(dāng)激酶對(duì)tau蛋白的磷酸化效應(yīng)與磷酸酶對(duì)磷酸化tau蛋白的脫磷酸效應(yīng)的平衡被打破，在磷酸化效應(yīng)明顯強(qiáng)于脫磷酸化效應(yīng)時(shí)呈現(xiàn)出tau蛋白過度磷酸化的態(tài)勢(shì)。目前研究表明，中藥防治AD的優(yōu)勢(shì)在于可通過多條途徑干預(yù)tau蛋白的磷酸化進(jìn)程。

3.1 單味中藥對(duì)tau蛋白激酶和磷酸酶的共同調(diào)控

目前研究認(rèn)為鋅是導(dǎo)致AD的誘因之一，鋅可活化p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase，p38 MAPK)和GSK-3β[40]，間接提高tau蛋白磷酸化水平。一項(xiàng)研究用鋅誘導(dǎo)tau蛋白特定位點(diǎn)(Ser262)磷酸化后加以銀杏提取物(Ginkgobilobaextract 761，EGB761)進(jìn)行處理，結(jié)果顯示EGB761能夠防止p38MAPK和GSK-3β被鋅誘導(dǎo)活化，表明GBE761具有在Ser262特定位點(diǎn)抑制tau蛋白磷酸化的能力[41]。Zeng等[42]采用高同型半胱氨酸血癥模擬AD模型大鼠后使用EGB761，發(fā)現(xiàn)EGB761能夠糾正PP2A與GSK-3β的活性，還原磷酸化tau蛋白特定位點(diǎn)的未磷酸化狀態(tài)。由此可知銀杏葉有調(diào)控激酶與磷酸酶的能力，可抑制tau蛋白的磷酸化。CIG干預(yù)rTg4510轉(zhuǎn)基因小鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CIG可減少病理性tau蛋白的異常沉積，還可通過上調(diào)內(nèi)源性PP2A激活劑(phosphatase 2A phosphatase activator，PTPA)的表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)PP2A的活性，改善tau蛋白過度磷酸化現(xiàn)象[43]。山茱萸提取物——山茱萸多糖干預(yù)采取腹腔注射D-半乳糖聯(lián)合雙側(cè)海馬注射Aβ1-40建立AD模型大鼠后，GSK-3β表達(dá)受到抑制，即山茱萸多糖通過弱化激酶的磷酸化效應(yīng)來緩解tau蛋白過度磷酸化狀態(tài)[44]。黃芪提取物——黃芪多糖灌胃干預(yù)Aβ25-35誘導(dǎo)的AD大鼠后，大鼠定位與學(xué)習(xí)能力有所改善，且PP2A水平上升，Aβ、磷酸化tau蛋白、GSK-3β和β-分泌酶(β-site amyloid precursor protein-cleaving enzyme，BACE1)水平降低[45]。另一項(xiàng)研究表明黃芪多糖能將tau蛋白磷酸化水平和GSK-3β活性降低，且黃芪多糖能激活Wnt通路從而抑制Aβ引起的神經(jīng)毒性[46]。何首烏提取物——二苯乙烯苷灌胃干預(yù)APP/PS1/tau三轉(zhuǎn)基因小鼠后小鼠學(xué)習(xí)記憶能力得到改善，GSK-3β和JNK活性降低，PP2A蛋白與蛋白磷酸酶2B(protein phosphatase 2B，PP2B)mRNA的轉(zhuǎn)錄及其蛋白表達(dá)升高，腦組織中磷酸化tau蛋白在Ser404和Thr205位點(diǎn)的表達(dá)下降、聚集度降低、分布范圍縮小，認(rèn)為二苯乙烯苷可通過削弱GSK-3β和JNK對(duì)tau蛋白的磷酸化效應(yīng)，增強(qiáng)PP2B的脫磷酸效應(yīng)來緩解tau蛋白磷酸化的效應(yīng)[47-49]。單味中藥及其提取物對(duì)AD中tau蛋白過度磷酸化的調(diào)控見表1。

表1 單味中藥及其提取物對(duì)AD中tau蛋白過度磷酸化的調(diào)控

3.2 復(fù)方對(duì)tau蛋白激酶和磷酸酶的共同調(diào)控

復(fù)方金思維干預(yù)雙側(cè)腦室注射微量鏈脲佐菌素建立的AD模型大鼠后，進(jìn)行免疫組化染色觀察GSK-3β、蛋白磷酸酶1(protein phosphatase1，PP1)、PP2A，結(jié)果顯示金思維能調(diào)控GSK-3β、PP1、PP2A活性，使之保持在正常范圍，進(jìn)而使tau蛋白磷酸化維持在正常水平[50]。不同劑量的遠(yuǎn)志散(遠(yuǎn)志、枳殼、旋覆花、半夏等)灌胃Aβ1-40誘導(dǎo)的AD模型大鼠，實(shí)驗(yàn)表明遠(yuǎn)志散可通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt/GSK-3β信號(hào)通路抑制AD大鼠海馬CA1區(qū)tau蛋白磷酸化表達(dá)[51]；Li等[52]利用遠(yuǎn)志散干預(yù)Aβ1-40誘導(dǎo)的AD模型大鼠后，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)PP2A活性增強(qiáng)，GSK-3β活性減弱，在激酶與磷酸酶效應(yīng)力的綜合作用下，tau蛋白過度磷酸化程度降低。滌痰湯對(duì)岡田酸誘導(dǎo)的AD大鼠進(jìn)行灌胃，實(shí)驗(yàn)表明其能降低tau蛋白Ser214、Ser262位點(diǎn)的過度磷酸化，這可能與上調(diào)PP2A活性，增強(qiáng)對(duì)磷酸化tau蛋白的脫磷酸效應(yīng)有關(guān)[53]。證明滌痰湯可有效緩解AD大鼠臨床癥狀后，對(duì)滌痰湯及其拆方繼續(xù)展開研究，研究表明滌痰湯拆方和全方能夠通過上調(diào)PP2A、下調(diào)GSK-3β活性，進(jìn)而降低tau蛋白磷酸化水平，并緩解AD大鼠的空間學(xué)習(xí)障礙[54]。黃精丸灌胃干預(yù)采用D-半乳糖聯(lián)合岡田酸誘導(dǎo)的AD模型小鼠后，小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙得到改善，這可能與激活Wnt/catenin信號(hào)通路有關(guān)[55]；海馬CA1和CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量、PP2A蛋白及mRNA表達(dá)增強(qiáng)，且CA1區(qū)GSK-3β在Ser9位點(diǎn)磷酸化增強(qiáng)，削弱其對(duì)tau蛋白的磷酸化效應(yīng)[56]。酸棗仁湯(酸棗仁、茯苓、川芎、知母、炙甘草)灌胃干預(yù)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠，發(fā)現(xiàn)酸棗仁湯可有效改善小鼠學(xué)習(xí)記憶力，海馬CA3區(qū)神經(jīng)與尼氏體數(shù)量較多，細(xì)胞排列密集，神經(jīng)元樹突棘密度與分支數(shù)量均優(yōu)于模型組，GSK-3β表達(dá)減弱，GSK-3β的Ser9位點(diǎn)磷酸化后GSK-3β失活，tau蛋白磷酸化程度降低[57]。表明酸棗仁湯可從直接削弱GSK-3β表達(dá)與對(duì)其Ser9位點(diǎn)磷酸化這兩種直接與間接的方式削弱其對(duì)tau蛋白的磷酸化效應(yīng)，達(dá)到防治AD的目的。溫脾通絡(luò)開竅湯(黃芪、益智仁、何首烏、三七、絞股藍(lán)、石菖蒲)干預(yù)右側(cè)海馬注射岡田酸的AD模型大鼠三周，海馬檢測(cè)顯示溫脾通絡(luò)開竅湯中、高劑量組GSK-3β活性降低，PP2A活性增高，且與中藥劑量組之間存在量效關(guān)系[58]；溫脾通絡(luò)開竅湯中、高劑量組海馬tau蛋白磷酸化水平降低，大鼠認(rèn)知障礙得到緩解[59]，即溫脾通絡(luò)開竅湯從GSK-3β和PP2A兩個(gè)角度降低tau蛋白過度磷酸化。復(fù)方對(duì)AD的tau蛋白過度磷酸化的調(diào)控見表2。

表2 復(fù)方對(duì)AD的tau蛋白過度磷酸化的調(diào)控

4 總結(jié)及展望

盡管目前尚未找到成熟的方式來干預(yù)AD的發(fā)病及病情進(jìn)展，大量中藥的臨床、動(dòng)物及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)已證實(shí)中藥在干預(yù)阿爾茨海默病tau蛋白過度磷酸化方面有一定效果[60]。中醫(yī)認(rèn)為AD病位在腦，與心、肝、脾、腎四臟關(guān)系密切[61]，在心的統(tǒng)領(lǐng)下，脾運(yùn)化轉(zhuǎn)運(yùn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，肝調(diào)暢機(jī)體，腎藏納精微，諸臟配合以保障神機(jī)正常發(fā)揮。已證實(shí)一系列具有補(bǔ)肝腎、益氣活血、補(bǔ)髓益智、清熱解毒等功效的方藥對(duì)激酶的調(diào)控作用較佳，通過弱化GSK-3β、CDK5、JNK、ERK等激酶活性和調(diào)控相應(yīng)信號(hào)通路，抑制tau蛋白相應(yīng)位點(diǎn)的磷酸化，進(jìn)而減緩tau蛋白向磷酸化tau蛋白的轉(zhuǎn)化。盡管現(xiàn)在尚不能詳盡地檢測(cè)出磷酸化tau蛋白的磷酸化位點(diǎn)，但已能體現(xiàn)出不同的激酶對(duì)tau蛋白磷酸化影響的差異。此外，《血證論》有云：“凡心有瘀血，亦令健忘”認(rèn)為瘀血是AD的主要致病因素之一，實(shí)驗(yàn)證明具有補(bǔ)氣活血、溫陽(yáng)化瘀功效的方藥對(duì)AD療效較佳，尤其在調(diào)控tau蛋白過度磷酸化方面具有一定作用；可直接調(diào)控磷酸酶活性，加強(qiáng)對(duì)磷酸化tau蛋白的脫磷酸化效應(yīng)，達(dá)到減少產(chǎn)生NFTs，防治AD的目的。更有《石室秘錄》有云：“痰氣最盛，呆氣最深”，清代陳士鐸認(rèn)為“呆”與“痰”有密切關(guān)聯(lián)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)補(bǔ)益肝腎、益氣升陽(yáng)、活血化瘀、化痰開竅等功效的方藥對(duì)激酶和磷酸酶有共同調(diào)節(jié)作用，由于激酶中GSK-3β的磷酸化效應(yīng)最強(qiáng)[62]，磷酸酶中PP2A的脫磷酸化效應(yīng)最強(qiáng)，因此大多數(shù)研究以GSK-3β和PP2A為主要檢測(cè)目標(biāo)，來揭示中藥多途徑調(diào)控tau蛋白磷酸化的機(jī)制。

中藥可通過影響激酶、磷酸酶或同時(shí)影響二者等途徑調(diào)控tau蛋白的磷酸化水平，達(dá)到防治AD的目的。就目前對(duì)中藥已開展的研究而言，筆者認(rèn)為在以下幾方面還有待突破：(1)中藥治療具有辨證論治的特點(diǎn)，在大量實(shí)驗(yàn)中可體現(xiàn)出辨病的過程，但未能充分展現(xiàn)出辨證的特點(diǎn)，可在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中增加對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行辨證的內(nèi)容；(2)中藥、復(fù)方干預(yù)AD療效確切，但由于成分復(fù)雜，目前作用機(jī)制尚未闡明，其推廣可信度較低，可將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究技術(shù)與中藥防治AD進(jìn)一步結(jié)合，一方面純化并分析中藥起作用的有效成分，另一方面探究中藥藥對(duì)調(diào)控激酶與磷酸酶的藥對(duì)配伍規(guī)律，嘗試從分子水平闡釋藥對(duì)配伍的意義；(3)多類激酶、磷酸酶呈現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)狀交互調(diào)節(jié)tau蛋白的磷酸化水平，但是目前在同一實(shí)驗(yàn)中，由于對(duì)激酶和磷酸酶種類與磷酸化tau蛋白的磷酸化位點(diǎn)檢測(cè)不全，不足以構(gòu)建出中藥影響激酶與磷酸酶的全貌，可通過增加檢測(cè)激酶和磷酸酶的種類，以及磷酸化tau蛋白的磷酸化位點(diǎn)，找到更充足的證據(jù)展現(xiàn)中藥影響激酶與磷酸酶的網(wǎng)絡(luò)狀調(diào)節(jié)系統(tǒng)；(4)部分研究?jī)H對(duì)tau蛋白與磷酸化tau蛋白進(jìn)行定量分析，遺漏對(duì)中間環(huán)節(jié)(激酶、磷酸酶或其他指標(biāo))的檢測(cè)，造成證據(jù)鏈缺失，只能展示結(jié)果，不能詳細(xì)闡明原因。在后續(xù)研究中可適當(dāng)添加中間證據(jù)的檢測(cè)，構(gòu)成完整的證據(jù)鏈；(5)大量臨床、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)展現(xiàn)出中藥療效較佳，但是中藥的毒副作用尚不明確，可增加相關(guān)中藥的毒理實(shí)驗(yàn)，為中藥的臨床提供更安全的指導(dǎo)。