免疫組化染色在診斷膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別中的應(yīng)用價值

李立，許曉林，李紅全，蔡曉燕

廣東省臺山市人民醫(yī)院病理科，廣東臺山 529200

惡性腫瘤是臨床常見疾病，其形成多為不同致癌因素之間相互作用導致。患者機體組織細胞無法正常生長，失去調(diào)控的細胞促使機體在短時間內(nèi)出現(xiàn)異常，并分化新生物。若是產(chǎn)生新生物，腫瘤由于機體致病因素而抑制生長，反而無法用機體正常生理功能進行調(diào)節(jié)，破壞機體組織與相關(guān)器官[1]。膀胱尿路上皮腫瘤是臨床惡性腫瘤的一種，生長迅速、浸潤性生長，患者會有出血、潰瘍、氣管壞死等癥狀。該疾病可能會遠處轉(zhuǎn)移，致患者食欲不振或貧血，逐漸損傷患者身體內(nèi)部重要組織及器官。針對該疾病診斷及類型鑒別可用免疫組織化學染色法，其對疾病治療也有一定意義[2]。該研究對該院2018年10月—2020年11月收治的90例膀胱尿路上皮腫瘤患者實施免疫組化染色，分析其在診斷膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的90例膀胱尿路上皮腫瘤患者為研究對象，依據(jù)腫瘤類型將其分為A1 組、A2 組、A3 組，每組30例。A1 組為低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤患者，A2 組為非浸潤性尿路上皮癌患者，A3 組為浸潤性尿路上皮癌患者。A1 組：男、女各20例、10例；年齡21～59歲，平均（34.62±5.45）歲。A2 組：男、女各19例、11例；年齡20～60歲，平均（34.02±5.69）歲。A3 組：男、女各18例、12例；年齡20～61歲，平均（34.97±5.06）歲。3 組一般資料對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。該研究獲得醫(yī)學倫理委員會批準及認可。納入標準：簽訂同意書，愿意參與該研究者。排除標準：精神異常者。

1.2 方法

該次研究用到的試劑是鼠抗人單克隆抗體CK7、CK20、P53、P63、Ki67，還需用到EliVisionTM plus 試劑盒(上海生物科技有限公司)等。免疫組染色具體實施方法：先切片、脫蠟后PBS 液沖洗、修復(fù)及PBS液沖洗，添加含有3%氧化氫溶液、第一抗體，并用到BS 液進行沖洗，還需添加聚合物增強劑，重復(fù)用PBS液沖洗，并滴加酶標抗鼠聚合物、DAB顯色液沖洗及復(fù)染，用含量為0.1%的鹽酸分化，沖洗，并用PBS 液沖洗返籃，酒精脫水，用二甲苯透明封片，之后進行顯微鏡觀察，并攝片。

1.3 觀察指標

記錄診斷結(jié)果。陽性判定主要是CK7、CK20 以細胞有黃色顆粒為基準，而P53、P63 陽性細胞數(shù)＞6%為陽性，Ki67細胞核內(nèi)出現(xiàn)褐色顆粒也是陽性。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

3 組CK7、P63 表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；3 組CK20、P53、Ki67 表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 3組診斷結(jié)果比較[n(%)]

3 討論

膀胱癌一般是指人體膀胱黏膜上有惡性腫瘤，膀胱尿路上皮腫瘤是臨床常見的十大癌癥之一，該病會對患者造成生命威脅，因此醫(yī)生需對該病實施有效診斷與治療[3-4]。治療需明確患者出現(xiàn)膀胱尿路上皮腫瘤病因，危險因素有吸煙、長期接觸致癌物質(zhì)等，并結(jié)合臨床癥狀治療，如膀胱尿路上皮腫瘤患上后會出現(xiàn)尿路刺激、排尿困難等癥狀，通過病因及臨床癥狀等可為疾病治療提供參考。而治療除結(jié)合患者表現(xiàn)、病因，還需了解患者疾病真實情況，這需要通過診斷及檢測等實現(xiàn)。免疫組化染色技術(shù)是現(xiàn)如今臨床病理診斷不可或缺的組成部分，特別是惡性腫瘤的病理診斷。免疫組化染色技術(shù)是一個相對簡單的技術(shù)，對于實驗室硬件要求不高，具有技術(shù)人員上手快，成本相對較低，獲取結(jié)果速度快，判讀相對簡單直觀等特點。因為病理醫(yī)生對免疫組化染色結(jié)果的依賴，免疫組化染色質(zhì)量愈發(fā)成為一個關(guān)注熱點。免疫組化染色是臨床該病診斷及類型鑒別的常見手段[3]。免疫組化染色手法是指在抗體上結(jié)合熒光或有顏色化學物質(zhì)，以免疫學中抗體及抗體間專一性結(jié)合反應(yīng)的原理為主，甄別患者細胞或組織中目標抗原[4-5]。P53 對尿路上皮腫瘤診斷有一定作用，單作用小、Ki67 主要是判斷細胞增殖活性[6-7]。免疫組織化學染色法可被用來進行抗原表達位置的檢測，也可檢測蛋白質(zhì)、多糖及核酸等抗原性物質(zhì)，該檢測方法的優(yōu)勢是靈敏度高、專一性、檢測簡單、檢測成本低。恰當組織處理是免疫組化染色的基礎(chǔ)，也是保障染色成功的基礎(chǔ)條件[8-9]。免疫組化染色需要重視組織細胞準備過程，需要明確染色需求，并保障組織細胞形態(tài)完整性，保證組織及細胞內(nèi)抗原不會彌散等，避免組織出現(xiàn)自溶。若組織或細胞已經(jīng)壞死，就無法保障染色的成功[10-11]。組織標本一般用到膀胱癌患者的活性組織檢查標本，并在取材過程中明確具體的取材部位。其取材位置是在主要病變區(qū)域、病灶與正常組織的交界位置。在染色去彩鉛需要將表面壞死組織去除防止組織干涸，還需要采集遠離病灶的正常組織作為對照目標。取材操作要準確、快速，取材后應(yīng)立立即開展下一步操作。免疫結(jié)果有兩種，一種是無色片(即無陽性信號)，另外一種“雜音”染色片(有陽性信號)。陰性主要是染色在結(jié)束后切片無陽性信號[12-13]。也可能存在真陰性及假陰性。真陰性結(jié)果一般在染色過程中無異常，組織或細胞無色片(即無陽性信號)和“雜音”染色片(有陽性信號)。假陰性結(jié)果無法反映患者疾病真實情況[14-15]，也可能是染色過程中某一個過程或環(huán)節(jié)存在異常，如組織未進行抗原修復(fù)，部分組織必須經(jīng)過抗原修復(fù)才能檢測抗原，也可能是抗體長期不用和(或)已超過有效期導致[10]。針對假陰性結(jié)果，需要檢驗人員在免疫組化期間設(shè)立陽性對照組。若是陽性對照正常，可以表明染色過程及用到的試劑并無異常，并觀察檢查組織，進行內(nèi)部對照。如果是CD117，檢驗人員可以從肥大細胞的染色情況對免疫組化過程及本身組織實施必要判斷。判斷主要依據(jù)正常的肥大細胞可以表達CD117，并在細胞膜或胞質(zhì)表達。

該研究發(fā)現(xiàn)，3 組CK7、P63 表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；3 組CK20、P53、Ki67 表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。可見免疫組化染色對診斷膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別有較大的應(yīng)用價值，通過提升免疫組化學染色的準確性，需將細胞固定，促使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，降低內(nèi)源性或外源性反應(yīng)，避免細胞自溶，保證組織及細胞抗原性存在，防止抗原彌散或丟失，因此選擇的標本需盡量保持新鮮，并將其及時固定，并依據(jù)操作標準保證操作的完成，提高CK7 陽性表達率。免疫組化染色在A3 組與A2 組也存在比較明顯的差別，尤其是CK20、P53、Ki67 陽性表達率均有效提升，可見A3 組與其他兩組各項指標對比，檢出陽性率相對更高（P＜0.05）。該研究與徐偉莉[16]研究有相似之處，主要體現(xiàn)于CK7(P63 的陽性表達率為100%)、P63(P63 的陽性表達率為100%)在3組的陽性表達率層面，可見該次研究有一定科學意義。

綜上所述，CK7、P53 能夠膀胱尿路上皮腫瘤診斷提供輔助。而Ki67 與CK20 聯(lián)合對膀胱尿路上皮腫瘤及類型鑒別有較大參考價值，并判斷出膀胱尿路上皮腫瘤良性及惡性。