豬冷凍精液的解凍及人工授精技術

虎軍紅，李軍琪，關進科，任碧清，陳 斌，張元林

(1.武山縣城關鎮農業農村綜合服務中心，甘肅 天水 741300；2.武山縣榆盤鎮農業農村綜合服務中心，甘肅 天水 741300；3.武山縣動物疫病預防控制中心，甘肅 天水 741300；4.武山縣動物衛生監督所，甘肅 天水 741300；5.武山縣畜牧獸醫事務服務中心，甘肅 天水 741300)

隨著豬人工授精技術在養豬業中的廣泛應用，豬冷凍精液也不斷走向市場。然而，在給發情母豬配種前，冷凍精液的準備遠比常溫精液的準備復雜得多，關鍵在于冷凍精液的解凍和稀釋環節。因此，盡管兩種精液的授精方法或所用輸精技術基本相同，然而冷凍精液的解凍和稀釋的科學與否會直接決定母豬配種的成敗。根據筆者在實踐工作中積累的經驗，本文將著重介紹豬冷凍精液的解凍、稀釋等詳細操作技術和步驟，以供同行參考。

1 所需物品及解凍前的準備

(1)溫度計。準備2支測量稀釋液和解凍水浴鍋中水的溫度的精準溫度計，并做好標記，以避免交叉使用和污染精液，用后應及時沖洗干凈。如不能確定溫度計的精準度，可用體溫計提前反復確定溫差。

(2)恒溫水浴鍋。恒溫水浴鍋用于稀釋液的預溫，孵浴少量分裝稀釋好的冷凍精液。如果條件允許，建議準備2個水浴鍋，將一個水浴鍋中的水溫設置為30.5 ℃，將另一個水浴鍋中的水溫設置成37 ℃，水溫以精準溫度計實測值為準。

(3)電子秤。電子秤用于稱量冷凍精液的專用稀釋粉，可使用一次性稱量紙，或用量杯準確稱取所需的稀釋粉。

(4)量杯。建議選用容積為1 000 mL以下的量杯。如果量杯的刻度不夠精準，可以用電子秤稱取所需的純凈水或雙蒸水。在使用結束后，要及時用純凈水或雙蒸水沖洗，使量杯保持衛生，隨后烘干備用。

(5)純凈水或雙蒸水。在配制稀釋液以及沖洗量杯和稀釋液專用的溫度計時，必須使用純凈水或雙蒸水，不可用含金屬礦物質等雜質的水，如礦泉水等。在使用前，可選用便攜式水質測定儀測定水質。

(6)稀釋液。冷凍精液的專用稀釋粉應利用冰箱進行冷藏保存，在使用前提前1 h取出備用。進口的豬冷凍精液為3 mL/支，即每支精液管含3 mL的冷凍精液，因而應按160 mL純凈水或雙蒸水加入8 g稀釋粉的比例配制稀釋液。當稀釋粉在水中完全溶解后，將盛有稀釋液的量杯放入水溫為30.5 ℃的水浴鍋中，經過30 min的平衡后方可使用。稀釋液要現用現配，冷凍精液專用稀釋粉打開包裝后要盡快用完；如不能一次性用完，剩余的要繼續冷藏，但不宜長時間存放。

(7)空調或電暖設備。在對豬冷凍精液進行解凍前，開啟空調或電暖設備，使室溫上升至28 ℃～30 ℃，這將有利于維持冷凍精液解凍后精子的活力。

(8)泡沫箱。泡沫箱具有良好的保溫性，可用于豬冷凍精液的解凍，準備2個，其中一個備用。在給豬冷凍精液解凍前，在泡沫箱中至少裝入10 L以上的溫度為50.5 ℃的熱水，水越多水溫的降低速度越慢，越有利于對多管冷凍精液的解凍。在給冷凍精液解凍時，應隨時監測水溫，并根據所測結果適時補充熱水。不宜采用水浴鍋解凍，因為水浴鍋中不同層次的水具有不同的溫度。

(9)干紙巾。干紙巾用于接取冷凍精液管，擦干解凍后管壁的水分，防止污染和影響精液品質。

(10)輸精瓶。每支冷凍精液需配備2支干凈的一次性輸精瓶，可多準備一支用于留樣孵浴觀察。

(11)一次性注射器。以20 mL～50 mL規格的一次性注射器為宜，用于抽取稀釋液以沖洗冷凍精液管，不宜反復使用，或交叉用于不同品種公豬的精液。

(12)剪刀。用于剪斷冷凍精液管兩端，讓解凍后的冷凍精液順利流入裝有稀釋液的輸精瓶。在同時對不同品種或品系公豬的冷凍精液進行解凍時，應注意及時清潔剪刀，防止精液品種交叉。

(13)長柄彎頭鉗。用于從液氮罐中夾取冷凍精液并在水浴中解凍，建議使用25 cm～30 cm長的彎頭鉗。

(14)計時器。用于解凍中計時使用，如無計時器，可用手機代替。

2 冷凍精液的解凍步驟

(1)向準備好的一個輸精瓶中倒入60 mL提前配制并已經預溫到30.5 ℃的冷凍精液稀釋液。

(2)用長柄彎頭鉗從液氮罐中快速找到并取出需要解凍的冷凍精液管，然后用紙巾小心接住冷凍精液管，同時核對標記于管壁上的種豬信息。

(3)用長柄彎頭鉗迅速夾住冷凍精液管的中部，快速將其以45°的方向放入溫度為50.5 ℃的溫水中，并在溫水中勻速移動以進行解凍，滿50 s后立即取出，并用紙巾快速擦干管壁水分。

(4)豎立擦干后的冷凍精液管，并用剪刀剪掉上端靠近氣泡的封裝球，然后倒置于裝有稀釋液的輸精瓶口處，并緊貼瓶口側壁。待氣泡上移到管頂后剪掉另一端的封裝球，讓管內精液貼著瓶壁流入輸精瓶內，再用一次性注射器吸取稀釋液，將管內殘留的精液沖入輸精瓶內。

(5)蓋好輸精瓶的瓶蓋，輕輕轉動搖勻，然后將稀釋后的精液平均分成2瓶，并分別貼壁加注稀釋液至80 mL，排除氣體后蓋好瓶蓋，隨后進行編號標記。

(6)稀釋的精液在被送去配種前可預留少量，并裝入另一個輸精瓶中。將預留的稀釋精液連同輸精瓶一同放在溫度為37 ℃的水浴中，停留5 min～10 min后觀察精子活力。

(7)冷凍精液經解凍并稀釋后應立即給母豬配種。在運送至配種舍的過程中，應將稀釋精液放入便攜式恒溫箱內，或者用37 ℃的水袋和干毛巾做好保溫，且應在稀釋后30 min內完成輸精。在對冷凍精液進行大批量解凍時，要求多人配合流水作業，一次運送不宜超過4瓶。

3 冷凍精液的儲存和液氮罐的維護

冷凍精液必須儲存在裝有液氮的液氮罐中。轉移或挑選時，在液氮外的停留時間不宜超過5 s，應盡量在罐口內進行，或者在裝有液氮的泡沫箱中進行。

平時應將裝有液氮的液氮罐置于陰涼處，選取冷凍精液后應及時蓋上罐蓋，防止液氮受熱揮發。液氮罐需定期稱重以判斷剩余的液氮量，接近預警重量時要及時補充液氮，使冷凍精液管完全沉浸于液氮中。按液氮密度0.88 kg/L計算60%液氮余量的重量，再加上空罐重量，計算出預警重量。建議另配一個液氮罐，并單獨儲備一定數量的液氮，以方便為存放冷凍精液的液氮罐及時添加液氮。可參照表1中的參數判斷液氮罐中液氮的余量。

4 人工授精

4.1 授精前的準備

應選擇合適的輸精槍，輸精槍的大小由后備母豬、經產母豬、老母豬的體型大小決定，選大、中或小相應規格的一次性輸精槍2把，其中1把留作備用。準備1塊干凈抹布，5 000 mL溫水，5 000 mL 0.02%～0.10%高錳酸鉀溫水，1瓶專用潤滑劑，1把專用清洗器。

4.2 清洗消毒

配種員首先消毒雙手，并立即佩戴一次性手套。用溫水清洗母豬外陰和臀部周圍，再用高錳酸鉀溫水進行消毒，隨后用抹布擦干外陰口。

4.3 輸精槍的使用

用潤滑劑涂抹輸精槍的海綿，以斜向上方45°的方向緩慢插入母豬生殖道直至無法插進，此時逆時針旋轉3圈，以輸精槍插入約三分之二為宜。當無法將輸精槍插進時，將往回拉1 cm左右，隨后連接輸精瓶開始輸精。輸精時應抬高輸精瓶，輕輕擠壓以排出母豬生殖道中的空氣。輸精前要先搖勻精液，插入輸精槍時配種員的手不宜直接觸碰輸精槍前三分之二的部分。

4.4 輸精

輸精時精液的輸入要緩慢，不能用手擠壓輸精瓶。精液輸送到一半時，可以在輸精瓶的底部扎一個小口，讓精液慢慢流入，整個輸精過程應控制在5 min左右。

在輸精的同時，配種員可以用手按壓母豬背部，按摩外陰、臀部內側、乳房等敏感區域，以刺激子宮收縮倒吸精液。

輸精完畢時不宜立即拔出輸精槍，可以在輸精槍末端5 cm左右處對折，并拔下精液瓶套在輸精槍對折末端，以防止精液倒流。同時繼續按壓母豬背部2 min～3 min，再等3 min～5 min后拔出輸精槍，完成輸精過程。