伊維菌素注射液含量測定的獸藥檢測實驗室能力比對結果分析

戴 青，王 軒，趙 暉，韓寧寧，楊秀玉，張秀英

(中國獸醫藥品監察所，北京 100081)

伊維菌素是阿維菌素的衍生物，由阿維鏈霉菌發酵產生，對畜禽體內外寄生蟲特別是線蟲和節肢動物均有良好的驅殺作用，是獸醫臨床深受重視的高效抗寄生蟲藥物[1-2]。《中國獸藥典》2020年版一部[3]收載了伊維菌素注射液的質量標準，采用高效液相色譜法測定伊維菌素的含量。采用高效液相色譜法進行含量測定是獸藥質量控制的關鍵指標，在實驗室日常工作中屬于高頻次檢驗項目，該項目檢測結果的準確性關系到臨床用藥的有效性和安全性，因此實驗室對該項檢測能力的掌握十分重要[4]。實驗室間比對是按照預先規定的條件，由兩個或多個實驗室對相同或類似的被測樣品進行檢測的組織、實施和評價，從而確定實驗室能力，識別實驗室存在的問題與實驗室間的差異，是判斷和監控實驗室能力的有效手段之一。本研究對中國34家獸藥檢測機構采用高效液相色譜法測定伊維菌素注射液含量的能力進行測試(圖1)，其中省級獸藥檢測機構29家，第三方檢測機構3家，獸藥生產企業2家。研究能力比對樣品的均勻性與穩定性、結果統計、能力評價等情況，并對測試結果進行討論。

圖1 參加實驗室比例分布圖

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜儀(2695型，Waters公司)；紫外檢測器(2487型，Waters公司)；電子天平(XS205DU型，Mettler Toledo公司)；甲醇(色譜純，Merck公司)；乙腈(色譜純，Merck公司)；伊維菌素對照品(來源/批號/含量：中國獸醫藥品監察所/K0192007/92.0%)。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 能力比對樣品為伊維菌素注射液，規格為5 mL∶50 mg，采用安瓿包裝，每支裝量為5 mL，保存條件為遮光，密閉，在陰涼干燥處保存。

1.2.2 樣品均勻性和穩定性考察 根據CNAS-GL003《能力驗證樣品均勻性和穩定性評價指南》要求[5]，從能力比對樣品中隨機抽取10支進行均勻性檢驗，每支樣品在重復性條件下測定2次，采用單因子方差分析法計算統計量F值。為考察樣品對運輸過程中高溫的耐受性，隨機抽取4支樣品放置于40 ℃下，分別放置1 d、3 d、5 d、7 d后測定伊維菌素含量。為考察樣品對高濕環境的耐受性，隨機抽取4支樣品放置于相對濕度80%條件下，分別放置1 d、3 d、5 d、7 d后測定伊維菌素含量。每支樣品在重復性條件下測定3次，采用t檢驗法分別將高溫、高濕條件測定結果的平均值與第0天均勻性檢驗樣品的測定結果進行比較。

1.2.3 評定方法及標準 根據CNAS-GL002《能力驗證結果的統計處理和能力評價指南》要求，采用穩健統計法計算各參加實驗室的Z值[6]。本項能力比對統計分析采用穩健統計方法，以各實驗室測定結果的穩健平均值作為指定值(X)，以各實驗室測定結果的穩健標準差作為能力評定標準差(σ)。將各實驗室報告的兩次測定結果計算平均值作為實驗室測試結果(x)，根據以下公式計算實驗室Z比分數。

Z=(x-X)/σ

以Z比分數評價各實驗室結果，即：若同一實驗室兩份樣品的Z比分數均滿足|Z|≤2，檢測結果為滿意結果；若同一實驗室兩份樣品的Z比分數有1個或兩個滿足2<|Z|<3，檢測結果為有問題；若同一實驗室兩份樣品的Z比分數有1個或兩個滿足|Z|≥3，檢測結果為不滿意結果或離群值。

2 結果與分析

2.1 樣品均勻性考察結果 樣品的均勻性測定結果見表1-表2，采用單因子方差分析法計算統計量F值，F臨界值F0.05(9,10)=3.02，統計量F小于3.02，表明在0.05顯著性水平時，樣品是均勻的。

表1 能力比對樣品伊維菌素注射液含量均勻性考察結果

表2 均勻性考察方差分析結果

2.2 樣品穩定性考察結果 采用單一樣本t檢驗的方法對高溫、高濕條件測定結果的平均值與第0天均勻性檢驗樣品測定結果進行比較(表3-表4)，查表得在顯著性水平α=0.05，自由度為30(n1+n2-2)時t0.03,30的臨界值為2.042，統計量t值小于2.042，表明樣品在40 ℃和相對濕度80%條件下分別放置7天與第0天含量測定結果無顯著性差異，樣品是穩定的。

表3 40 ℃條件下放置穩定性考察結果

表4 相對濕度80%、25 ℃條件下放置穩定性考察結果

2.3 能力比對結果 參加本項能力比對的34家單位均在規定時間內報送了檢測結果(表5，圖2-圖3)，對所有結果進行格拉布斯檢驗，無離群值。本項能力比對32家單位的結果為滿意，2家單位結果有問題，滿意率94.1%。

表5 檢測結果統計量匯總

圖2 參加實驗室檢測結果頻率分布圖

圖3 參加實驗室檢測結果Z比分數圖

3 討論與結論

本項能力比對要求配制的溶液濃度為0.2 mg/mL，有3家實驗室對照品稱量僅約10 mg，稱樣量少可能導致測定結果的不準確性。定量測定時，對照品溶液和供試品溶液均應分別配制兩份進行測定[7]，有4家實驗室對照品溶液僅配制一份，其測定結果的偏差直接影響供試品溶液的測定。建議日常檢測中采用雙樣雙針進樣，以降低實驗中儀器誤差。在溶液的配制過程中，玻璃儀器的精度不足、定容操作失誤、樣品是否完全溶解等因素均會對實驗結果產生較大影響，實驗中所用的移液管與容量瓶均應經檢定合格后方可使用。本項能力比對規定供試品取樣方法為精密量取，應選擇準確度符合國家標準精密度要求的移液管進行取樣，在使用移液管時，需考慮潤洗、流出時間、等待時間等因素的影響[8]。

本項能力比對涉及的主要儀器設備為高效液相色譜儀和分析天平，所有儀器設備在使用期間均應按使用頻繁程度和儀器的穩定性定期校準，并對校準結果進行確認，滿足檢驗要求后方可使用，必要時還應進行期間核查。高效液相色譜法屬于儀器分析法，《中國獸藥典》中要求對色譜系統進行適用性試驗，一般要求用對照品溶液連續進樣5次，其峰面積測量值的相對標準偏差應不大于2.0%。能力比對樣品及標準物質應按照作業指導書規定的環境條件進行儲存，需放至室溫后開瓶并立即使用。在稱量過程中，標準物質由冷藏條件取出后，未放至室溫或開瓶后放置時間過長，則可能引濕或失水，從而引入較大系統偏差。

伊維菌素注射液含量測定能力比對的主要目的是為了評價參加實驗室采用高效液相色譜法進行含量測定的水平，有助于實驗室進一步提高檢測技術和加強質量管理。本研究首次對中國34家獸藥檢測機構伊維菌素注射液含量測定能力進行了測試，通過穩健統計法計算各參加實驗室的Z值，測試結果的滿意率為94.1%，表明承擔獸藥監督抽檢和風險監測任務的單位具有較高的高效液相色譜法檢驗檢測能力。各檢測機構應進一步完善質量管理，不斷提高實驗室檢測技術和實驗室管理水平，確保日常檢測結果準確、可靠。