不同病情潰瘍性結腸炎患者腸道菌群數目與其輔助性T細胞17、調節性T細胞免疫平衡的相關性

楊夏，王秀麗，李偉

（安鋼總醫院 檢驗科，河南 安陽 455000）

潰瘍性結腸炎（UC）為臨床常見的消化系統慢性疾病，臨床癥狀多表現為腹瀉、腹部脹痛、食欲衰退、便血等，且近年來其發病率逐漸上升，對患者身體健康、生活質量造成嚴重影響［1］。輔助性T 細胞17（Th17）、調節性T 細胞（Treg）為近年來新發現的T 淋巴細胞亞群，可參與機體多種免疫調節，當機體受炎性因子刺激后可釋放多種血管細胞因子及活性物質，加重炎癥反應［2］。相關研究結果表明［3-4］，Th17/Treg 免疫平衡與UC病情程度及進展具有緊密聯系，其水平失衡可促進機體炎性因子釋放，加重UC 病情發展。因此，臨床應盡早改善患者免疫調節功能，防止病情進展［4］。本研究選取86 例于安鋼總醫院就診的UC患者，旨在探討腸道菌群數目與Th17/Treg 免疫平衡的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取86 例安鋼總醫院2018 年8 月至2020 年8 月就診的UC 患者，根據病情程度不同分為兩組（緩解期41 例、活動期45 例）。緩解期男24 例，女17 例；年齡38～54 歲，平均（45.82±2.43）歲；體 質 量 指 數21.9～29.4 kg/m2，平 均（25.28±1.47）kg/m2。活動期男26 例，女19 例；年齡37～56 歲，平均（45.73±2.38）歲；體質量指數21.6～29.2 kg/m2，平均（25.35±1.42）kg/m2；兩組基線資料（性別、年齡、體質量指數）比較差異有統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經院倫理委員會審核批準。

1.2 納入及排除標準

納入標準：均符合UC 診斷標準［5］；對本研究知情并簽署同意書。排除標準：合并其他消化系統疾病；有嚴重精神障礙無法配合者；合并腎、肝及造血系統嚴重疾病；合并其他惡性腫瘤疾病者。

1.3 方法

1.3.1 腸道菌群數量檢測 采集所有患者新鮮糞便1 g，采用北京天根生化50T 型DNA 提取試劑盒對糞便中總DNA 進行提取，采用軟件設計乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸桿菌、擬桿菌、場球菌DNA引物，采用聚合酶鏈反應試劑盒對其進行擴增，根據循環數計算細菌數目，以lgN/g 表示。

1.3.2 Th17、Treg 細胞百分比檢測 采集所有患者空腹狀態下外周靜脈血液5 mL，采用密度梯度離心法采集單個核細胞，試管中分別加入CD3-Cy5、白細胞介素（IL）-17、CD8a，避光條件下靜置30 min 后，加入100 μL 固定劑，再次靜置30 min后，加入100 μL 破膜劑，采用磷酸鹽緩沖液沖洗后，經離心半徑12 cm，800 r/min 離心6 min，室溫下靜置20 min 后加入500 μL 磷酸鹽緩沖液重懸，采用貝克曼DX 流式細胞儀對Th17 細胞占比進行檢測。再次抽取所有患者空腹狀態下外周靜脈血液5 mL，分別加入10 μL CD25-Cy5、CD127-Cy5及CD4-異硫氰酸熒光素，室溫下靜置15 min 后，加入1 mL 溶血素，經離心半徑8 cm，1 500 r/min離心10 min 后，加入500 μL 磷酸鹽緩沖液重懸，采用貝克曼DX 流式細胞儀對Treg 細胞百分比進行檢測。

1.4 觀察指標

①統計比較兩組腸道菌群數目，包括乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸桿菌、擬桿菌、腸球菌。②統計比較兩組Th17、Treg 細胞百分比及Th17/Treg比值。③分析腸道菌群數目與Th17、Treg 細胞百分比相關性。④比較預后不同Th17/Treg 患者腸道菌群數目。⑤分析Th17/Treg 免疫平衡的相關因素。

1.5 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件分析處理數據。計量資料以均數±標準差（）表示，用t檢驗；通過Logistic 進行多因素回歸分析，采用Pearson 進行線性相關性分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者腸道菌群數目比較

與活動期患者相比，緩解期患者的乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌數目較多，腸桿菌、腸球菌數目較少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者腸道菌群數目比較（,lgN/g）

表1 兩組患者腸道菌群數目比較（,lgN/g）

2.2 兩組患者Th17、Treg 及Th17/Treg 比值比較

與活動期患者相比，緩解期患者Th17、Th17/Treg 較低，Treg 較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者Th17、Treg 及Th17/Treg 比值比較（）

表2 兩組患者Th17、Treg 及Th17/Treg 比值比較（）

2.3 腸道菌群數目與Th17、Treg 相關性分析

經Pearson 相關性分析可知，乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌與Th17、Th17/Treg 呈負相關，與Treg 呈正相關，腸桿菌、腸球菌與Th17、Th17/Treg 呈正相關，與Treg 呈負相關（P＜0.05）。見表3。

表3 腸道菌群數目與Th17、Treg 相關性分析（）

表3 腸道菌群數目與Th17、Treg 相關性分析（）

2.4 不同預后Th17/Treg 患者腸道菌群數目比較

隨訪1 個月后，Th17/Treg 平衡患者52 例，Th17/Treg 失衡患者34 例。與Th17/Treg 失衡患者相比，Th17/Treg 平衡患者乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌數目較多，腸桿菌、腸球菌數目較少，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 不同預后Th17/Treg 患者腸道菌群數目比較（,lgN/g）

表4 不同預后Th17/Treg 患者腸道菌群數目比較（,lgN/g）

2.5 Th17/Treg 平衡相關因素分析

將預后Th17/Treg 平衡作為因變量，以腸道菌群數目作為自變量，納入Logistic 回歸模型進行分析，結果顯示，腸道菌群數目為UC 患者Th17/Treg平衡的影響因素。見表5。

表5 Th17/Treg 平衡相關因素分析

3 討論

UC 為臨床常見的消化系統慢性疾病，多由患者免疫功能失調而引起，如未得到及時有效治療，極易引起腸穿孔、中毒性腸擴張的疾病，對患者身體健康、生活質量造成嚴重影響，因此，臨床需盡早給予有效治療，調節免疫功能，控制病情進一步發展［6］。

Treg 細胞為具有特異性免疫調節效果的專職抑制細胞，其可通過信號刺激激活后抑制機體CD4+等T 細胞的增殖分化，從而抑制其免疫功能，其對機體部分T 細胞選擇性抑制是維持免疫平衡的重要機制［7］。相關研究結果發現［8］，Treg 細胞可有效抑制病理性T 淋巴細胞增殖及組織浸潤，其細胞數量減少可致使機體免疫功能異常，從而導致各種免疫性疾病的發生。Th17 細胞為機體T淋巴細胞前體分化而成，具有獨立的分化調節機制，可分泌IL-17 等多種炎性因子，從而促進機體炎癥發生，引起多種免疫性疾病［9］。相關研究表明［10］，UC 患者機體Th17 細胞比例增加，Treg 細胞比例降低，機體抑制能力顯著下降，從而致使自身反應性T 細胞增多，因此，調節Th17/Treg 免疫平衡對于治療UC 具有重要意義。機體處于正常生理情況下，腸道內雙歧桿菌等優勢菌可形成腸道屏障維持其正常功能，當腸道菌群數目紊亂時，優勢菌將轉化為腸球菌等厭氧菌，從而導致腸道功能障礙，引起免疫功能失調［11-12］。相關研究表明［13］，UC 患者雙歧桿菌、乳酸桿菌等優勢菌數目顯著減少，場球菌等致病菌數目顯著升高。本研究結果顯示，緩解期組腸道菌群數目優于活動期組，Th17、Th17/Treg 低于活動期組，Treg 高于活動期組，說明Th17、Treg 細胞比例及腸道菌群數目與UC 病情具有一定聯系，進一步進行Pearson相關性分析可知，乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌與Th17/Treg 呈負相關，腸桿菌、腸球菌與Th17/Treg呈正相關，說明腸道菌群數目與UC 患者Th17/Treg免疫平衡具有緊密聯系。

本研究對不同預后Th17/Treg 患者腸道菌群數目進行分析，結果顯示，UC 患者腸道菌群數目為Th17/Treg 免疫平衡的重要影響因素，臨床可通過監測患者腸道菌群數目評估其免疫功能，從而制定相應治療方案，控制病情進展。

綜上所述，腸道菌群數目、Th17、Treg 細胞比例與UC 病情具有緊密聯系，其數目與Th17/Treg免疫平衡存在相關性，為臨床評估病情、制定治療方案提供可靠依據。