NY/T 761-2008農殘檢測樣品前處理方法的優化

陳云虹 劉 慧 符錦鋒

（海南省天然橡膠質量檢驗站，海南 ?？?570206）

蔬菜和水果是人們日常生活必不可少的食物，能夠為人體提供各種營養成分（如維生素C、胡蘿卜素等），滿足人體生長發育的需要，經常食用蔬菜水果能夠預防多種疾病的發生。蔬菜和水果在種植過程中容易受到各種病蟲害的侵害，噴灑農藥是防治蔬菜水果病蟲害的主要方法之一，我國每年使用農藥130-300萬噸。目前，常用的農藥有殺蟲劑（如毒死蜱、對硫磷、氯氰菊酯等）、殺菌劑（如百菌清、嘧菌酯、苯醚甲環唑等）、除草劑（如百草枯、敵草腈等）及植物生長調節劑（如多效唑、乙烯利等）。但由于農藥具有水溶性、難以降解等化學性質，且農戶不合理使用（亂用、濫用），或者蔬菜水果沒有過安全采摘期，常引起農產品農藥殘留，嚴重危害人體健康。福建茶葉農殘超標、海南“毒豇豆”、山東青島“毒韭菜”，蔬菜水果農藥殘留超標事件頻頻發生。同時，噴灑的農藥通過進入土壤、水體，不僅污染環境，還會通過食物鏈進入人體，進一步影響人體健康。因此，準確、及時、高效地對農產品農藥殘留進行分析測定是保障人民安全的重要措施之一。

目前，農藥多殘留檢測中常用的方法是NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》、GB 23200.8-2016《水果和蔬菜中500種農藥及相關化學品殘留量的測定氣相色譜-質譜法》及GB 23200.113-2018《食品安全國家標準植物源性食品中208種農藥農藥及其代謝物殘留量的測定氣相色譜-質譜聯用法》。但氣相色譜-質譜聯用儀價格昂貴且對人員專業技術能力要求相對較高，在多數農產品質量安全檢驗檢測實驗室并未普及。而NY/T 761-2008雖然與之前的方法相比，該標準前處理步驟明顯減少，但是仍然存在復雜繁瑣、時間長、有機溶劑用量大、回收率較低等問題。現階段對單一基質農殘檢測前處理的優化和單一種類農殘（有機磷類或有機氯類）檢測前處理的優化研究比較多，對多種基質多農藥殘留前處理的優化研究較少。本研究在NY/T 761-2008的基礎上，將前處理步驟進行優化，選取4種基質（黃瓜、豇豆、小白菜、百香果）作為試驗樣品，5種常規農藥（毒死蜱、三唑磷、三唑酮、甲氰菊酯、聯苯菊酯）作為測試農藥，分別計算優化后方法的回收率、相對標準偏差、最低檢出限等，以期為蔬菜水果農藥多殘留檢測提供一種操作簡單、經濟高效、準確可靠的前處理方法。

1.材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 儀器

7890 A氣相色譜儀（美國Agilent公司）：配有FPD檢測器；Clarus 580氣相色譜儀（美國PerkinElmer公司）：配有ECD檢測器；DL-5C大容量離心機（上海安亭科學儀器廠）；Vortex3渦旋振蕩器（德國IKA公司）；RE-2000B旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；玻璃器皿（國藥集團化學試劑有限公司）

1.1.2 實驗試劑

乙腈、正己烷、丙酮等有機溶劑（美國Tedia公司）：色譜純；毒死蜱、三唑磷、三唑酮、甲氰菊酯、聯苯菊酯標準物質（天津農業農村部環境科研監測所）：濃度為100ug/mL；弗羅里矽柱（德國Simon Aldrich公司）：體積6 mL，填充物1000mg；氯化鈉（廣州化學試劑廠）：分析純。

1.1.3 試驗樣品

黃瓜、豇豆、小白菜、百香果樣品來源于海南省例行監測樣品，經檢測不含上述測試農藥。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液配制

標準儲備溶液（10 μg/mL）：將購買的100μg/mL各標準物質母液分別選用與母液相同的溶劑稀釋為10 μg/mL，作為標準儲備溶液，于-18℃冰箱保存待用。

純溶劑標準溶液配制：用移液管分別移取一定體積的10 μg/mL的標準儲備溶液至10mL容量瓶中，毒死蜱、三唑磷一組，用丙酮定容；三唑酮、甲氰菊酯、聯苯菊酯一組，用正己烷定容，配制濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00μg/mL的標準工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

（1）樣品制備

將待測樣品切碎，置于料理機打碎混勻，于-18℃冰箱保存待用。

（2）提取

稱取15g試樣（精確至0.01g）于100mL離心管中，加入30mL乙腈，隨后加入含有5～7g氯化鈉，蓋上離心管蓋，渦旋混勻震蕩2～3min后4200r/min離心5min。

（3）凈化

吸取5.00mL上清液至100mL平底燒瓶，將燒瓶放在旋轉蒸發器上，40℃～45℃水浴蒸至近干，加入2.00mL丙酮復溶，過0.2μm微孔濾膜，7890A-FPD上機檢測。

另取5.00 mL上清液至100mL平底燒瓶，將燒瓶放在旋轉蒸發器上，40℃～45℃水浴蒸至近干，加入2.00mL正己烷復溶，蓋上鋁箔，待凈化。將弗羅里矽柱依次用5.00mL丙酮+正己烷（10+90）、正己烷預淋洗，條件化，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用100mL平底燒瓶接收洗脫液，用5.00mL丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，并重復一次。將盛有淋洗液的圓底燒瓶置于旋轉蒸發器上，40℃～45℃水浴蒸至近干，用2.00mL正己烷復溶，過0.2μm微孔濾膜，Clarus 580-ECD上機檢測。

1.2.3 上機檢測

（1）7890A-FPD氣相條件

色譜柱：DB-17（30m×0.25mm，0.25μm）；進樣口溫度：220℃；檢測器溫度：250℃；燃氣及流量：氫氣，75 mL/min；助燃氣及流量：空氣，100mL/min；升溫程序：150℃；進樣模式：不分流進樣；進樣量：1.00μL；載氣及流量：高純氮（99.999%），3.00 mL/min。

（2）Clarus 580-ECD氣相條件

色譜柱：DB-5（30m×0.25mm，0.25μm）；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：320℃；升溫程序：；進樣模式：分流進樣，分流比10：1；進樣量：1.00μL；載氣及流量：高純氮（99.999%），1.00 mL/min。

1.2.4 試驗設置

在已稱好的待測樣品中分別加入5種農藥(毒死蜱、三唑磷、三唑酮、甲氰菊酯、聯苯菊酯)標樣，制成濃度為0.05、0.40、0.80mg/Kg的模擬加標樣品，按1.2.2方法進行前處理，按1.2.3方法上機測定。分別在0.05、0.20、0.40mg/Kg濃度水平下設置6次重復和1次扣除樣品背景的重復。定量時每次重復分別扣除樣品空白背景值。

2.結果與分析

2.1 方法的相關系數與檢出限

經計算，5種農藥的線性范圍為0.05～1.00μg/mL，r在0.9973～0.9999，以3倍信噪比（S/N）所對應的農藥濃度為檢出限，結果建見表1。

表1 5種農藥檢測方法的相關系數與檢出限

由表1可知，5種農藥的檢出限在0.001～0.02mg/Kg，能夠滿足測定蔬菜和水果農藥殘留衛生標準的要求。

2.2 回收率與精密度

4種空白樣品（黃瓜、豇豆、小白菜、百香果）中分別加入5種農藥混合標準溶液，制成濃度為0.05、0.40、0.80mg/Kg的模擬加標樣品，各重復6次，測定各組分的回收率和精密度（精密度用相對標準偏差表示），結果見表2。

由表2可知，4種基質中，加標濃度為0.05mg/Kg時，5種農藥的平均回收率為84.2%～110.8%，相對標準偏差為2.0%～6.7%；加標濃度為0.40mg/Kg時，5種農藥的平均回收率為84.5%～104.8%，相對標準偏差為1.7%～6.8%；加標濃度為0.80mg/Kg時，加標濃度為85.5%～107.8%，相對標準偏差為1.6%～7.8%。各基質中五種農藥三個加標濃度的回收率都符合GB/T 27404-2008實驗室質量控制規范食品理化檢測檢驗要求（80%～120%）。

表2 四種基質中5種農藥的平均回收率和精密度

豇豆毒死蜱 110.8 3.1 96.7 1.7 107.8 3.7三唑磷 93.5 5.2 88.3 4.6 90.7 5.2三唑酮 85.1 4.8 84.5 6.1 88.2 7.0聯苯菊酯 90.7 4.0 103.1 1.9 100.6 3.3甲氰菊酯 107.4 3.9 90.6 3.2 89.5 4.8小白菜毒死蜱 100.8 2.2 102.2 2.7 99.6 4.1三唑磷 87.8 3.5 90.6 5.1 85.7 5.7三唑酮 84.2 3.9 93.7 6.8 97.2 7.5聯苯菊酯 94.2 4.7 102.1 3.7 101.8 2.4甲氰菊酯 96.3 2.9 97.6 4.2 103.7 3.9百香果毒死蜱 105.3 2.0 98.8 2.6 106.6 4.0三唑磷 100.4 4.3 90.6 4.9 96.1 5.0三唑酮 90.6 6.7 91.2 5.0 87.2 7.8聯苯菊酯 95.5 3.2 101.1 3.6 92.4 1.6甲氰菊酯 87.6 4.8 92.9 3.8 85.5 5.6

3.結論

本研究在NY/T 761-2008基礎上，改變了前處理方法，以4500r/min離心5min代替過濾和靜置30min2個步驟，以40～45℃水浴旋轉蒸發代替氮吹，對線性相關系數、檢測線、回收率、精密度進行考察。結果表明，該方法能夠滿足蔬菜水果中有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯類農藥多殘留檢驗檢測需求。且運用該方法具有回收率高、重復性好、耗時短、有機溶劑和玻璃器皿使用少等優點，適用于批量樣品的前處理要求，可以應用于氣相色譜法測定蔬菜和水果農藥殘留實驗中。

4.實際樣品檢測

將優化后的前處理方法運用于實際樣品檢測，共檢測海南省例行監測樣品500多個，沒有禁用農藥檢出，檢出氯氰菊酯11個，氯氟氰菊酯20個，均不超過食品中農藥最大殘留限量。