冷藏條件對夜蛾黑卵蜂繁育的影響

吳志美，謝永輝，朱 濤，陳雅瓊，錢發(fā)聰，王志江，史愛民，王春婭，吳國星*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南省煙草公司 昆明市公司，云南 昆明 650051；3.云南恒草生物科技有限公司，云南 昆明 650117）

夜蛾黑卵蜂（Telenomus remus Nixon），屬膜翅目（Hymenoptera）廣腹細(xì)蜂科（Platygastridae），是多種鱗翅目夜蛾科昆蟲卵期重要的寄生性天敵［1］。1937年Nixon首次在馬來西亞采集的夜蛾屬卵中發(fā)現(xiàn)了夜蛾黑卵蜂并對其進(jìn)行了描述［2］；1963年為防治夜蛾類害蟲，將夜蛾黑卵蜂從巴布亞新幾內(nèi)亞引入到印度，后來又被引入到其他國家［3］。目前，美國、巴西、墨西哥、委內(nèi)瑞拉等國家利用夜蛾黑卵蜂防治草地貪夜蛾均取得了顯著的防治效果［4-7］。在我國，2007年沈智蓉等［8］在斜紋夜蛾的生物防治研究中報道了夜蛾黑卵蜂是斜紋夜蛾的自然天敵昆蟲；隨后唐雅麗等［9］對夜蛾黑卵蜂的個體發(fā)育進(jìn)行了研究報道。2019年霍梁霄等［10］研究發(fā)現(xiàn)夜蛾黑卵蜂對多層堆積的斜紋夜蛾卵和草地貪夜蛾卵的寄生率在90%以上。趙旭等［11］在玉米田間應(yīng)用夜蛾黑卵蜂防控草地貪夜蛾卵，發(fā)現(xiàn)夜蛾黑卵蜂對草地貪夜蛾的田間寄生率在80%以上。朱凱輝等［12］也報道了夜蛾黑卵蜂與短管赤眼蜂（Trichogramma pretiosum）在田間存在競爭關(guān)系，夜蛾黑卵蜂在競爭試驗中占有優(yōu)勢。上述研究結(jié)果均表明了夜蛾黑卵蜂具有極高的應(yīng)用價值。

寄生蜂在生物防治中的成功應(yīng)用主要通過田間釋放來實現(xiàn)，但田間釋放常需要大量的寄生蜂作基礎(chǔ)［13］。低溫冷藏是田間釋放前進(jìn)行寄生蜂儲備和運輸?shù)挠行Х椒ㄖ唬?4］；通過低溫冷藏可調(diào)節(jié)其發(fā)育進(jìn)程，從而使多批繁殖的夜蛾黑卵蜂可以在同一時期羽化，以滿足實際生物防治中的蟲量需求［15-16］。如3日齡的螟黃赤眼蜂（Trichogramma chilonis）可在10 ℃下貯藏4周，其活蛹率和羽化率均達(dá)70%以上，與對照組無差異［17］；將麥蛾柔繭蜂的4種蟲態(tài)（卵、幼蟲、蛹和成蟲）分別置于-4、0、4、10 ℃溫度下冷藏，發(fā)現(xiàn)以蛹期在10 ℃條件下冷藏為最佳，冷藏12 d時存活率仍達(dá)到75.25%［18］。但有關(guān)夜蛾黑卵蜂低溫冷藏的研究還比較少見，國外僅對夜蛾黑卵蜂的蛹和成蟲進(jìn)行了初步研究，而國內(nèi)有關(guān)夜蛾黑卵蜂低溫冷藏的研究報道還較少。因此，本研究采用斜紋夜蛾卵為寄主，通過比較不同冷藏溫度下、冷藏不同時間對不同蟲齡夜蛾黑卵蜂的影響，明確了夜蛾黑卵蜂適宜冷藏的溫度、時間和蟲齡，可以為實現(xiàn)夜蛾黑卵蜂的規(guī)?；庇?、運輸及應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

夜蛾黑卵蜂來自云南恒草生物科技有限公司，繁育條件為溫度（26±1）℃、相對濕度（RH）為（70±5）%、光周期為14 L∶10 D。羽化后的夜蛾黑卵蜂以10%蜂蜜水進(jìn)行每日飼喂。

斜紋夜蛾購于河南省濟(jì)源白云實業(yè)有限公司。養(yǎng)蟲室內(nèi)飼養(yǎng)溫度（26±1）℃、RH為60%～80%、光周期 14 L∶10 D；飼養(yǎng)至成蟲羽化后，置于養(yǎng)蟲籠內(nèi)，以無菌脫脂棉蘸取10%蜂蜜水每24 h飼喂1次?；\壁內(nèi)覆折疊的紙作為成蟲的產(chǎn)卵介質(zhì)。每天上午收集1次，將產(chǎn)在紙上的卵塊剪下，作為本試驗的供試寄主卵塊。

1.2 試驗方法

新鮮斜紋夜蛾卵塊以1∶50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂寄生24 h。然后把已被夜蛾黑卵蜂寄生的卵塊置于溫度（26±1）℃、RH為（70±5）%、光周期14 L∶10 D的條件下培養(yǎng)，分別取1、3、5、7、9日齡的寄生卵置于5、10、15 ℃下分別貯藏3、6、9 d，到時間后取出相應(yīng)的寄生卵，置于（26±1）℃下繼續(xù)培養(yǎng)，直至羽化。夜蛾黑卵蜂羽化后，隨機(jī)選擇5只羽化的夜蛾黑卵蜂雌蜂，提供卵粒數(shù)相近的新鮮斜紋夜蛾卵塊供其寄生（蜂卵比1∶50），統(tǒng)計夜蛾黑卵蜂對每個卵塊的卵粒寄生率，明確冷藏對夜蛾黑卵蜂寄生活力的影響；待羽化的夜蛾黑卵蜂死亡后，觀察統(tǒng)計夜蛾黑卵蜂的羽化率；同時每個卵塊隨機(jī)測量5只雌蜂的后足脛節(jié)長度，以比較其個體大小。試驗每個處理3次重復(fù)（1個卵塊為1次重復(fù)），以未進(jìn)行冷藏的夜蛾黑卵蜂為對照。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析采用Excel 2007和SPSS 25.0軟件，采用三因素方差分析和單因素方差分析，以及Duncan’s新復(fù)極差法檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 冷藏對夜蛾黑卵蜂羽化率的影響

三因素方差分析結(jié)果表明（表1），冷藏溫度（F=315.13，P＜0.01）、冷藏蟲齡（F=101.66，P＜0.01）和冷藏時間（F=464.55，P＜0.01）均極顯著影響了夜蛾黑卵蜂的羽化率。三因素間所有可能組合也均極顯著影響了夜蛾黑卵蜂的羽化率（P＜0.01）。

表1 冷藏的溫度、時間和蟲齡對夜蛾黑卵蜂羽化率影響的三因素方差分析結(jié)果

冷藏對夜蛾黑卵蜂羽化率的影響結(jié)果見表2，不同日齡的夜蛾黑卵蜂的羽化率在不同溫度及冷藏時間下有不同表現(xiàn)。以斜紋夜蛾卵繁育的夜蛾黑卵蜂在溫度（26±1） ℃下發(fā)育（對照組），羽化率為90.91%。當(dāng)溫度為5 ℃時，不同日齡的夜蛾黑卵蜂冷藏3 d后，5日齡的羽化率最低，顯著低于對照組和其他日齡的羽化率；冷藏6 d后，1日齡和7日齡的羽化率與對照組無顯著差異；冷藏9 d后，1日齡的羽化率最高，為72.17%，顯著高于其他日齡的羽化率。當(dāng)溫度為10 ℃時，不同日齡的夜蛾黑卵蜂冷藏3 d后，3日齡的羽化率顯著低于對照組和其他日齡的羽化率，為84.89%；冷藏6 d后，1日齡和9日齡的羽化率與對照組無顯著差異，分別為91.93%和90.17%；冷藏9 d后，1日齡的羽化率最高，為78.83%，顯著高于其他日齡。當(dāng)溫度為15 ℃時，所有蟲齡冷藏6 d后羽化率與對照組均無顯著差異；冷藏9 d后，7日齡的羽化率最高，為87.29%，與對照組無顯著差異。

綜合來看，不同日齡的夜蛾黑卵蜂的羽化率隨著冷藏時間的延長均有所下降；隨著溫度降低而降低。其中在15 ℃冷藏對夜蛾黑卵蜂的不利影響小于10 ℃和5 ℃；其中1日齡的夜蛾黑卵蜂對溫度的反應(yīng)最不敏感，在所有溫度下冷藏6 d后的羽化率與對照組沒有顯著差異；在15 ℃下7日齡的夜蛾黑卵蜂可冷藏9 d，其羽化率最高，效果最好（表2）。

表2 冷藏對夜蛾黑卵蜂羽化率的影響 %

2.2 冷藏對夜蛾黑卵蜂寄生能力的影響

三因素方差分析結(jié)果表明（表3），冷藏溫度（F=110.29，P＜0.01）、冷藏蟲齡（F=25.12，P＜0.01）和冷藏時間（F=97.73，P＜0.01）均極顯著影響夜蛾黑卵蜂的寄生率。三因素間所有可能組合也均極顯著影響夜蛾黑卵蜂的寄生率（P＜0.01）。

表3 冷藏的溫度、時間和蟲齡對夜蛾黑卵蜂寄生率影響的三因素方差分析結(jié)果

冷藏對夜蛾黑卵蜂寄生率的影響結(jié)果見表4。以斜紋夜蛾卵繁育的夜蛾黑卵蜂在溫度（26±1）℃下發(fā)育（對照組），其寄生率為94.85%。由于在5 ℃下，3日齡冷藏9 d后，以及9日齡冷藏9 d后的夜蛾黑卵蜂基本不羽化，故其寄生率不作統(tǒng)計。不同日齡的夜蛾黑卵蜂的寄生率隨著溫度的降低而降低，且在5 ℃下則下降得更明顯，在15 ℃下則影響較??；隨著冷藏時間的延長，夜蛾黑卵蜂的寄生率均有所下降。

具體來看，不同蟲齡的寄生率在不同冷藏溫度、時間下表現(xiàn)均不同。在5 ℃下，冷藏9 d后，5日齡的夜蛾黑卵蜂的寄生效果最好，其寄生率為74.87%。在10 ℃下，冷藏9 d后，1日齡的夜蛾黑卵蜂的寄生率最高，達(dá)80.12%。在15 ℃下，1日齡和7日齡的夜蛾黑卵蜂的寄生能力受冷藏影響最小，冷藏3 d后，其寄生能力與對照組差異都不顯著；冷藏9 d后的寄生率分別為85.07%和89.03%，顯著高于其他日齡（表4）。

表4 冷藏對夜蛾黑卵蜂寄生率的影響 %

2.3 冷藏對夜蛾黑卵蜂個體大小的影響

三因素方差分析結(jié)果（表5）表明，冷藏溫度（F=224.53，P＜0.01）、蟲齡（F=386.66，P＜0.01）、時間（F=470.56，P＜0.01）均極顯著影響了夜蛾黑卵蜂的個體大小。三因素間所有可能組合也均極顯著影響了夜蛾黑卵蜂個體的大?。≒＜0.01）。

表5 冷藏的溫度、時間和蟲齡對夜蛾黑卵蜂個體大小影響的三因素方差分析結(jié)果

冷藏對夜蛾黑卵蜂個體大小的影響結(jié)果見表6。以斜紋夜蛾卵繁育的夜蛾黑卵蜂在溫度（26±1）℃下發(fā)育（對照組），其后足脛節(jié)長度為159.97 μm。由于在5 ℃下，3日齡和9日齡冷藏9 d后的夜蛾黑卵蜂基本不羽化，故其個體大小不作統(tǒng)計。不同日齡的夜蛾黑卵蜂的個體隨著溫度的降低而減小，且在5 ℃下，其個體大小受到的影響最大，而在15 ℃下受到的影響較小；隨著冷藏時間的延長，夜蛾黑卵蜂的個體也越來越小。

不同蟲齡的個體大小在不同冷藏溫度和時間下表現(xiàn)不同。5日齡夜蛾黑卵蜂的個體大小對低溫的反應(yīng)最為敏感，在5、10和15 ℃下冷藏9 d后，其后足脛節(jié)的長度最短，個體最小。在15 ℃下，7日齡和9日齡的夜蛾黑卵蜂在冷藏3、6和9 d后，其個體大小之間差異不顯著（表6）。

表6 冷藏對夜蛾黑卵蜂個體大小的影響 μm

3 結(jié)論與討論

冷藏夜蛾黑卵蜂能積累大量的種蜂，從而滿足生產(chǎn)所需，同時能調(diào)整多批繁殖的夜蛾黑卵蜂在同一時期羽化，延長商品的貨架期［17］。但冷藏后夜蛾黑卵蜂的繁育能力受影響的程度是需要探明的問題。羽化率和寄生率是評估寄生蜂繁育能力的2個重要指標(biāo)。此外，魯梅雪［19］研究表明，寄生蜂雌成蜂卵巢中成熟卵量與蜂的個體大小呈正比。因此，本研究以羽化率、寄生率和個體大小為考察指標(biāo)，綜合比較了不同冷藏溫度、冷藏不同時間對不同蟲齡夜蛾黑卵蜂的影響，結(jié)果表明：冷藏溫度、冷藏蟲齡和冷藏時間均顯著影響了夜蛾黑卵蜂的羽化率、寄生率和個體大小。夜蛾黑卵蜂的羽化率、寄生率隨冷藏時間的延長均有所下降，隨冷藏蟲齡和冷藏溫度的不同而存在差異。綜合來看，在5 ℃和10 ℃下，1日齡的夜蛾黑卵蜂最適宜冷藏，在15 ℃下7日齡的夜蛾黑卵蜂最適宜冷藏，冷藏時間為9 d。

不同蟲齡的夜蛾黑卵蜂對低溫冷藏的敏感程度不同。唐雅麗［20］研究認(rèn)為，處于卵期的夜蛾黑卵蜂對低溫的反應(yīng)不敏感；處于2齡幼蟲的夜蛾黑卵蜂對低溫的反應(yīng)最敏感，其幼蟲存活率會隨著冷藏時間的延長而急劇下降。本研究從羽化率、寄生率和個體大小3個指標(biāo)，綜合比較了夜蛾黑卵蜂適宜冷藏的蟲齡，結(jié)果表明：在5 ℃和10 ℃下最佳的冷藏蟲齡為26 ℃下發(fā)育的1日齡；而3日齡的夜蛾黑卵蜂對低溫的反應(yīng)最敏感，在5 ℃和10 ℃下冷藏9 d后的羽化率低于30%。這一結(jié)果與上述報道相似，再結(jié)合唐雅麗等［9］以甜菜夜蛾卵繁育的夜蛾黑卵蜂個體發(fā)育的研究結(jié)果“夜蛾黑卵蜂卵、1齡幼蟲、2齡幼蟲、預(yù)蛹及蛹的發(fā)育歷期分別為13 h、59 h、24 h、24 h和5 d”，推測被夜蛾黑卵蜂寄生后的斜紋夜蛾卵在26 ℃下發(fā)育1 d（1日齡）、3 d（3日齡）后，此時的夜蛾黑卵蜂分別處于卵期、幼蟲期。本研究還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度為15 ℃時最佳的冷藏蟲齡為26 ℃下發(fā)育的7日齡（蛹期）。Gautum［21］也報道了夜蛾黑卵蜂開始貯藏的最佳齡期為7 d。因此，綜合來看，在不同溫度下夜蛾黑卵蜂適宜冷藏的蟲齡也不同。

但不同的是，Queiroz等［22］也對夜蛾黑卵蜂蛹的低溫貯存效果進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)在10 ℃的貯藏溫度下，蛹貯藏7 d后，其活蛹率、寄生活力、壽命、性別比與對照幾乎無差異。然而，筆者的研究結(jié)果顯示，7日齡（蛹期）的夜蛾黑卵蜂在10 ℃貯存3、6、9 d后，其羽化率、寄生率、個體大小均低于對照組。分析其原因，可能是由于在試驗過程中，將26 ℃下發(fā)育的不同日齡的夜蛾黑卵蜂轉(zhuǎn)移到5、10和15 ℃下貯存時，未設(shè)置中間過渡溫度（梯度降溫），而是直接轉(zhuǎn)移，溫度的驟變可能對夜蛾黑卵蜂造成了一定程度的損害，影響了夜蛾黑卵蜂的發(fā)育和羽化。

此外，Gautum等［21］還對夜蛾黑卵蜂的成蟲進(jìn)行了冷藏研究，發(fā)現(xiàn)夜蛾黑卵蜂雌蜂在5 ℃或10℃下可以存活7 d，并且對它們的生物學(xué)特性沒有顯著的負(fù)面影響；而超過7 d則其繁殖能力會顯著下降。本研究尚未對夜蛾黑卵蜂成蟲的冷藏效果進(jìn)行評價。同時，本研究只對冷藏3、6、9 d后夜蛾黑卵蜂的羽化率、寄生率和個體大小進(jìn)行了評估，當(dāng)冷藏時間超過9 d后對夜蛾黑卵蜂的影響如何，則還有待進(jìn)一步研究。