枳實參與雄性訓練神經痛大鼠疼痛敏感性變化

汪燕 劉宏超 (中國民用航空飛行學院體育部，四川 廣漢 68307；山西師范大學)

枳實為蕓香科小喬木柑橘屬植物，其果實晾干或低溫干燥之后，是我國較為常見的中藥，氣味清新香甜，味道較苦、含有微量的酸度，同時枳實外表是黑色與褐色相見的，表面較光滑，有細小的微粒狀突起〔1〕。其功效最開始記錄在我國早期中醫藥理學專著《神農本草經》中，具有破除體內積聚廢氣，大便不通順，氣管痰的阻礙，胸部麻痹，肝臟器官下垂等一些癥狀〔2,3〕。同時枳實，薤白和桂枝及人參配伍可治療心絞痛，枳實薤白桂枝湯可有效干預氧化應激損傷，其對冠狀動脈痙攣引起的心肌缺血具有一定的保護作用，可有效改善家兔心臟損傷〔4,5〕，而枳實梔子豉湯還具有潛在的抗抑郁作用〔6〕，枳實的黃酮提取物可以有效抑制6-羥基多巴胺(OHDA)誘導的PC12細胞的損傷〔7〕，枳實的揮發油還具有鎮咳喘消除腫脹等多種功能。枳實作為一種中藥功能廣泛。但至今尚未見對慢性痛，尤其是神經性痛模型大鼠疼痛作用變化的研究。本實驗觀察枳實水煮液對雄性訓練神經痛模型大鼠進行行為學測痛，觀察其疼痛敏感性變化。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 本研究選用6只成年雄性大鼠，體重180～200 g。在實驗期間單獨分籠飼養，并且提供12 h的光照、讓其自由進食和飲水，飼養室內的溫度保持在20～24℃。

1.1.2藥品與實驗器材 枳實，購買于北京同仁堂大藥房，將枳實制成水煮液母液，并用母液配制成15.20、30.40、60.80 mg/ml的枳實水煮液，每只大鼠采用不同濃度灌胃，灌胃的量為3 ml枳實水煮液，生理灌胃針由深圳瑞沃德公司提供；熱板儀(型號：YLS-6B，濟南市益延科技發展有限公司)，電子壓痛儀(型號：YLS-3E，山東省醫學科學院設備站)，微量進樣器(上海曼普生物科技有限公司)，電子天平(上海精科實業有限公司)等。

1.2方法

1.2.1訓練大鼠 為了減小實驗誤差并讓大鼠適應實驗步驟及環境，在正式實驗開始之前需要對大鼠進行行為痛覺測試訓練，包括熱板和壓板測試訓練及灌胃的訓練。根據王帥康等〔8〕給出的實驗原理和方法，對大鼠進行連續5 d、每天5輪、每輪3次的訓練。經過訓練后的大鼠，其后爪縮爪潛伏期會維持在一個相對較穩定的范圍。

1.2.2神經痛模型的建立 神經性痛敏模型建立，參照Bennett等〔9〕的方法進行坐骨神經結扎的方法建立神經性痛敏模型。將大鼠用水合氯醛麻醉，暴露一側坐骨神經后，以4號醫用手術線自中樞端向外周端將坐骨神經每隔約1 mm做一個結扎，共4個。結扎之后將神經復位，分層縫合肌肉層與皮膚層，連續注射3 d以上消炎藥物預防感染。向雄性訓練神經痛敏模型大鼠灌胃于枳實水煮液及生理鹽水等，觀察其對神經痛大鼠的鎮痛作用。

1.2.3行為學痛覺測試 壓力測試：用壓力測痛儀對大鼠進行壓力測試。首先需控制開關，將有機玻璃壓在大鼠后爪的跗趾關節處，大鼠感覺到疼痛時后爪便會發生縮回現象，此時必須立即停止計時。分別記錄灌胃枳實水煮液和灌胃生理鹽水對照組神經痛大鼠的后爪縮爪反應潛伏期(HWL)。熱板測試：根據實驗要求需要將熱板的溫度穩定在52℃左右。待大鼠的后爪緊貼在熱板上后便開始計時，直到大鼠后爪感到疼痛主動縮回并且離開熱板時立即停止計時。分別記錄灌胃枳實水煮液和灌胃生理鹽水對照組神經痛大鼠的HWL。

1.3統計學方法 采用SPSS18.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

與灌胃生理鹽水相比，灌胃15.20 mg/ml的枳實水煮液左、右側熱板和壓板HWL均無明顯差異(均P>0.05)；而灌胃30.40 mg/ml的枳實水煮液后，左側后爪熱板和左、右側壓板HWL均有明顯差異(均P<0.05)，而右側熱板差異顯著(P<0.01)；同時灌胃60.80 mg/ml枳實水煮液時，左、右側熱板和壓板HWL差異均顯著(均P<0.01)，見表1。結果顯示，枳實水煮液明顯延長了雄性訓練神經痛大鼠的HWL，表明其具有鎮痛的功效，參與了雄性訓練神經痛大鼠疼痛敏感性變化的調節。

表1 灌胃正常大鼠15.20、30.40、60.80 mg/ml枳實水煮液的與對照組(生理鹽水)大鼠的

3 討 論

目前臨床上鎮痛藥物多采用嗎啡、哌替啶等阿片類藥物，雖然患者不再感覺疼痛，但是能引發抗藥和藥癮效果〔10〕。為了避免成癮性等不良反應，我們把目光聚焦在中藥上，本實驗濃度為30.40與60.80 mg/ml枳實水煮液具有明顯的鎮痛作用，參與了雄性訓練神經痛模型大鼠疼痛敏感性變化的調節。但當濃度逐漸升高時，其鎮痛效果也越加明顯，在灌胃時間為15 min時HWL達到最大值即鎮痛效果最明顯，且具有劑量依賴性。以往研究發現，枳實擁有消除身體胸部和肺部膨腫，疼痛感，痰聚集在肋骨之間，食物積累不順等作用〔11〕。枳實的有效成分主要有揮發油、黃酮苷、生物堿等幾類〔12〕，有實驗證明枳實的揮發油具有一定程度的鎮痛和抗炎癥作用，枳實通降顆粒能顯著促進術后腸梗阻大鼠模型小腸功能的恢復，并具有較好的抗炎作用〔13〕。枳實有效成分包括黃酮苷，揮發油及生物堿等，到底是哪種物質起到了作用，需在以后的實驗加以驗證，此研究結果為臨床中藥鎮痛的研究與開發提供理論依據。