LINC01296在腎透明細胞癌中的表達及臨床意義

董小鑫，楊京可，溫玉婷，趙留存

西安市第九醫(yī)院泌尿外科，陜西 西安 710054

腎細胞癌是起源于腎小管上皮的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，占全部腎癌的90%，具有超過10種亞型，包括腎透明細胞癌、腎乳頭狀細胞癌、腎嫌色細胞癌、腎集合管細胞癌和未分類腎細胞癌等，其自然病史及預后呈多樣性，有的發(fā)展緩慢，有的具有高度侵襲性，給后續(xù)診斷、治療造成很大困擾[1-2]。腎透明細胞癌是腎細胞癌的常見分型，占全部腎細胞癌的75%左右，致死率高，對常規(guī)放化療不敏感，多數(shù)需進行根治性腎切除術，但早期診斷困難，初診時往往已發(fā)生轉移，導致手術預后不佳[3-4]。因此，探索與腎透明細胞癌進展分子機制有關的生物學標志物，客觀評估腫瘤潛在的轉移性，有效提示腫瘤預后信息，對腫瘤的治療有重要幫助。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作為長度超過200個核苷酸的RNA，不具備編碼蛋白質(zhì)功能，但在身體的各個組織器官廣泛表達，參與表觀遺傳調(diào)控，在腫瘤增殖、轉移等許多病理生理過程中發(fā)揮重要作用[5]。LINC01296作為lncRNA一員，與卵巢癌、神經(jīng)母細胞瘤、食管癌、肝癌等多種惡性腫瘤的增殖、侵襲、轉移等進展密切相關，但在腎透明細胞癌的影響尚不明晰[6-9]。本研究將檢測LINC01296 在腎透明細胞癌中的表達水平，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015 年1 月至2018 年1 月西安市第九醫(yī)院泌尿外科收治且行根治性腎切除術或腎部分切除術的80 例腎透明細胞癌患者作為研究對象，收集其手術切除的腎透明細胞癌組織標本及相應的癌旁組織標本(距癌組織至少3 cm)，液氮速凍后置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。組織標本均經(jīng)過病理檢查，患者術前未進行放化療及其他腫瘤相關治療，患者對本研究知情同意并簽署紙面聲明，且術后采用電話、門診等方式完整隨訪3年，截止時間2021年1月或死亡，記錄患者的生存狀況，患者的臨床、隨訪資料均完整。本研究已通過本醫(yī)院倫理委員會的審核并批準。

1.2 試劑與儀器 QuantiTect Reverse Transcription Kit、QuantiTect SYBR Green PCR Kit (貨號：205314、204243)購自德國QIAGEN；Lightcycler 480 ⅡReal-Time PCR 儀為德國Roche 公司產(chǎn)品。LINC01296、GAPDH引物由上海吉凱基因醫(yī)學科技股份有限公司設計并合成。

1.3 腎透明細胞癌組織及癌旁組織中LINC01296檢測 將腎透明細胞癌組織及癌旁組織置于冰上解凍，剪成邊界為0.2 cm的立方塊，加入Trizol試劑研磨粉碎、靜置，抽提其中總RNA?？俁NA 經(jīng)檢測濃度、完整性合格后，采用QuantiTect Reverse Transcription Kit逆轉錄合成cDNA，操作步驟依照試劑盒說明書執(zhí)行。采用QuantiTect SYBR Green PCR Kit 配置PCR反應體系，在Real-Time PCR 儀上進行反應。反應程序：階段1，94℃10 min；階段2，94℃30 s，57℃30 s，72℃45 s，共35個循環(huán)；階段3(溶解曲線)：95℃15 s，60℃30 s，95℃15 s，讀取產(chǎn)物純度達到臨界閾值時對應的循環(huán)數(shù)Ct 值。采用2-ΔΔCt法計算LINC01296 相對表達水平，GAPDH 為內(nèi)參基因。LINC01296 正向引物：5′-TAAGGCTGGAGCTGCTCAAC-3′，逆向引物：5′-AGGATCTGGGCTGCAGTCTA-3′；GAPDH 正 向引 物：5′-GATTTGGTCGTATTGGGCGC-3′，逆 向 引物：5′-GCCTTCTCCATGGTGGTGAA-3′。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS24.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗；采用Kaplan-Meier 生存曲線分析腎透明細胞癌組織中LINC01296表達水平與腎透明細胞癌患者3年預后的關系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 腎透明細胞癌組織及癌旁組織中LINC01296表達水平比較 腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平為1.86±0.19，明顯高于癌旁組織的1.00±0.00，差異有統(tǒng)計學意義(t=40.485，P＜0.05)。

2.2 腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達與腎透明細胞癌患者臨床病理特征的關系 不同年齡、性別、腫瘤大小的腎透明細胞癌患者腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；與TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、中-高分化、無淋巴結轉移、無遠處轉移的腎透明細胞癌患者比較，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結轉移、有遠處轉移的腎透明細胞癌患者腎透明細胞癌組織中LINC01296表達水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 不同臨床病理特征腎透明細胞癌患者腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平比較(±s)

表1 不同臨床病理特征腎透明細胞癌患者腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平比較(±s)

?

2.3 腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平與患者3 年預后的關系 截至隨訪日期，80 例腎透明細胞癌患者隨訪存活5～36 個月，中位隨訪時間為36 個月，隨訪期間死亡28 例，存活52 例，3 年生存率為65%。以腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平的均值為臨界值，將腎透明細胞癌患者分為LINC01296 低 表 達 組45 例，LINC01296 高 表 達 組35 例。LINC01296 低表達組3 年總體生存率為77.78%(35/45)，LINC01296 高表達組3 年總體生存率為48.57%(17/35)；LINC01296 低表達組3 年總體生存率明顯高于LINC01296高表達組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.382，P＜0.05)，見圖1。

圖1 腎透明細胞癌組織中LINC01296表達水平與腎透明細胞癌患者3年預后的關系

3 討論

腎透明細胞癌是腎細胞癌中發(fā)病率、致死率、侵襲轉移率最高的組織亞型，對傳統(tǒng)放化療的抵抗也最強，手術切除是其早中期最主要的治療方式。然而，就診時已發(fā)生擴散、轉移的患者達20%～30%，術后復發(fā)轉移率較高，預后較差，這與腎透明細胞癌復雜的生物學行為有關。目前臨床尚缺乏能有效評估腎透明細胞癌患者預后的指標，導致術后難以進行具有針對性的個體化治療，往往導致術后癌細胞轉移復發(fā)迅速而耽誤治療時機，或因過度治療浪費大量金錢及醫(yī)療資源[10]。因此，尋找新的有效腫瘤標志物反映腎透明細胞癌進展過程，對患者進行預后預測，以便及早采取更有針對性的個體化治療，對提高患者生存率具有重要意義。

lncRNA 是一種長鏈的非編碼RNA，被證實能在包括腎透明細胞癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，且不僅可作為腫瘤的關鍵性調(diào)節(jié)因子，還可作為腫瘤的預后標準物應用于臨床[11-12]。例如，有研究顯示，lncRNA LUCAT1 可通過靶向調(diào)節(jié)miR-199a-5p/HIF-1α表達，促進腎透明細胞癌細胞株786-O 的增殖、遷移過程[13]。lncRNA UCA1 在腎透明細胞癌患者癌組織中高表達，并與Robson分期、TNM分期和組織分化程度密切相關，可影響患者不良預后發(fā)生[14]。lncRNA026 在腎透明細胞癌組織中表達下調(diào)，過表達lncRNA026 能抑制PI3K/Akt 通路活化，顯著降低腎透明細胞癌786-O、ACHN細胞的增殖、侵襲及遷移能力，有望成為治療腎透明細胞癌的潛在藥物作用靶點[15]。以上研究均表明，lncRNA差異表達在腎透明細胞癌進展及癌細胞生物學行為方面發(fā)揮重要作用，有潛力成為腎透明細胞癌的預后、治療靶點，挖掘更多相關的lncRNA具有重要價值。

LINC01296 的編碼基因位于人的14q11.2 染色體上，最早被發(fā)現(xiàn)與胚胎發(fā)育有關，但近年來被許多研究指出其可影響腫瘤細胞的惡性行為，可能在腫瘤診斷、治療、預后方面發(fā)揮價值[6]。例如，張巖等[16]研究表明，LINC01296 與非小細胞肺癌患者的無進展生存期及總生存期獨立相關，有潛力成為其預后的生物標志物。李信等[17]研究發(fā)現(xiàn)，LINC01296 在乳腺癌中高表達，并參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，其高表達與患者的不良預后關系密切，有潛力成為乳腺癌預后預測及治療的靶點。SAEIDI 等[18]通過系統(tǒng)評價和薈萃分析表明，LINC01296 表達與癌癥患者的TNM 分期、腫瘤分期和淋巴結轉移均呈正相關，較短的總生存期與LINC01296 高表達、淋巴結轉移顯著相關，并認為LINC01296 可能是癌癥患者的潛在生物標志物。本研究發(fā)現(xiàn)，腎透明細胞癌組織中LINC01296表達水平較癌旁組織顯著升高，表明LINC01296 在腎透明細胞癌中差異表達，可能參與腎透明細胞癌進展。進一步分析發(fā)現(xiàn)，LINC01296在不同TNM分期、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移的腎透明細胞癌患者癌組織中表達差異顯著，而在不同年齡、性別、腫瘤大小的患者癌組織中表達無顯著差異，表明LINC01296表達可一定程度反映腎透明細胞癌患者的臨床分期、分化程度、淋巴結轉移及遠處轉移情況，且可能參與這些進展。此外，隨訪3 年結果顯示80例腎透明細胞癌患者存活52 例(3 年生存率為65%)，以腎透明細胞癌組織中LINC01296 表達水平均值為界限將患者分高、低表達組，通過Kaplan-Meier 生存曲線分析發(fā)現(xiàn)，LINC01296低表達組的3年總體生存率高于LINC01296高表達組，表明LINC01296表達與腎透明細胞癌患者3年預后情況相關，有潛力成為腎透明細胞癌預后的生物標志物。

綜上所述，LINC01296 在腎透明細胞癌患者癌組織中高表達，其表達與患者的臨床分期、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移及3年預后情況關系密切，有潛力成為反映腎透明細胞癌患者臨床病理特征及3年預后情況的生物標志物。