經典名方豬苓湯基準樣品質量評價方法研究

王延濤，孔令梅, ，程 杰，張 淹, ，王春艷，王中超, ，張 燕, ，馬立平, ，齊曉丹*，劉 艷

1.東阿阿膠股份有限公司 國家膠類中藥工程技術研究中心，山東 聊城 252200

2.山東省膠類中藥技術創新中心，山東 聊城 252200

3.山東省膠類中藥研究與開發重點實驗室，山東 聊城 252200

4.中國中醫科學院 中藥研究所，北京 100700

豬苓湯出自東漢張仲景所著《傷寒論》，是國家中醫藥管理局發布的《古代經典名方目錄》的第9方[1]，由豬苓、茯苓、澤瀉、滑石、阿膠5味中藥組成，以利水為主，兼以養陰清熱，主治水熱互結而兼陰虛之證[2]。方中以豬苓為君藥，取其歸腎、膀胱經，專以淡滲利水；臣藥澤瀉、茯苓性味甘淡，益豬苓利水滲濕之力，澤瀉性寒兼可泄熱，茯苓尚可健脾以助運濕；佐入滑石之甘寒，利水、清熱兩彰其功；阿膠滋陰潤燥，既益已傷之陰，又防諸藥滲利重傷陰血。五藥合方，利水滲濕為主，清熱養陰為輔，體現了利水而不傷陰、滋陰而不礙濕的配伍特點。在現代藥理學研究及臨床應用中，發現豬苓湯主要應用于改善腎功能、抗炎、利尿等[3-7]。除傳統的功能主治外，豬苓湯還可以加減其他藥味或方劑治療腎炎、紅斑狼瘡性腎炎、心律失常、肝硬化等多種疾病[8-16]。可見該方應用價值廣泛，具有重要開發意義。

對于經典名方的開發目前國家是推廣和鼓勵的，近年逐漸發布了一系列完善詳盡的法規體系[17-19]。“經典名方基準樣品”是經典名方開發的關鍵一環，是經典名方復方制劑生產的化學基準和生物效應基準[20]，是衡量制劑與中醫臨床所使用的藥用物質是否一致的標準，因此，基準樣品的質量標準尤其重要。但是目前關于豬苓湯的報道主要集中于臨床用藥研究及藥理研究方面，質量標準相關報道較少。為了在經典名方開發中有力支撐豬苓湯的工藝確定和標準制定，本研究特開展豬苓湯基準樣品的質量研究，為其復方制劑及其他經典名方的開發應用提供參考。

1 儀器與材料

島津LC-20A型高效液相色譜儀，LC-20AT串聯雙柱塞泵，DGU-20A在線脫氣系統，SIL-20A自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD-M20A二極管陣列檢測器，日本島津公司；KQ-250DB型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；BGZ-70鼓風式干燥箱，上海博訊實業有限公司醫療設備廠；XP105型十萬分之一電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；Phenomenex Gemini C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；ZF-1型三用紫外分析儀，驥輝分析儀器（北京）有限公司；DK-98-11A恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；硅膠G薄層板，青島海洋化工廠分廠，批號20171029。

對照品L-羥脯氨酸（批號111578-201602）、甘氨酸（批號140689-201605）、丙氨酸（批號140680-201604）、脯氨酸（批號140677-201507）、23-乙酰澤瀉醇B（批號111846-201705），質量分數依次為99.9%、100%、100%、99.9%、99.7%，購自中國食品藥品檢定研究院；對照品澤瀉醇A（批號BCY-000924）、澤瀉醇B（批號BCTG-0915），購自江西佰草源生物科技有限公司，質量分數均大于95%；茯苓對照藥材（批號121117-201509）、澤瀉對照藥材（批號121081-201406）購于中國食品藥品檢定研究院；豬苓（批號180504004）購于北京仟草中藥飲片有限公司。異硫氰酸苯酯（PITC）購自MACKLN公司；乙腈、磷酸，美國Fisher Chemical公司，色譜純；水為娃哈哈純凈水，其他試劑為分析純。

本研究中所用飲片經中國中醫科學院中藥研究所何希榮研究員鑒定，豬苓為多孔菌科樹花屬真菌豬苓Polyporus umbellatus(Pers.) Fries的菌核；茯苓為多孔菌科臥孔屬真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核；澤瀉為澤瀉科澤瀉屬植物東方澤瀉Alisma orientale(Sam.) Juzep.的干燥塊莖；阿膠為馬科馬屬動物驢Equus asinusL.的干燥皮或鮮皮經煎煮、濃縮制成的固體膠；滑石為硅酸鹽類礦物滑石族滑石，主含含水硅酸鎂［Mg3(Si4O10)(OH)2］。

15批次豬苓湯基準樣品所用飲片批號及產地信息見表1，所有飲片均有相關質量標準檢測報告，檢查結果均符合《中國藥典》2020年版要求。

表1 15批豬苓湯飲片信息Table 1 Information of 15 batches of Zhuling Decoction

2 方法與結果

2.1 豬苓湯煎煮方法及樣品制備

豬苓湯基準樣品對應實物制備過程中，采用Excel軟件中的RAND程序，對每個藥味的15批飲片進行隨機排列，形成不同批次飲片的組合（S1～S15）。

采用陶瓷煎藥壺加蓋煎煮，武火（功率2200 W）煮沸，文火（功率500 W）保持微沸。取豬苓、茯苓、澤瀉、滑石各13.80 g，置2 L煎藥壺中，加水800 mL，加蓋煮沸（加熱約5 min），保持微沸45 min，濾過，得濾液；趁熱加入阿膠烊化，得豬苓湯湯劑；60 ℃減壓濃縮30 min，濃縮液冷凍干燥24 h，得豬苓湯基準樣品。

按照同樣方法制備各單味藥樣品及缺阿膠、澤瀉、茯苓、豬苓的陰性樣品。

2.2 特征圖譜方法建立

2.2.1 供試品溶液的制備 按照“2.1”項下方法制備豬苓湯基準樣品、單味藥樣品和各陰性樣品。精密稱定各樣品凍干粉1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加丙酮50 mL，密塞，超聲處理（功率800 W、頻率40 kHz）30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加80%乙腈溶解，定容至5 mL，濾過，即得供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱定澤瀉醇A、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B，加乙腈溶解，制成質量濃度為澤瀉醇A 40 μg/mL、澤瀉醇B 25 μg/mL、23-乙酰澤瀉醇B 23 μg/mL的混合對照品溶液。

2.2.3 色譜條件 Phenomenex Gemini C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～15 min，55%～70%乙腈；15～30 min，70%～85%乙腈；30～35 min，85%～95%乙腈；35～45 min，95%乙腈；檢測波長208 nm；柱溫30 ℃；體積流量1.0 mL/min；進樣量10 μL。

2.2.4 精密度考察 取同一份豬苓湯基準樣品供試品溶液（批號20181112），按照“2.2.3”項下方法重復進樣6次，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果如表2所示，RSD≤5.0%，表明儀器精密度良好。

表2 特征圖譜方法學考察 (n = 6)Table 2 Methodological investigation of characteristic atlas(n = 6)

2.2.5 重復性考察 平行制備6份豬苓湯基準樣品的供試品溶液（批號20181112），按照“2.2.3”項下方法進樣測定，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果如表2所示，RSD≤5.0%，該方法重復性合格。

2.2.6 穩定性考察 取同一份豬苓湯基準樣品的供試品溶液（批號20181112），分別于制備后0、2、4、8、10、15、20、24 h，按“2.2.3”項下方法進樣測定，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果如表2所示，RSD≤5.0%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定，符合要求。

2.2.7 特征圖譜的建立與相似度分析 取15批豬苓湯基準樣品的供試品溶液，按“2.2.3”項下方法測定，記錄50 min色譜圖。用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012版）進行評價，對15批基準樣品進行色譜圖疊加得圖1-A，并生成對照特征圖譜，見圖1-B。將特征圖譜進行特征峰歸屬，對應圖譜見圖2、3，全方共確定8個共有峰，經對照品、豬苓湯樣品、單味藥樣品、各單味藥陰性樣品相關圖譜色譜峰比對，峰1～3號峰來自于澤瀉，分別為澤瀉醇A、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B；4～8號峰來自于阿膠，通過與相關文獻資料對比，均為阿膠中的脂溶性成分[21]。

圖1 15批豬苓湯基準樣品的HPLC指紋圖譜 (A) 和特征圖譜 (B)Fig.1 HPLC fingerprint of 15 batches of material benchmarks of Zhuling Decoction (A) and its characteristic chromatogram (B)

圖2 豬苓湯基準樣品與單味藥對照圖譜Fig.2 Reference spectrum of substance benchmark of Zhuling Decoction and sing-flavor drugs

圖3 豬苓湯基準樣品與各單味藥陰性樣品對照圖譜Fig.3 Reference spectrum of substance benchmark of Zhuling Decoction and negative samples of each single-flavor drugs

以2號峰為參照峰，計算其他峰的相對保留時間和相對峰面積；計算相似度，計算參數：以S1為參照圖譜，采用中位數法，時間窗寬度0.1，15批豬苓湯基準樣品對應實物（S1～S15）特征圖譜與其對照圖譜的相似度分別為0.989、0.985、0.985、0.971、0.986、0.970、0.997、0.998、0.968、0.988、0.995、0.990、0.995、0.995、0.990，均大于0.95，表明豬苓湯基準樣品的制備工藝穩定，不同批次間的差異較小。

2.3 基準樣品含量測定方法建立

本研究以L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸為指標成分，建立了豬苓湯基準樣品的含量測定方法。

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱定L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸適量，加0.1 mol/L鹽酸溶液制成質量濃度為L-羥脯氨酸80 μg/mL、甘氨酸160 μg/mL、丙氨酸70 μg/mL、脯氨酸120 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取豬苓湯基準樣品0.2 g，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液20 mL，超聲處理（功率500 W、頻率40 kHz）30 min，放冷后加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻。精密量取2 mL，置5 mL安瓿中，加鹽酸2 mL，150 ℃水解1 h，放冷，轉移至蒸發皿中，蒸干，殘渣加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解，轉移至25 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3.3 衍生化 分別精密吸取上述混合對照品溶液和供試品溶液各1 mL，置20 mL具塞試管中，精密加入0.1 mol/L PITC的乙腈溶液0.5 mL，1 mol/L三乙胺乙腈溶液0.5 mL，搖勻，室溫放置1 h，精密加入50%乙腈3 mL，搖勻。精密加入正已烷3 mL，振搖，靜置10 min，取下層溶液，濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 色譜條件 色譜柱為Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.1 mol/L醋酸鈉水溶液（用醋酸調節pH值至6.5）（7∶93）為流動相A，乙腈-水（4∶1）為流動相B，梯度洗脫：0～11.0 min，0～7% B；11.0～13.9 min，7%～12%B；13.9～14.0 min，12%～15% B；14.0～29.0 min，15%～34% B；29.0～30.0 min，34%～100% B；體積流量0.8 mL/min；檢測波長254 nm；柱溫為43 ℃；理論塔板數按L-羥脯氨酸峰計算應不低于4000，所得HPLC色譜圖如圖4所示。

圖4 混合對照品 (A)、豬苓湯樣品 (B) 和缺阿膠陰性樣品(C) 的HPLC圖Fig.4 HPLC of reference substances (A), Zhuling Decoction sample (B) and negative sample without Ejiao (C)

2.3.5 線性關系考察 精密稱取L-羥脯氨酸10.52 mg、甘氨酸18.57 mg、丙氨酸13.84 mg、脯氨酸9.14 mg，分別置于10 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，精密量取液L-羥脯氨酸1.6 mL、甘氨酸1.8 mL、丙氨酸1.0 mL、脯氨酸2.6 mL置于同一10 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸質量濃度分別為168.32、334.26、138.40、237.64μg/mL的混合對照品溶液。

精密吸取混合對照品溶液，分別稀釋2、4、8、16、32倍，取混合對照品溶液及稀釋后混合對照品溶液各1 mL，按“2.3.3”項方法衍生化后按“2.3.4”項下色譜條件測定，測得峰面積。分別以L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得線性回歸方程分別為L-羥脯氨酸Y＝1 491 243.32X+15 954.32，r＝0.999 9，線性范圍26.30～841.60 ng；甘氨酸Y＝2 287 191.79X-28 656.61，r＝0.999 9，線性范圍52.23～1 671.30 ng；丙氨酸Y＝1 772 915.93X-11 323.89，r＝0.999 9，線性范圍21.62～692.00 ng；脯氨酸Y＝1 669 948.55X+10 809.09，r＝0.999 9，線性范圍37.13～1 188.20 ng。結果表明，4種氨基酸在各自線性范圍內線性關系良好。

2.3.6 精密度考察 精密量取“2.3.5”項中未稀釋的混合對照品溶液，按“2.3.4”項下色譜條件連續進樣6次，計算4種氨基酸峰面積的RSD，結果L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸峰面積的RSD分別為0.15%、0.12%、0.10%、0.15%，表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩定性考察 精密量取同一豬苓湯基準樣品供試品溶液（批號20181112），分別于制備后0、2、6、10、15、20、24 h按“2.3.4”項下色譜條件進樣測定，計算供試品溶液中L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的峰面積的RSD，結果L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸峰面積的RSD分別為0.18%、0.13%、1.03%、0.13%，表明供試品溶液24 h內穩定性良好。

2.3.8 重復性考察 精密稱取豬苓湯基準樣品（批號20181112），平行制備6份豬苓湯基準樣品供試品溶液，按“2.3.4”項下色譜條件進樣，計算4種氨基酸質量分數的RSD，結果L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸質量分數的RSD分別為1.22%、1.06%、0.99%、1.39%，表明該方法重復性良好。

2.3.9 加樣回收率考察 精密稱取已知L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸含量的豬苓湯基準樣品（批號20181112）0.1 g，共6份，分別置25 mL量瓶中，按照比例加入對照品溶液（對照品溶液質量濃度：L-羥脯氨酸2.772 4 mg/mL、甘氨酸4.988 8 mg/mL、丙氨酸1.966 8 mg/mL、脯氨酸2.896 0 mg/mL）各3.0 mL，超聲10 min，放冷，加0.1 mol/L鹽酸至刻度，搖勻。精密量取2 mL，按照“2.3.2”“2.3.3”項方法制備供試品溶液，按“2.3.4”項下色譜條件測定，計算各氨基酸的回收率。結果顯示，L-羥脯氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸的平均加樣回收率分別為97.7%、97.3%、98.7%、98.0%，RSD分別為2.58%、1.55%、1.42%、1.80%；4種氨基酸加樣回收率均符合95%～102%的要求，該方法準確度良好。

2.3.10 有效成分轉移率 按照公式計算有效成分轉移率，結果如表3所示，L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸平均轉移率分別為90.89%、90.25%、90.29%、91.28%，均未出現離散數據（均值的70%～130%）。根據15批基準樣品檢測結果，確定豬苓湯中L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的轉移率分別為63.62%～118.20%、63.18%～117.30%、63.20%～117.40%、63.90%～118.70%。

轉移率＝wm/WM

w為基準樣品中有效成分的質量分數，m為基準樣品樣品量，W為飲片中有效成分的質量分數，M為飲片投料量

2.3.11 水分 取15批豬苓湯基準樣品的供試品，按照2020年版《中國藥典》四部，通則0832第二法則測定水分，結果如表3所示，15批基準樣品的水分為2.64%～4.84%。

表3 豬苓湯飲片基準樣品的轉移率及干膏率Table 3 Transfer rate and paste rate of benchmark samples of Zhuling Decoction

2.3.12 干膏率 按照公式（2）計算干膏率，結果如表3所示，15批基準樣品平均干膏率為21.53%，均未出現離散數據（均值90%～110%）。根據15批基準樣品檢測結果，確定豬苓湯干膏率為19.37%～23.68%。

干膏率＝m×(1-水分)/M

m為基準樣品的質量，M為飲片投料量

2.4 薄層色譜法研究

豬苓、茯苓兩藥味因存在共同成分，單獨鑒別時各自陰性均有影響，因此采用共同鑒別。澤瀉鑒別結果顯示陰性無干擾，故澤瀉單獨鑒別。分別處理按照“2.1”項下方法制備的豬苓湯基準樣品及各藥味陰性樣品，進行薄層鑒別研究。

2.4.1 豬苓、茯苓鑒別 稱取2.0 g樣品，加乙醚50 mL，超聲處理10 min（功率800 W、頻率40 kHz），濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。另取茯苓對照藥材、豬苓對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。分別吸取對照藥材溶液5 μL，供試品溶液30 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯-甲酸（8∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，置365 nm下檢視。供試品溶液在與對照藥材溶液相同位置顯相同顏色斑點。分別處理豬苓藥材、茯苓對照藥材、豬苓湯基準樣品及缺豬苓、茯苓的豬苓湯樣品。結果顯示，豬苓湯基準樣品中在與藥材溶液相同位置顯相同顏色斑點，缺豬苓、茯苓的豬苓湯樣品無干擾，見圖5。

2.4.2 澤瀉鑒別 稱取2.0 g樣品，加甲醇50 mL，超聲處理30 min（功率800 W、頻率40 kHz），濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。另取澤瀉對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。分別吸取對照藥材溶液2 μL，供試品溶液5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-醋酸乙酯（1∶1）為展開劑，展開，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，105 ℃加熱至斑點清晰。供試品溶液在對照藥材溶液相同位置呈現相同顏色斑點。分別處理澤瀉對照藥材、豬苓湯基準樣品及缺澤瀉豬苓湯樣品。結果顯示，豬苓湯基準樣品中在與對照藥材溶液相同位置顯相同顏色斑點，缺澤瀉豬苓湯樣品無干擾，見圖5。

2.4.3 薄層色譜測鑒定結果 取15批豬苓湯基準樣品，按照豬苓茯苓鑒別、澤瀉鑒別方法檢測。結果如圖5所示，15批豬苓湯基準樣品均可見與對照藥材一致的斑點且陰性無干擾。

圖5 15批豬苓湯基準樣品的薄層色譜Fig.5 Thin-layer chromatograms of 15 batches of Zhuling Decoction benchmark samples

3 討論

3.1 基準樣品處方劑量和制法

豬苓湯來源于漢代張仲景《傷寒論》，原方制法描述為：“豬苓（去皮）、茯苓、澤瀉、阿膠、滑石（碎）各一兩。上五味，以水四升，先煮四味，取二升，去滓，內阿膠烊消，溫服七合，日三服”。基準樣品制備方法應與傳統的煎煮工藝基本相同[22]，需要將古方中劑量折算成現代劑量以便于經典名方的開發研究。對于經典名方中劑量的折算及應用，需要參考前人考證的量制，也要關注中醫理論指導和臨床實踐結果。多名專家學者曾對漢代劑量進行考證，得出1兩可折算成13.8、15.6、7.0 g等結果[23-24]。柯雪帆等[25]和郝萬山[26]通過測定出土的漢代衡器大司農銅權得出漢代1兩折合15.6 g左右、1斤為250 g，但這個研究結論缺乏更多佐證資料，且大司農銅權的標稱值不確定。后經大量文獻資料查閱整理，發現國家計量總局主編《中國古代度量衡圖集》中收載東漢百一十斤權重23 940 g，折合1斤217.63 g，1兩為13.60 g[27]。邱光明從考古實物佐證、史料記載等全面、綜合、真實的考證東漢度量衡史，得出東漢與今天的度量衡單位折算為漢代1斤為220 g，1兩為13.8 g。經反復考證和研究，確定漢代“一兩”折合現代劑量為13.8 g。

為考察“1兩折合15.6 g”實驗研究數據在“1兩折合13.8 g”折算標準中的適用性，比較了以15.6 g與13.8 g為折算標準所制備樣品（S15.6、S13.8）的出膏量、干膏率、含量測定指標。結果見表4，以13.8 g和15.6 g折算標準所制得樣品干膏率和含量指標無明顯差異（RSD≤5%）。

表4 劑量對比研究Table 4 Dose comparison study

經搜集兩漢時的量器實測容量折算，以“大司農”器的實測數值為依據，折合每升單位量值在196～204 mL，用算數平均法求得其單位量值為199.4 mL，扣除因制造不精而產生的示值誤差，每升厘定為200 mL[28]。

綜上，豬苓湯劑量“一兩折合13.8 g”“一升折合200 mL”，本研究確定豬苓湯中各藥材用量為13.8 g，總方69 g，每服23 g。豬苓湯制法為用水800 mL，先加入豬苓、茯苓、澤瀉、滑石4味藥煎煮至400 mL，去掉藥渣，再加入阿膠烊化溶解，每次溫服約140 mL，3次/d。

3.2 含量測定成分選擇

本實驗研究的豬苓湯基準樣品對應實物（凍干粉）為經考察的傳統煎煮工藝制備而成湯劑經濃縮干燥后的實物[29]，基準樣品的質量標準選擇參考《中國藥典》成藥中含量測定質量指標的選擇要求，即指標成分穩定且含量不宜過低。因此，本實驗以藥味在豬苓湯組方中的君、臣、佐、使地位，首先考察了豬苓中麥角甾醇和澤瀉中的23-乙酰澤瀉醇B。實驗結果顯示，在豬苓湯樣品中未檢測出麥角甾醇，而23-乙酰澤瀉醇B含量低于萬分之一，檢測誤差大。推測原因是麥角甾醇和23-乙酰澤瀉醇B極性小，水提效果較差。因此，麥角甾醇、23-乙酰澤瀉醇B均不推薦為定量指標的成分。在豬苓湯基準樣品中未發現來自于茯苓的定量成分，最終根據指標的穩定性和含量，確定以阿膠中的L-羥脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸為指標成分，建立豬苓湯基準樣品的含量測定方法。鑒于《中國藥典》2020年版中澤瀉增加了23-乙酰澤瀉醇C、阿膠增加了特征多肽的含量檢測，后續本研究會考慮進一步對豬苓湯中的植物藥成分、特征多肽含量指標進行深入研究。

3.3 檢測項目確定

為確保豬苓湯中各藥味都能實現質控，達到國家部門相關規定中“經典名方應加強專屬性鑒別和多成份、整體質量控制”的要求[17]，同時也具備確保質量標準的簡單實用性，本研究將性狀、鑒別、水分檢查、特征圖譜及含量測定共同作為豬苓湯基準樣品質量屬性的檢測項目。具體檢測項目內容如表5所示。

表5 豬苓湯基準樣品檢測項目Table 5 Test items of benchmark samples of Zhuling Decoction

3.4 檢測結果分析

本研究對豬苓湯基準樣品建立了薄層鑒別方法、HPLC法特征圖譜和指標成分含量測定方法。建立的薄層色譜方法實現了豬苓、茯苓和澤瀉等藥味的鑒別；通過HPLC色譜法建立特征圖譜，確定了8個共有峰，并指認了其中3個峰，以2號峰澤瀉醇B為參照峰，15批豬苓湯基準樣品特征圖譜與對照特征圖譜的相似度均良好。后續將探索更加準確的方法增加各藥味的特征信息；通過HPLC法建立指標成分含量測定方法，15批基準樣品指標成分平均轉移率均在90%以上。

同時，對豬苓湯的干膏率及水分進行了考察并確定了范圍。研究結果表明，含量測定、干膏率、水分均未現離散數據（平均值的70%～130%以外），表明制備的15批次豬苓湯基準物質對應實物質量基本穩定。

4 結論

豬苓湯用藥精煉，組方嚴謹，本實驗研究了豬苓湯基準樣品對應實物的制備工藝，并制定了較科學合理的質量標準。建立了簡便、可行、重復性良好的特征圖譜，可以較全面反映豬苓湯的特征成分信息。通過干膏率、指標成分含量、轉移率等的測定，對豬苓湯基準樣品進行了質量屬性研究，為豬苓湯質量標準制定提供實驗數據。同時，建立了豬苓、茯苓、澤瀉的薄層色譜鑒別方法，實現了藥味的鑒別要求。

本研究目前除阿膠外未制定其他藥味含量測定方法，后面將持續深入研究其他藥味的含量測定方法，以期使豬苓湯顆粒的質量標準體系更加全面；在豬苓湯顆粒的后續開發過程中將嘗試采用混批投料的方式，以期減小由于批次間差異所導致的質量差異。綜上，本研究對經典名方豬苓湯基準樣品初步建立了質量評價方法，以期為經典名方豬苓湯制劑的開發及質量控制提供借鑒。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突