UPLC-MS/MS法測定食品中非法添加調節 胃腸功能類化合物

◎ 胡紫艷，李 丹，史 達，蔣小文，金 鑫

(南京市食品藥品監督檢驗院，江蘇 南京 210000)

近年來市面上宣稱改善胃腸道功能的食品種類和數量日益龐大。伴隨著龐大的市場需求以及追求快速顯效的目的，使得此類食品存在較高的非法添加化學藥物風險，目前已有較多文獻和報道指出在保健食品和中成藥中發現非法添加西咪替丁、雷尼替丁等化學藥物[1-2]。非法添加的化學藥物生產質量得不到保障，用法用量難以控制，消費者在不知情的情況下攝入，存在重復用藥、配伍禁忌、毒副作用等諸多安全隱患，可能對服用者身體帶來損害，嚴重情況下甚至誘發死亡。雷尼替丁因含有不可接受劑量的2A類致癌物N-亞硝基二甲基胺，在美國和歐盟等多個國家已撤市[3]。

非法添加化學藥物的趨勢是多種類化學藥物混合添加[4]。由于胃腸功能紊亂會引發便秘，臨床上多采用西咪替丁、法莫替丁、雷尼替丁、奧美拉唑和莫沙必利等聯合用藥方式進行雙向調節，因此改善胃腸道功能的食品中存在較高混合添加的風險[5-7]。含有多種非法添加化學藥物的食品對人體的危害更大，且難以風險識別和危害溯源。而目前針對此類食品非法添加的相關檢驗標準并不完善，也缺乏快速檢測的方法體系，不利于監管部門精準、快速地查處。因此，迫切需要對調理胃腸功能和有助于潤腸通便類的食品建立檢測上述風險較高的常見5種物質的檢測標準，并配套建立相關非法添加物質快速、精準的檢測方法體系，以填補目前的監管盲區。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

Agilent 1290-G6495液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀（配備ESI源，Agilent公司）；ME204電子天平（十萬分之一，METTLER TOLEDO公司）；AllegraX-30R高速離心機（BECKMAN COULTER公司）；Milli-Q超純水系統（Millipore公司）。

1.2 材料與試劑

標準品枸櫞酸莫沙必利（批號：100656-201903）、 西咪替丁（批號：100158-201406）、法莫替丁（批號：100305-201304）、鹽酸雷尼替丁（批號：100163-201607）和奧美拉唑（批號：100367-201706）均購于中國食品藥品檢定研究院。甲醇、甲酸為色譜純，購自德國Merck公司；實驗用水為超純水。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18RRHD（2.1 mm× 100 mm，1.8 μm）；進樣體積：2 μL；柱溫：30 ℃；流動相A：0.1%甲酸水；流動相B：甲醇；流速： 0.3 mL·min-1；梯度洗脫程序：0～5.0 min，8% B；5.0～6.0 min，8%→90% B；6.0～8.0 min，90% B；8～9 min，90%→8% B；9～15 min，8% B。

1.3.2 質譜條件

離子化方式：電噴霧電離（ESI+）；多反應監測（Multiple Reaction Monitoring；MRM）模式；霧化氣：N2；干燥氣流速：8 L·min-1；噴霧電壓：500 V；氣流溫度：350 ℃；毛細管電壓：3 500 V（+）；鞘氣流速：11 L·min-1；鞘氣溫度：250 ℃。具體質譜參數見 表1。

表1 5種標準物質質譜參數表

1.3.3 標準溶液的制備

取莫沙必利、西咪替丁、法莫替丁、雷尼替丁和奧美拉唑標準品適量，分別用甲醇制成濃度均為 100 μg·mL-1的標準貯備液。準確吸取各貯備液1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，制成濃度為100 μg·mL-1的混合標準中間液。再準確吸取混合標準中間工作液適量，用乙腈-水溶液（9∶1）配 成 各 化 合 物 濃 度 依 次 為1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1，作為系列混合標準工作溶液。

1.3.4 樣品制備

（1）固體試樣。取固體試樣混勻，研細，精密稱取1.0 g粉末，置50 mL具塞離心管中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL，渦旋1 min，超聲提取10 min， 于8 000 r·min-1離心5 min。上清液轉移至50 mL容量瓶中，用乙腈-水溶液（9∶1）稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，取濾液，根據實際濃度適當稀釋至線性范圍內。

（2）液體試樣。準確吸取樣品1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL，超聲提取10 min，用乙腈-水溶液（9∶1）稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，取濾液，根據實際濃度適當稀釋至線性范圍內。

2 結果與分析

2.1 方法學考察結果

2.1.1 專屬性

選擇市場常見的調理胃腸功能的片劑、固體粉末以及口服液為空白基質，按樣品處理方法得到空白基質溶液，進樣分析，結果均未檢出5種化合物。分別取空白基質溶液，加入混合標準中間工作液適量，作為模擬供試液進行測定，結果均能檢出5種化合物，表明空白基質不干擾檢測。

2.1.2 線性

取1.3.3項下的系列混合標準工作液進行分析。以化合物的峰面積（Y）為縱坐標，對應的質量濃度 （X，ng·mL-1）為橫坐標，繪制標準曲線。由表2可知，5種化合物在規定的范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.995。提取離子流色譜代表圖見圖1。

2.1.3 精密度

取未檢出的樣品作為空白基質，加適量混合標準中間液，配成濃度為10 ng·mL-1的樣品溶液，按上述條件重復測定6次。由表2可知，5種目標化合物的相對標準偏差（n=6）為1.52%～3.89%，說明本方法精密度良好。

2.1.4 加樣回收和重復性

以不含目標分析物的片劑、固體粉末和口服溶液作為空白樣品，分別添加標準曲線內最低、中、最高3個濃度水平，每個濃度平行制備3份樣品。按1.3.4樣品制備方法處理并進行測定。由表2可知，回收率均在82.3%～108.9%，重復性的RSD＜7.0%（n=9），均符合要求。

2.1.5 檢出限

取空白基質固體樣品1.0 g、液體樣品1.0 mL，加低濃度的混合標準工作液，按樣品制備方法制備檢出限溶液。以信噪比S/N≥3計算檢出限。5種化合物的線性范圍、回歸方程、相關系數、精密度、回收率和檢出限等參數見表2。

表2 檢測5種化合物的參數表

2.1.6 基質效應

取調理胃腸功能的片劑、固體粉末、口服液3種類型的陰性樣品進行等質量混合作為空白基質，精密稱取空白基質樣品1 g，加入100 ng·mL-1的混合標準工作溶液5 mL到空白基質中，按1.3.4樣品制備方法處理得到10 ng·mL-1的混合基質加標溶液，另取 10 ng·mL-1的混合標準工作液，同時上機測定。計算 2種溶液中化合物的響應值百分比來考察基質效應。由表2可知，5種化合物的基質效應均在85.4%～110.8%，表明3種常見類型的基質樣品對 5種化合物的基質效應影響較小，在可接受范圍內。

2.2 實驗條件優化

2.2.1 提取溶劑的選擇

本研究以調理胃腸功能的片劑、固體粉末以及口服液等典型基質作為實驗對象，分別比較了甲醇、乙腈、甲醇-水和乙腈-水的提取效果。結果發現，乙腈的提取效率優于甲醇，在提取溶劑中加入一定量的水，使提取溶劑對樣品的滲透性加強，增大有機溶劑與樣品的接觸面積，從而提高提取效率，因此選用乙腈-水溶液（9∶1）作為提取溶劑。

2.2.2 提取時間的考察

稱取空白樣品1.0 g，加適量混合標準溶液作為模擬樣品，置50 mL離心管中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL后，分別超聲5 min、10 min、15 min和20 min，8 000 r·min-1離心5 min，澄清液經0.22 μm濾膜過濾，取濾液進行分析測定。

由圖2可知，各待測化合物的提取率在前10 min 內與超聲時間成正比，10 min后繼續延長超聲時間，提取率呈下降趨勢。因此，選用超聲10 min對樣品進行提取。

3 結論

食品中非法添加化學藥物會對服用者的身體健康和生命安全造成嚴重威脅，隨著現代生活節奏的加快所造成的飲食不規律及飲食結構的不合理，市場上調節胃腸功能的食品（保健食品）受到越來越多人的青睞。但目前監管中尚缺乏對此類食品中是否非法添加治療胃腸疾病的化學藥物的檢測方法。本研究建立的方法樣品前處理簡單、快速，靈敏度度高，適用于食品中非法添加調節胃腸功能類化合物的篩查和測定。