酸浸高壓法對靈芝子實體有效成分靈芝多糖的影響*

丁鴻燕，呂思敏，劉翠娟，吳 鐵,，戚 怡

(1 廣東潤和生物科技有限公司，廣東 廣州 510800；2 廣東醫科大學，廣東 東莞 523808)

靈芝是多孔菌科真菌靈芝的子實體，具有補氣安神、止咳平喘、延年益壽的功效，常用于眩暈不眠、心悸氣短、神經衰弱、虛勞咳喘。靈芝子實體是一傘形的菇狀物，呈紫紅色或棕紅色，其質地幼時為肉質，成熟變干后為木栓質。子實體由菌蓋(菌傘)和菌柄構成。2005年出版《中國藥典》，收載赤芝和紫芝為靈芝入藥品種[1]。靈芝屬的化學成分較為復雜，其中有效成份可分為十大類，包括靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、16種氨基酸(其中含有七種人體必需氨基酸)、蛋白質、甾類、甘露醇、香豆精苷、生物堿、有機酸(主含延胡索酸)，以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等[2-3]。現代研究證明靈芝多糖是靈芝的主要有效成分之一，具有抗腫瘤[4-5]、免疫調節[6-7]、降血糖[8]、抗氧化[9]、降血脂與抗衰老作用。低、中劑量的靈芝多糖對小鼠肝腎功能無明顯影響[10-11]；可逆轉2型糖尿病所引起的腸道微生物菌群和代謝紊亂[12]。靈芝多糖的種類很多，約有200多種，從靈芝的子實體、孢子粉、發酵液中都能夠提取出靈芝多糖，針對提取部位和多糖種類的不同有著不同的提取方式。靈芝多糖的提取方式有：傳統提取法、復合酶法提取[13]、快速溶劑萃取法[14]、超臨界流體輔助提取、超濾法、微波輔助提取[15]、超聲波提取、超聲波-微波協同萃取。與傳統工藝相比，此方式提取時間較短，提取效率也有所增加同時能夠節約一定的水資源。綜上，不同的提取方式都有其優缺點，要根據提取原料、條件、提取目的等綜合因素考慮。因此，對于靈芝多糖的提取不局限于一種方式而是多種方式協同作用最終得到目標產物。

靈芝子實體具有致密的細胞壁結構，高壓、熱水、稀酸等可提高水對細胞穿透能力及細胞破壞力，可加快多糖的釋放[16]，本實驗研究靈芝子實體高壓后加熱回流提取靈芝多糖的提取工藝，先把靈芝子實體用粉碎機粉碎，然后將粉碎后的靈芝子實體用鹽酸浸泡，然后采用高壓破壁處理，利用高壓對細胞的破碎作用，促進靈芝多糖從胞內溶出。按照藥典法測定靈芝子實體中靈芝多糖的含量方法，結果如下。

1 實 驗

1.1 材料與儀器

樣品T1-5為實驗室用莞香木栽培的靈芝子實體(莞香靈芝，專利申請號：201610320833.5)。FR223CN電子天平；粉碎機；高壓滅菌鍋；紫外-可見分光光度計；水浴鍋；旋轉蒸發儀；無水乙醇、硫酸、無水葡萄糖對照品、鹽酸、蒽酮。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品溶液的母液制備

取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL含0.12 mg的溶液，即得標準品母液。

1.2.2 標準曲線制備

精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL，分別置10 mL具塞試管中，各加至2.0 mL，迅速精密加入硫酸蔥酮溶液(精密稱取蔥酮0.1 g，加硫酸100 mL使溶解，搖勻)6 mL，立即搖勻，放置15 min后，立即置冰浴中冷卻15 min，取出，以相應的試劑為空白同步顯色操作，照紫外-可見分光光度法，在625 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.2.3 供試品溶液的制備前準備

取經粉碎機粉碎的靈芝子實體赤靈芝、紫靈芝，各分為兩個實驗組，每組10 g，1號為赤靈芝子實體對照組，2號為赤靈芝子實體加鹽酸浸泡高壓實驗組，3號為紫靈芝子實體對照組，4號為紫靈芝子實體加鹽酸浸泡高壓實驗組，其中：1和3號不加鹽酸浸泡不經高壓，2和4號用40 mL的1%鹽酸浸泡2 h，后放進高壓鍋高壓，25 min升溫121 ℃時，保持121 ℃，維持30 min，降溫，2.5 h降至65 ℃時，取出，放入65 ℃烘箱烘干6.5 h(中途稱重)，得供試品。

1.2.4 供試品溶液的制備

取上述編號1和2的粉末約1 g，精密稱定，裝袋，置圓底燒瓶中，加水30 mL靜置1 h，(95±2) ℃加熱回流4 h，濾過，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾渣及濾紙置燒瓶中，加水30 mL，加熱回流3 h，濾過，合并濾液，85 ℃旋蒸至干，殘渣用水2.5 mL溶解，邊攪拌邊緩慢滴加乙醇38 mL，搖勻，在4 ℃放置12 h，3000 r/min離心10min，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉移到相應體積容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，取溶液適量，3000 r/min離心10 min，精密量取上清液適量，加水稀釋，搖勻，取稀釋液2 mL，即得供試品溶液。

1.2.5 靈芝多糖測定

精密量取供試品溶液2 mL，置10 mL EP管中，照標準曲線制備項下的方法，迅速精密加入硫酸蔥酮(0.1 g+100 mL硫酸)溶液6 mL，立即搖勻，放置15 min后，立即置冰浴中冷卻15 min，取出，以相應的試劑為空白同步顯色操作，照紫外-可見分光光度法，在625 nm波長處測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的含量，計算，即得

2 結果與討論

2.1 標準曲線制備

葡萄糖標準曲線紫外檢測結果見表1。根據表1，葡萄糖標準曲線紫外檢測結果求出標準曲線方程：y=7.8016x-0.039，R2=0.9975，線性范圍：0.064～0.721。

表1 葡萄糖標準曲線紫外檢測結果

2.2 供試品前準備稱重

高壓后的樣品烘干的重量變化情況見表2。

表2 高壓后靈芝子實體的干燥重量變化

2.3 供試品溶液靈芝多糖的測定

靈芝多糖紫外檢測結果見表3和圖1。從表3及圖1靈芝多糖紫外檢測結果可見，本實驗中，赤靈芝子實體加鹽酸浸泡后高壓，提取檢測的靈芝多糖明顯高于未加鹽酸浸泡后高壓的芝子實體，其中，加鹽酸浸泡后高壓靈芝子實體(ω=3.669%)中靈芝多糖的含量是未加鹽酸浸泡后高壓芝子實體的9.9倍(ω=0.370%)。紫靈芝子實體加鹽酸浸泡后高壓，提取檢測的靈芝多糖明顯高于未加鹽酸浸泡后高壓的芝子實體，其中，加鹽酸浸泡后高壓靈芝子實體(ω=1.676%)中靈芝多糖的含量是未加鹽酸浸泡后高壓芝子實體的4.2倍(ω=0.400%)。

表3 靈芝多糖紫外檢測結果

續表3

圖1 靈芝多糖檢測結果

3 結 論

本實驗把靈芝子實體用粉碎機粉碎，然后將粉碎后的靈芝子實體用1～5倍的0.5%～3%的鹽酸浸泡1～3 h，然后，放進高壓鍋高壓，121 ℃維持30 min，然后，高壓降溫后取出樣品置于65 ℃烘箱烘干5～8 h，之后，采用加熱回流的方法提取靈芝子實體中靈芝多糖。赤靈芝對提取得到的靈芝多糖的含量是沒有經過高壓處理的9.9倍，紫靈芝對提取得到的靈芝多糖的含量是沒有經過高壓處理的4.2倍。綜上所述：加鹽酸浸泡后高壓靈芝子實體中主要成份靈芝多糖的含量更高。