IL-6、ANCA、PAB聯合腸道菌群檢測對IBD的診斷價值

董麗麗 李華銘

[摘要] 目的 探討白細胞介素-6（IL-6）、抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）、抗胰腺腺泡抗體（PAB）聯合腸道菌群檢測對炎癥性腸病（IBD）的診斷價值。 方法 回顧性分析2018年3月至2020年3月在杭州市第三人民醫院消化內科住院并行結腸鏡檢查的IBD患者130例設為IBD組，其中潰瘍性結腸炎（UC）患者74例為UC組，克羅恩病（CD）患者56例為CD組，42例非IBD患者為疾病對照組，46例同期來我院健康體檢者為健康對照組。檢測各組的IL-6、ANCA、PAB及腸道菌群水平，比較各組的ANCA、PAB陽性率，及聯合檢測對IBD的檢測效能。 結果 IBD組的ANCA、PAB、腸球菌（EC）、酵母菌（SB）、雙歧桿菌（BL）、擬桿菌（BD）、真桿菌（ES）陽性率顯著高于疾病對照組、健康對照組（均P<0.05）;聯合檢測陽性率均顯著高于單獨檢測（P<0.05）;UC組的ANCA、ES及腸道菌群聯合檢測敏感度、陽性預測值均顯著高于CD組，PAB檢測敏感度顯著低于CD組（P<0.05）;UC組的SB、ANCA+PAB+腸道菌群聯合檢測陰性預測值均顯著高于CD組（P<0.05）;IBD組、疾病對照組、健康對照組的IL-6、SB、腸桿菌（EMB）、EC、BL、ES水平比較，差異有統計學意義（P<0.05）;聯合檢測敏感度、特異度均顯著高于單獨檢測（P<0.05）。 結論 IL-6、ANCA、PAB聯合腸道菌群檢測有助于IBD的臨床診斷，具有推廣應用價值。

[關鍵詞] 白細胞介素-6;抗中性粒細胞胞漿抗體;抗胰腺腺泡抗體;腸道菌群;炎癥性腸病

[中圖分類號] R392.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）13-0106-04

[Abstract] Objective To explore the diagnostic value of interleukin-6 （IL-6）， anti-neutrophil cytoplasmic antibody （ANCA）， anti-pancreatic acinar antibody （PAB） combined with intestinal flora detection for inflammatory bowel disease （IBD）. Methods A retrospective analysis of 130 patients with IBD hospitalized in the Department of Gastroenterology in Hangzhou Third People′s Hospital and underwent colonoscopy from March 2018 to March 2020 were selected as the IBD group， including the UC group of 74 patients with ulcerative colitis （UC） and the CD group of 56 patients with Ron′s disease （CD）.Another 42 non-IBD patients were selected as the disease control group，and 46 patients who came to our hospital for physical examination during the same period were selected as the healthy control group. The levels of IL-6，ANCA，PAB and intestinal flora in each group were detected. The positive rates of ANCA and PAB in each group and efficacy of combined detection for IBD were compared. Results The positive rates of ANCA， PAB， Enterococcus （EC）， Saccharomyces（SB），Bifidobacterium （BL），Bacteroides （BD） and Eubacterium （ES） in the IBD group were significantly higher than those in the disease control group and the healthy control group（P<0.05）.The positive rate of combined detection was significantly higher than that of single detection （P<0.05）.The sensitivity and positive predictive value of combined detection of ANCA， ES and intestinal flora in the UC group were significantly higher than those in the CD group，and sensitivity of PAB detection in the UC group was significantly lower than that in the CD group （P<0.05）.The negative predictive values of SB and combined detection of ANCA+PAB+intestinal flora in the UC group were significantly higher than those in the CD group（P<0.05）.There were statistically significant differences in levels of IL-6， SB， enterobacteria （EMB），EC，BL，and ES in the IBD group， the disease control group， and the healthy control group（P<0.05）.The sensitivity and specificity of combined detection were significantly higher than those of single detection （all P<0.05）. Conclusion IL-6，ANCA and PAB combined with intestinal flora detection is helpful for the clinical diagnosis of IBD. It is worthy of promotion and application.

[Key words] Interleukin-6; Anti-neutrophil cytoplasmic antibody; Anti-pancreatic acinar antibody; Intestinal flora; Inflammatory bowel disease

炎癥性腸病（inflammatory bowl disease，IBD）是一種累及回腸、直腸、結腸的特發性慢性腸道炎癥性疾病。臨床診斷IBD主要通過其臨床表現、內鏡及病理組織學檢查結果。但由于該病臨床表現復雜多樣，極易導致誤診，且難以判斷炎癥活動程度，因而探索多方式聯合診斷進而提高診斷準確度具有積極意義。腸鏡檢查及鏡下組織活檢是目前IBD診斷的金標準，但該操作侵入性大，耗時長，具有一定局限性[1]。目前研究[2-3]普遍認為IBD的發病與腸道菌群密切相關，主要原因為腸道菌群作為腸道內的內生菌，與腸道黏膜免疫存在復雜的交互作用，從而維持腸道穩態，腸道菌群失衡是IBD發生、發展的重要因素，還和多種自身免疫性疾病緊密聯系。白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、抗中性粒細胞胞漿抗體（antineutrophil cytoplasmic antibody，ANCA）、抗胰腺腺泡抗體（antipancreatic acinar antibody，PAB）是傳統用于診斷IBD的血清學指標。本研究通過分析IBD患者與健康人群的血清IL-6、ANCA、PAB抗體及腸道菌群差異，探討以上指標對IBD的診斷價值，以期為臨床診斷IBD提供一定參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年3月至2020年3月在杭州市第三人民醫院消化內科住院并行結腸鏡檢查的IBD患者130例，其中潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）患者74例（UC組），克羅恩病（crohn′s diseas，CD）患者56例（CD組）;選取杭州市第三人民醫院消化內科收治的42例非IBD患者為疾病對照組，另選取46例同期來杭州市第三人民醫院健康體檢者為健康對照組。四組受試者的性別、年齡、身高、BMI比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。見表1。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

納入標準：①符合IBD診斷標準[4];②均經腸鏡檢查及鏡下組織活檢確診為IBD;③知情同意，并簽署相關協議書;④結腸鏡證實患者沒有腸道器質性和阻塞性病變。排除標準：①身體體征極其不穩定，依從性較差，完全不配合醫囑;②細菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性血吸蟲病、腸結核、缺血性結腸炎、放射性結腸炎、結腸癌、不明原因的一過性結腸炎等;③嚴重精神疾病與認知障礙，無法配合相關試驗進行;④合并惡性腫瘤、惡性血液病、肝硬化、糖尿病、腎功能衰竭、重度脂肪肝、肥胖患者;⑤臨床資料不全，近期患有急性感染性胃腸疾病或上消化道糜爛/潰瘍者;⑥近期內服用益生菌制劑、非甾體類抗炎藥和他汀類藥物者。

1.2 方法

1.2.1 ANCA、PAB評價金標準? 參考2018年中華醫學會消化病學會炎癥性腸病學組《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見》[5]，以結腸鏡檢查結果為本試驗金標準。

1.2.2 IL-6、ANCA、PAB? 空腹抽取患者血樣5 ml，采用酶聯免疫檢測法檢測受試者的血清IL-6水平。采用間接免疫熒光薄片法檢測ANCA、PAB水平，試劑盒均購自德國歐蒙公司，取25 μl血清采用PBS按1∶10比例稀釋，稀釋血清移入樣板反應區，封膜，37℃ 30 min，移出反復沖洗3次，加入20 μl熒光標記的抗人IGg，室溫孵育30 min，顯微鏡下熒光細胞核周圍呈線條狀分布者為陽性。

1.2.3 腸道菌群檢測? 全部受檢對象于結腸鏡檢查當日留取新鮮糞便樣本5～10 g，放置于密閉無菌便盒中，常溫30 min送檢，根據光岡知足法進行細菌培養、鑒定及菌落檢測。腸桿菌（enterobacillus，EMB）、腸球菌（enterococcus，EC）及酵母菌（saccharomycetes，SB）采用需氧菌培養基培養;雙歧桿菌（bifidobacteria，BL）、擬桿菌（bacteroidetes，BD）、真桿菌（eubacterium sp，ES）采用厭氧培養基。細菌經革蘭染色，生化試驗進行鑒定，計算各組樣本所含菌群數量，結果以對數LgN（CFU/g）表示。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0統計學軟件處理數據。計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義，IL-6、ANCA、PAB及各腸道菌群指標的診斷效能采用ROC曲線表示。

2 結果

2.1 各組的ANCA、PAB陽性率比較

IBD組的ANCA、PAB、EC、SB、BL、BD、ES陽性率顯著高于疾病對照組、健康對照組（P<0.05）;聯合檢測的陽性率均顯著高于單獨檢測，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.2 ANCA、PAB、腸道菌群及聯合檢測對IBD的診斷價值

UC組的ANCA、ES及腸道菌群聯合檢測的敏感度、陽性預測值均顯著高于CD組，PAB檢測敏感度顯著低于CD組（P<0.05）;UC組的SB、ANCA+PAB+腸道菌群聯合檢測陰性預測值均顯著高于CD組（P<0.05）。見表3。

2.3 三組的IL-6、腸道菌群水平比較

IBD組、疾病對照組、健康對照組的IL-6、SB、EMB、EC、BL、BD、ES水平比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表4。

2.4 ANCA、PAB、IL-6、腸道菌群及聯合檢測對IBD的ROC曲線分析

聯合檢測的敏感度、特異度均顯著高于單獨檢測，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表5、圖1。

3 討論

IBD臨床表現為反復腹痛、腹瀉、黏液膿血便、腸梗阻和腸穿孔，甚至出現各種全身并發癥如視物模糊、癌變等[6]。研究[7]顯示其發病率呈顯著上升趨勢。超過40%的IBD患者伴有腸外表現，可涉及多個器官系統，包括關節、皮膚、眼、肝、膽、肺、腎臟、免疫或血液系統等[8]。研究[9]發現IBD發生是環境因素、飲食習慣、遺傳基因、腸道菌群及患者自身免疫因素等共同作用的結果。目前尚無可治愈的藥物，且病情反復，嚴重影響患者的生活質量。

IBD相關抗體、血清標志物、腸道菌群等檢測因其簡單方便、無創經濟等優勢，近年來得到廣泛關注[10]。IBD患者存在不同程度的腸道菌群紊亂現象，其中梭狀芽孢菌呈降低趨勢，而硝酸鹽還原菌、大腸桿菌等數量則呈顯著增長趨勢[11，12]。

ANCA是一種以中性粒細胞和單核細胞胞漿中溶酶體酶發生反應的抗體，研究[13]發現ANCA在IBD相關的靶抗原多數為宿主反應中的中性粒細胞殺傷微生物的活性蛋白。PAB是一種針對胰腺泡的糖基磷脂醇的錨定蛋白，UC和CD患者中均可檢測到PAB。本研究顯示，UC、CD患者ANCA陽性率分別為48.65%、7.14%，疾病對照組與健康對照組分別為9.52%、0;相關研究[14]發現UC患者ANCA陽性率為50%～70%，CD患者為2%～28%、正常人為0～2.5%，且IBD組的ANCA、PAB陽性率顯著高于對照組，提示ANCA抗體可用于輔助檢測IBD，但研究[15]發現在免疫性疾病如自身免疫性肝病中可檢測出ANCA，因此臨床診斷IBD應將免疫性疾病納入考量。本研究結果顯示，UC、CD患者的PAB陽性率分別為24.32%、48.21%，略高于國外研究[16]。但值得關注的是，未行無麥膠飲食的乳糜瀉患者中PAB陽性率與CD患者相近，因此，IBD患者診斷時應參考多指標共同評定[17]。

本研究顯示，UC組的ANCA、ES及腸道菌群聯合檢測敏感度、陽性預測值均顯著高于CD組，PAB檢測敏感度顯著低于CD組;UC組的SB、ANCA+PAB+腸道菌群聯合檢測陰性預測值均顯著高于CD組，進一步證實ANCA在UC患者中表達更高，CD組表達更低，腸道菌群可輔助IBD診斷。測量不同對照組腸道菌群數量顯示，IBD患者IL-6水平顯著升高，提示炎癥因子水平升高是IBD發生的前期征兆，Faubion等[18]研究與本研究相似。此外，IBD患者SB、EMB、EC、BL、BD水平顯著上升，ES水平顯著下降。表明腸道菌群發生紊亂，厭氧菌數量升高，梭狀芽胞桿菌數量顯著降低是IBD發生的標志之一。主要原因為正常生理狀態下，腸道內菌群之間存在相互依存、制約機制，而腸道微生態失衡，導致拮抗病原微生物定植抗力減弱，腸黏膜屏障功能受損，腸道通透性增加，繼而引發慢性炎癥性疾病[19]。此外，ROC分析結果顯示，IL-6、ANCA、PAB聯合腸道菌群檢測的敏感度、特異度分別為100.0%、93.3%，表明聯合多指標檢測可輔助診斷IBD，與楊文宏等[20]研究結果一致。本研究樣本量較少，研究結論難免存在一定偏倚。

綜上所述，IBD患者菌群結構改變顯著，炎癥因子表達水平顯著升高，IL-6、ANCA、PAB及腸道菌群水平可輔助用于IBD診斷。

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（收稿日期：2021-09-27）