免疫相關性復發性流產患者血清B族維生素水平的研究

盧陽 陳萍 林素仙 王勝男 姜建昌 張智勇 楊美綠

[摘要] 目的 回顧性分析免疫相關性復發性流產患者水溶性B族維生素水平的數據，為臨床干預提供參考依據。方法? 選取2020年7月至2021年5月在浙江省溫州市人民醫院就診的免疫相關性復發性流產患者為流產組（n=40），同期未孕婦女為對照組（n=31），采用高效液相色譜串聯質譜分析測定流產組與對照組的外周血中維生素B1、B2、B3、B5、B6、B9水平。結果? 流產組與對照組比較，兩組的維生素B2、B3、B5、B6水平相比差異無統計學意義（P>0.05）。流產組的維生素B1水平為2.160（1.518，2.505）ng/ml，對照組維生素B1水平為2.710（2.050，3.390）ng/ml;兩組的維生素B1水平對比，差異有統計學意義。流產組的維生素B9水平為8.535（6.473，10.850）ng/ml，對照組的維生素B9水平為9.850（8.230，12.650）ng/ml;兩組的維生素B9水平對比，差異有統計學意義。結論? 維生素B1、B9可能是免疫相關性復發性流產發生、發展的一個重要因素，維生素B1、B9的檢測對免疫相關性復發性流產患者的預防及治療具有一定的臨床意義，補充維生素B1、B9是可能的治療靶點之一。

[關鍵詞] 復發性流產;水溶性B族維生素;維生素B1;維生素B9

[中圖分類號] R714.21? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）13-0082-04

[Abstract] Objective To retrospectively analyze the data of water-soluble B group vitamins in patients with immune-related recurrent spontaneous abortion， so as to provide a reference for clinical interventions. Methods A total of 40 patients with immune-related recurrent spontaneous abortion of Wenzhou People′s Hospital in Zhejiang Province from July 2020 to May 2021 were selected as the abortion group and 31 contemporaneous non-pregnant women as the control group. The levels of vitamins B1， B2， B3， B5， B6 and B9 in peripheral blood of the abortion group and the control group were determined by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. Results To compare the abortion group with the control group， there were no statistically significant differences in the levels of vitamins B2， B3， B5 and B6 between the two groups （P>0.05）. The level of vitamin B1 in the abortion group was 2.160 （1.518， 2.505） ng/ml， and that in the control group was 2.710 （2.050， 3.390） ng/ml. There was a significant difference in the vitamin B1 level between the two groups. The level of vitamin B9 in the abortion group was 8.535 （6.473， 10.850） ng/ml， and that in the control group was 9.850 （8.230， 12.650） ng/ml. There was a significant difference in the vitamin B9 level between the two groups. Conclusion Vitamins B1 and B9 may be important factors in the occurrence and development of immune-related recurrent spontaneous abortion. Its detection is of certain clinical significance for the prevention and treatment of immune-related recurrent spontaneous abortion. Vitamins B1 and B9 supplementation is one of the potential therapeutic targets.

[Key words] Recurrent spontaneous abortion; Water-soluble B group vitamins; Vitamin B1; Vitamin B9

復發性流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）指同一女性與同一伴侶持續發生2次及其以上流產[1]，發生率約為1%，是育齡婦女的常見病。該病再次妊娠可能發生自然流產的風險高，對患者家庭幸福與身心健康影響極大。復發性流產原因復雜，包括染色體、解剖、內分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因[2]，其中免疫因素在復發性流產中起著重要作用，根據免疫性流產的發病機制不同，可分為自身免疫型和同種免疫型，自身免疫型主要包括自身免疫性疾病和自身免疫性抗體異常[3]。對免疫相關性復發性流產患者進行針對性與規范性的臨床治療，對患者預后有極大的重要意義。因此，本研究觀察免疫相關性復發性流產患者與正常人群B族維生素水平的差異，旨在為下一步B族維生素對免疫相關性復發性流產患者的干預進行初探，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

流產組（n=40）選取自2020年7月至2021年5月在浙江省溫州市人民醫院風濕免疫科就診的免疫相關性復發性流產患者。對照組（n=31）選取自同期浙江省溫州市人民醫院就診的未孕婦女。流產組納入標準：①就診時為非妊娠狀態，自然流產≥2次;②夫婦雙方外周血染色體核型正常;③盆腔彩超除外生殖道器質性病變;④宮頸分泌物檢查除外生殖道感染;⑤生殖內分泌激素檢查無異常，包括月經周期正常、有排卵、甲狀腺功能正常、無糖尿病史、無肝臟、腎臟急慢性疾病;⑥存在免疫異常，包括存在自身免疫性疾病、抗核抗體陽性、抗磷脂抗體間斷陽性、甲狀腺抗體陽性等，無明顯血栓指標異常;⑦近半年內未進行維生素補充治療。對照組納入標準：①至少有1次正常生育史，無不良孕產史;②近半年內未進行維生素補充治療;③無明確慢性病、自身免疫性疾病史。

1.2 方法

留取外周靜脈血2 ml，于4℃冰箱避光靜置30 min，4℃離心機4000 rpm離心5 min，吸取上清液轉移至干凈的EP管中立即凍存于-20℃冰箱中待處理。檢測時使用多種水溶性維生素樣本釋放劑試劑盒（杭州佰勤醫療器械有限公司），試劑盒包括A樣本釋放劑及B樣本釋放劑。將10 ml A液和水溶性維生素內標液（德國默克公司）按1∶2比例混合，渦旋混勻3 min，放-80℃備用，標記為水溶性維生素內標工作液。用樣本釋放劑B液作為稀釋劑，取各水溶性維生素標準品（德國默克公司）各10 μl，加入稀釋液970 μl，制備成最高點濃度的標線，濃度為100 ng/ml，制備水溶性維生素標線，用樣本釋放劑B液和最高濃度點的標線，依次制備標線的其它濃度點。精密吸取血清樣本100 μl置于潔凈的離心管中，加入300 μl水溶性維生素內標工作液，渦旋震蕩5 min，離心管于4℃，15 000 rpm離心10 min。取上清液200 μl放入1.5 ml的離心管中，于真空濃縮儀中干燥1.5 h，取出加150 μl樣本釋放劑B液復溶，渦旋3 min，4℃ 15 000 rpm離心5 min，取上清液100 μl進行分析。采用超高效液相色譜-串聯質譜法（UPLC-MS/MS）進行分析。檢測單位為杭州佰辰醫學檢驗所有限公司。

1.3 觀察指標

研究組及對照組的外周血中維生素B1、B2、B3、B5、B6、B9水平。

1.4 統計學方法

數據用SPSS 23.0統計學軟件進行分析，計量資料以中位數四分位間距[M（P25，P75）]表示，采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料比較

流產組40例，對照組31例。流產組患者的平均年齡30.00（27.25，32.00）歲，對照組的平均年齡31.00（27.00，38.00）歲，兩組的一般資料比較，差異無統計學意義（Z=-0.767，P=0.443），具有可比性。

2.2 兩組的B族維生素水平比較

流產組與對照組比較，兩組的維生素B2、B3、B5、B6水平相比，差異無統計學意義（P>0.05）。流產組的維生素B1水平為2.160（1.518，2.505）ng/ml，對照組的維生素B1水平為2.710（2.050，3.390）ng/ml;流產組的維生素B9水平為8.535（6.473，10.850）ng/ml，對照組的維生素B9水平為9.850（8.230，12.650）ng/ml;兩組的維生素B1、B9水平對比，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

復發性流產病因復雜而多樣，治療難度大，給孕婦及家庭造成嚴重傷害。研究表明，免疫因素是復發性流產極為重要的因素之一[4]。深入研究免疫相關性復發性流產的致病因素及治療方案，可提高免疫相關性復發性流產患者的妊娠成功率。

維生素是維持人體生命活動必需的一類物質，也是人體所需的七大營養素之一，主要參與機體代謝的調節[5]。維生素分為脂溶性維生素和水溶性維生素。B族維生素都是水溶性維生素，可促進細胞生長和分裂，參與能量代謝[6]。潛在性維生素缺乏病是現代醫學的盲點，有專家推測，大約3個人中就有1個可能處于潛在性維生素缺乏癥，尤其中老年人、孕婦和兒童，其潛在性缺乏率很高[7]。孕婦和哺乳期婦女對所有維生素、礦物質和微量元素的需要量是平時的1.3～1.8倍[8]。維生素B1也稱硫胺素，是最早發現的水溶性B族維生素，在細胞內硫胺素可轉變為多種磷酸化衍生物，如焦磷酸硫胺素（thiamine pyrophosphate，TPP）[9]。TPP是維生素B1在細胞內的主要活性形式，也是糖、脂肪酸和氨基酸氧化代謝中重要的輔助因子，對于維持細胞正常代謝、細胞生長和增殖等非常重要[10]。另外研究發現，腸道中B細胞在向漿細胞分化的過程中會發生代謝性改變，Peyer氏斑中的天然B細胞和腸道固有層中的IgA+漿細胞都會利用三羧酸循環來維持細胞代謝[11]，而維生素B1是三羧酸循環中一個必要的輔助因子[12]，且IgA+漿細胞會利用糖酵解代謝，而維生素B1對糖酵解代謝起著重要作用[13]，從而得出維生素B1在免疫中起著一定的作用。維生素B9（葉酸）不足會造成獲得性同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代謝障礙，維生素B9缺乏可導致脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）甲基化異常和DNA合成修復的中斷，引起甲硫氨酸合成減少，從而造成Hcy在體內蓄積[14]。在早孕期時，過高水平的Hcy對絨毛血管的形成有明顯的抑制作用，絨毛血管數目明顯減少，從而減少胚胎供血量，導致胚胎著床不良及胚胎死亡[15]。越來越多的臨床和流行病學資料顯示，高同型半胱氨酸可增加慢性炎癥性疾病的風險，高同型半胱氨酸與炎癥免疫相關妊娠不良結局相關[16]。體外實驗發現，高Hcy可使孕期子宮平滑肌收縮幅度輕度升高，收縮頻率顯著增加，增加妊娠丟失的發生[17]。

炎癥和免疫是免疫相關性復發性流產的病理基礎[18]，正常的炎癥是機體防御功能，實驗證據表明，炎癥對疾病的發生發展起著重要作用，在代謝綜合征、2型糖尿病和自身免疫性疾病中最強[19-20]。另有研究表明，營養不良也可促進炎癥的發生，并可能促進系統性慢性炎癥的發展。這些因素包括加工或精制食品中維生素、礦物質、omega-3脂肪酸等含量偏低[21]。而本研究也證實復發性流產患者的維生素B1、維生素B9較正常人群降低。因此推測維生素B1、B9在免疫相關性復發性流產中可能起著重要作用。

綜上所述，免疫相關性復發性流產患者可見血中維生素B1、B9水平下降，維生素B1、B9水平的降低與免疫相關性復發性流產有關。由此提示，對免疫相關性復發性流產患者，補充維生素B1、B9可能對提高妊娠成功率有一定的幫助。

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（收稿日期：2021-07-29）