纖維膠凝蛋白3在反復上呼吸道感染患兒血清中的表達及意義

趙苗苗，魏敬芝，張 昆

(漢中市中心醫院兒科，陜西 漢中 723099)

反復上呼吸道感染病情復雜并且難于治療，是兒科常見的疾病，長期反復會導致患兒生長發育受到嚴重阻礙，還易并發肺炎、心力衰竭等[1-2]。目前小兒反復上呼吸道感染的具體發病機制尚未明確。免疫功能發育不完善可能是發病的主要原因，從而導致繼發免疫功能下降[3]。纖維膠凝蛋白(Ficolin，FCN)是一組能夠識別并結合病原相關模式分子的蛋白，在固有免疫防御中扮演著重要的角色[4-5]。纖維膠凝蛋白3(Ficolin-3，FCN3)是FCN家族的關鍵因子，主要分布于血漿中，可能通過激活凝集素途徑參與機體免疫反應。有研究[6]通過ELISA分析發現FCN3在涂陰肺結核中表達降低，認為其可作為涂陰肺結核診斷的血清標志物。基于FCN3在涂陰肺結核中的應用，本研究觀察反復上呼吸道感染患兒血清中FCN3表達水平，并探討其與體液免疫的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 本研究入選的126例反復上呼吸道感染患兒均于2017年12月至2019年12月收治入院，設為觀察組，其中年齡2～11歲，平均(7.19±2.43)歲；男性67例，女性59例。病例納入標準：①符合反復呼吸道感染的診斷標準[5]；②患兒年齡2～12歲；③家屬接受本研究內容。排除標準：①合并有心、肝、腎功能障礙，以及血液系統、免疫系統疾病；②近期使用過免疫抑制劑或激素藥物；③本身存在先天性肺發育畸形、免疫缺陷疾病、支氣管哮喘、結締組織病。同時，選取同時期體檢結果健康的兒童120例為對照組，其中年齡2～12歲，平均(6.57±2.11)歲；男性65例，女性55例。兩組基本資料比較差異無統計學意義(均P>0.05)。本研究所有受試者家屬均知情同意，并簽署知情同意書，且該研究已經醫院倫理委員會批準。

1.2 主要試劑與儀器 人FCN3酶聯免疫吸附實驗(ELISA)試劑盒(貨號：EH0137)購自武漢菲恩生物科技有限公司；人IgM ELISA試劑盒(貨號：JK-A-5201)、人IgA ELISA試劑盒(貨號：JK-A-5203)、人IgG ELISA試劑盒(貨號：JK-A-5202)購自上海晶抗生物工程有限公司。臺式高速冷凍離心機(型號：貝克曼庫爾特Allegra 64R)購自貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司；恒溫恒濕箱(型號：LHS-250HCN)購自上海錦玟儀器設備有限公司。

1.3 研究方法

1.3.1 樣本采集及測定：兩組受試者均于晨起采用清潔干燥試管抽取空腹肘靜脈血5 ml，于離心機下以3000 r/min離心15 min，收集上清液至EP管內，保存-20 ℃冰箱備用。采用ELISA法檢測兩組受試者血清中IgA、IgG、IgM、FCN3的表達水平以及觀察組患兒治療前后FCN3表達水平，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 治療方法：根據中國醫師協會兒科醫師分會兒童耳鼻咽喉專業委員會發布的《兒童反復上呼吸道感染臨床診治管理專家共識》[7]對患兒采用阿奇霉素治療，根據患兒不適部位靈活運用，以減緩患兒癥狀。

2 結 果

2.1 兩組一般資料比較 見表1。兩組年齡、性別、家族史、體重指數比較，差異無統計學意義(均P>0.05)。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組血清FCN3水平及體液免疫指標比較 見表2。觀察組血清FCN3表達水平及體液免疫指標IgA、IgG、IgM水平低于對照組(均P<0.05)。

2.3 觀察組患兒治療前后血清FCN3及體液免疫指標比較 見表3。觀察組患兒治療后血清FCN3及體液免疫指標表達IgA、IgG、IgM水平高于治療前(均P<0.05)。

表2 兩組血清FCN3水平及體液免疫指標比較

表3 觀察組患兒治療前后血清FCN3及體液免疫指標比較

2.4 觀察組患兒血清FCN3表達水平與體液免疫指標相關性分析 Pearson分析結果顯示，FCN3表達水平與IgA、IgG、IgM呈正相關(r=0.531、0.436、0.499，均P<0.05)。

2.5 血清FCN3水平對反復上呼吸道感染發生的預測價值 見圖1。ROC曲線分析顯示，血清FCN3預測反復上呼吸道感染發生的曲線下面積為0.752(95%CI：0.688～0.815)，截斷值為15.723 μg/ml，敏感度為96.0%，特異度為51.7%。

圖1 血清FCN3預測反復上呼吸道感染發生ROC曲線

3 討 論

反復上呼吸道感染多見于學齡前兒童，隨著年齡的增長，發病率逐年降低[8-11]。上呼吸道感染易受天氣、環境、自身免疫能力的影響，故易反復發作，最終形成反復呼吸道感染，甚至會出現感染中毒、重度肺炎，還可能危及患兒生命[12]。宋元玉[13]通過引入“創傷后成長”概念，認為反復呼吸道感染的患兒創傷后成長水平低，其主要因素不僅包括患兒自身情況，而且與患兒家庭觀念及父母文化程度也有一定的關系。因此，對兒童反復上呼吸道感染的重視，既有關患兒本身的身心健康，也對其家庭和未來起著重要作用。

體液免疫和細胞免疫是參與機體免疫功能的重要機制。有研究[14-15]通過對反復呼吸道感染患兒機體免疫指標檢測發現，IgA、IgG、IgM水平均明顯比健康正常兒童低，說明反復呼吸道感染不僅與病原體直接侵害有關，而且與患兒機體免疫功能也密切相關。Munteanu等[16]認為，如果兒童時期發生長期或合并嚴重并發癥反復感染，則應考慮存在免疫缺陷，反復感染經常累及上呼吸道，年齡在5歲內的兒童1年內可出現4～8次呼吸道感染發作。細胞免疫的改變可能與反復呼吸道感染有關。Pasternak等[17]對394例3個月至18歲的反復呼吸道感染患兒進行評估，發現65%的反復呼吸道感染患兒存在體液免疫功能紊亂，兒童的呼吸道感染通常是由IgG、IgA、IgM表達水平異常導致的。本研究結果中，反復上呼吸道感染患兒血清IgA、IgG、IgM表達均低于對照組，提示患兒可能出現免疫功能低下，易引起上呼吸道感染，需醫護、家長、學校三方密切關注，從而保證患兒的身心健康。

FCN是補體途徑甘露糖凝集素家族中的一種結合蛋白，也是近年來新發現的凝集素，其在抵抗病毒性相關疾病中起著極大的作用，其主要通過識別病毒表面糖蛋白激活補體途徑，達到降低病毒感染的效果[18]。FCN在人類及多種動物體內均有表達，目前在人類和脊椎動物中有3類FCN，為M-Ficolin(Ficolin-1)、L-Ficolin(Ficolin-2)、H-Ficolin(Ficolin-3)，分別由FCN1、FCN2、FCN3基因編碼[19]。Man-Kupisinska等[20]發現重組FCN3以濃度依賴的方式與IgG和IgM相互作用。Michalski等[21]發現FCN3通過巨噬細胞增強肺炎鏈球菌的吞噬作用，具有殺菌活性。Plawecki等[22]在系統性紅斑狼瘡患者和健康受試者間發現抗FCN3水平存在顯著差異，165例系統性紅斑狼瘡患者中有56例檢測到抗FCN3抗體呈陽性。本研究中，反復上呼吸道感染患兒血清中FCN3表達水平低于對照組，因此猜測FCN3參與反復上呼吸道感染病程并呈現低表達狀態，其可能通過巨噬細胞表現出一定殺菌活性，表達降低可能是由反復感染所導致的消耗，但是否以濃度依賴的方式與體液免疫指標相關，仍需進一步研究。另外，本研究中患兒治療后血清FCN3表達水平較治療前提高，提示FCN3與患兒病情有關，患兒FCN3表達上調可能與所采用的抗感染治療提高巨噬細胞免疫調節作用相關。

Pearson分析顯示，FCN3表達水平與IgA、IgG、IgM均呈正相關，進一步驗證FCN3表達是與體液免疫指標相關并呈正相關，但究竟是否存在相關共同機制或靶標，是否是引起與被引起的關系，仍需未來詳細研究。ROC曲線分析顯示，血清中FCN3預測反復上呼吸道感染發生的曲線下面積為0.752，截斷值為15.723 μg/ml，敏感度為96.0%，說明FCN3水平對于預測反復上呼吸道感染有一定的作用，可以作為預測反復上呼吸道感染發生的敏感指標，當FCN3表達低于15.723 μg/ml時，患兒可能發生反復上呼吸道感染。但血清FCN3水平預測反復上呼吸道感染發生的特異性只有51.7%，相對較低，因此在臨床應用中可聯合其他常見特異性較高的指標，以提高特異性，降低誤診率。

綜上所述，反復上呼吸道感染患兒血清中FCN3低表達，且與IgA、IgG、IgM的表達水平呈正相關，是預測反復上呼吸道感染較為良好的指標。但本研究仍存在不足，如樣本量具有局限性，未來可經擴大研究年份及研究區域進行改善；也未研究反復上呼吸道感染患兒相關炎性因子表達情況，未來的研究可針對這一缺陷進行補充。