多能性相關轉錄因子及微管不穩定蛋白在皮膚鱗狀細胞癌的表達及臨床意義

張靜依 哈雪梅(通信作者) 趙博雅 張自潔

101500首都醫科大學燕京醫學院2016級五年制臨床醫學1，北京

101500首都醫科大學燕京醫學院密云教學醫院綜合教研室2，北京

101500首都醫科大學燕京醫學院2018級五年制臨床醫學3，北京

皮膚鱗狀細胞癌(cSCC)是一種以角質細胞異常增殖為特征的惡性腫瘤，其發病率隨人口老齡化發展逐年上升。本病臨床表現單一、病程長，反復摩擦感染常影響臨床判斷，不典型的病變，更易過診或漏診。研究cSCC 早期高危特征和發生的分子機制，可為臨床提供重要信息。多能性相關轉錄因子(SOX2)在哺乳動物胚胎發生和后來的生活中必不可少，異常表達卻非常有害，通過調節干細胞功能、細胞黏附、外基質降解及血管生成等參與腫瘤發生、轉移與復發[1-2]。微管不穩定蛋白(Stathmin)又稱癌蛋白，具有微管解聚活性，在有絲分裂調控中起關鍵作用，是腫瘤相關因子之一[3]。本研究檢測SOX2和Stathmin在cSCC和皮膚良性增生性病變中的表達情況，以期發現相關診斷標記和線索，為臨床提供預后信息及新的治療靶點。

資料與方法

選取2017-2020年北京市密云區醫院病理科存檔的皮膚鱗狀細胞癌切除標本41 例為觀察組，良性增生性病變25 例為對照組。觀察組男28 例，女13 例；年齡44～94歲，平均(70.54±13.19)歲；有糖尿病者21例，無糖尿病者17 例(失訪3 例)；發生于口腔相關上皮者7 例，其他部位者34 例。對照組男13 例，女12例；年齡33～83歲，平均(56.20±14.18)歲；有糖尿病者10 例，無糖尿病者15 例；發生于口腔相關上皮者1例，其他部位者24例。兩組患者基本資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準。

納入標準：①術前未接受過放化療。②手術切除為初次治療。③原發性腫物。④經患者及家屬同意。

排除標準：①合并其他惡性腫瘤者。②診斷不明確者。③復發病例。④不配合隨訪者。

方法：兩組均采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法(SP)。10%中性福爾馬林固定的石蠟標本常規切片(厚度2～3 μm)，脫蠟水化，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)浸泡。乙二胺四乙酸(EDTA)修復液(PH8.0)高壓修復，冷卻至室溫，PBS緩沖液清洗。一抗(SOX2：中山金橋， 20817571， Stathmin： 中山金橋，21095421)，37℃孵育1 h。PBS 清洗后加酶標羊抗鼠二抗(中山金橋：17G87D11)。DAB 顯色。蘇木素復染。乙醇脫水。二甲苯透明后封片。將已知陽性組織設為陽性對照，PBS 液代一抗作為陰性對照。由2 名經驗豐富的主治醫師行獨立雙盲復閱判讀。

觀察指標：依據著色強度、陽性細胞百分比進行評分。著色強度：棕褐色計3 分，棕黃色計4 分，淺黃色計1 分，不著色計0 分；陽性細胞百分比：＞75%計4 分，50%～75%計3 分，25%～50%計2 分，≤25%計1 分，無陽性計0 分。以上兩項得分相加計總分，0～1 分為陰性，2～7 分為陽性。高分化鱗狀細胞癌巢近基底層陽性表達時，評為1分(陰性)。

統計學方法：采用SPSS 22.0 統計學分析系統進行數據處理，計量資料用(±s)表示，組間采用t檢驗；計數資料用[n(%)]表示，組間采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

SOX2 和Stathmin 蛋白在兩組患者中的表達。SOX2蛋白在正常皮膚未見表達，在cSCC中表達于腫瘤細胞核，個別胞質陽性。Stathmin 定位于胞質，在正常鱗狀上皮基底及基底旁層表達，高分化鱗狀細胞癌巢近基底陽性表達，分化越差，信號越強。見圖1、圖2。

圖1 SOX2在癌組織中表達(10x)

圖2 Stathmin在癌組織中表達(10x)

兩組患者病變中SOX2 和Stathmin 蛋白表達率比較：觀察組SOX2 和Stathmin 在cSCC 陽性表達率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組患者病變中SOX2和Stathmin蛋白表達率比較

觀察組SOX2 和Stathmin 蛋白表達與臨床因素的關系：觀察組SOX2 陽性表達與發病部位和糖尿病史相關，發生于口腔黏膜的鱗狀細胞癌SOX2 蛋白陽性表達率明顯高于其他部位，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白陽性表達率高于無糖尿病史者，差異有統計學意義(P＜0.05)。Stathmin 蛋白陽性表達與腫瘤分化呈負相關，中-低分化鱗癌Stathmin 蛋白陽性表達率明顯高于高分化者，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 觀察組SOX2和Stathmin蛋白表達與臨床因素的關系

討 論

鱗狀上皮是表皮增殖單元發生一系列高度調控事件而逐漸分化成熟的，細胞分裂率、凋亡或傳輸時間等微小改變即可導致病理狀況，其調控異常是最可能誘發惡性腫瘤的原因。

SOX2 對維持胚胎和干細胞群至關重要，可影響細胞增殖、遷移、侵襲和轉移。SOX2 在食管鱗癌、膀胱癌前病變及小鼠侵襲性膀胱癌中持續表達，對腫瘤的啟動和生長十分重要，推薦SOX2 作為尿路上皮癌標記及潛在靶點[4-5]。這與本研究結果所示SOX2 蛋白在cSCC 細胞核陽性表達，且陽性率明顯高于對照組結果相似。SOX2 蛋白高表達于口腔相關的鱗狀細胞癌，可能與其上皮干細胞性及異質性相關[6]。SOX2還可協同P63 形成復合體，激活編碼GLUT1 的內含子增強子簇，提高GLUT1 表達，介導糖酵解內流過度激活，鱗狀細胞癌存在其表型，糖代謝異常時高度易感[7]。本研究結果顯示，有糖尿病史的cSCC 患者SOX2 蛋白陽性表達率高于無糖尿病史者，由此推斷，患者糖尿病史及血糖水平可作為cSCC 診斷參考依據。

幾乎所有宮頸鱗癌和高級別上皮內瘤變中Stathmin 過表達，其蛋白及mRNA 表達水平在食管鱗癌患者血清中高于健康者[8]。但很多研究發現，Stathmin 高表達與腫瘤分化差、淋巴結轉移、TNM 分期晚和生存期短有關[9-10]。口腔鱗癌過表達Stathmin可通過激活PI3K-AKT-mTOR 信號通路來降低癌細胞對治療的敏感性。本研究結果顯示，Stathmin在cSCC的陽性表達率明顯高于對照組，且其陽性表達與腫瘤分化呈負相關，提示其表達與預后不良相關。

綜上所述，Stathmin 和SOX2 可作為cSCC 診斷標記，陽性表達提示惡性，可協助鑒別病理形態相似的cSCC 和良性增生性病變，并為臨床提供預后信息。患者糖尿病病史及血糖水平有可能作為cSCC的參考依據。