醋制白屈菜的鎮痛作用研究

劉南彤，李瑞海，賈天柱

(遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

醋制是一種傳統的中藥炮制方法，其炮制用醋多為米醋，藥材經醋制后通常會達到減毒增效的作用[1]。本研究前期試驗醋制白屈菜的最佳工藝已證明，醋制后白屈菜中活性成分的含量均有增加[1]，因此本研究將炮制品與生品分別對小鼠灌胃給藥，比較醋制前后白屈菜藥效作用的變化。目前制作動物疼痛模型主要有三種方法，分別是熱刺激法、化學刺激法、機械刺激法[2-3]，本研究采用熱刺激法制造熱板致痛模型，并采用化學刺激法制造醋酸扭體模型[4-5]。這兩種模型具有既簡單，效果又明顯的優點；其中，熱板法測定的藥物鎮痛效果屬于中樞性的鎮痛作用；醋酸扭體法測定的鎮痛效果屬于外周性的鎮痛作用[5-6]。本研究將兩種模型聯用，能夠更加全面地探究醋制后白屈菜的鎮痛效果。

1 儀器與材料

1.1 藥物及試劑

本研究所用白屈菜，產于河北安國，由遼寧中醫藥大學藥學院許亮教授鑒定為罌粟科植物白屈菜的干燥全草；阿司匹林腸溶片(濟南永寧制藥股份有限公司)；乙醇、鹽酸、氫氧化鈉(天津市科密歐化學試劑有限公司)；三氯甲烷(天津市富宇精細化工有限公司)；廚邦9度米醋(廣東美味調味食品有限公司)。

1.2 儀器

RE3000A旋轉蒸發器(上海越眾儀器設備有限公司)；HH-M8八孔恒溫水浴箱(上海赫田科學儀器)；超聲提取器(AS3120，天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；十萬分之一分析天平(CP225D，SARTORIUS)；YLS-6B智能熱板儀(濟南益延科技發展有限公司)。

1.3 動物

實驗動物為昆明小鼠，全部為母鼠，體質量在24～30 g之間，由本校藥學院實驗中心動物房提供。

2 方法

2.1 白屈菜生品及醋制品的制備

2.1.1 白屈菜生品的制備 取白屈菜100 g，加入乙醇500 mL，超聲提取(功率200 W，頻率40 kHz)60 min，搖勻濾過，取續濾液，蒸干，殘渣加入0.5%鹽酸500 mL，超聲(功率200 W，頻率40 kHz)提取60 min，放冷過濾，濾液用10%NaOH溶液調節pH=11，靜置30 min，置分液漏斗中，用三氯甲烷萃取，回收三氯甲烷，殘渣用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液適量混合均勻。

2.1.2 白屈菜醋制品的制備 取白屈菜100 g，按照課題前期實驗最佳醋制工藝[7]，加入米醋30 g，燜潤2 h，60℃下烘20 h，再按照“2.1.1”項下方法進行。

2.2 熱板鎮痛試驗

2.2.1 分組及給藥 將健康小鼠隨機分成8組，每組8只，分別為空白對照組(0.5%羧甲基纖維素鈉溶液10 mL/kg)、陽性藥組(阿司匹林200 mg/kg)、醋制白屈菜低劑量組(5 mg/kg)、醋制白屈菜中劑量組(10 mg/kg)、醋制白屈菜高劑量組(20 mg/kg)、白屈菜生品低劑量組(5 mg/kg)、白屈菜生品中劑量組(10 mg/kg)、白屈菜生品高劑量組(20 mg/kg)，連續灌胃5d，之后對小鼠進行熱板法試驗，在為期5 d的灌胃操作中不限制小鼠的飲食與飲水，但在進行試驗前12 h禁食不禁水。

表1 白屈菜活性成分對熱板鎮痛小鼠的作用

2.3 醋酸扭體致痛試驗

2.3.1 分組及給藥 同“2.2.1”項下方法，于第6天進行醋酸扭體致痛試驗。

2.3.2 醋酸扭體試驗步驟 首先在小鼠腹腔注射0.6%的冰乙酸溶液，造成腹膜炎疼痛模型，每只小鼠的給藥劑量為0.1 mL/10 g。記錄15 min內小鼠的扭體次數(腹部收縮內凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行)，并計算抑制扭體百分率[5]。

扭體百分率=(模型組扭體次數-給藥組扭體次數)/模型組扭體次數×100%[6]

表2 醋制前后白屈菜活性成分對醋酸扭體小鼠模型的影響 (n=10)

阿司匹林組、炮制品白屈菜低劑量組、炮制品白屈菜中劑量組、炮制品白屈菜高劑量組、生品白屈菜低劑量組、生品白屈菜中劑量組、生品白屈菜高劑量組的抑制率分別為：38.13%、4.67%、40.68%、67.99%、1.08%、0.61%、1.33%。

3 討論

由上面表1結果可知，給藥前這8組小鼠的痛域值沒有統計學差異，在小鼠灌胃后的30 min、60 min、120 min后，給藥量為5 mg/kg的白屈菜醋制品以及生品，這兩組小鼠在熱板上的停留時間與空白組小鼠相比，差異無統計意義。與空白組小鼠的痛閾值相比，陽性藥物阿司匹林組的小鼠在給藥后3個時間段的痛閾值均呈現出顯著差異，說明此次陽性藥物的選擇比較成功。

當醋制白屈菜給藥量為5 mg/kg時，在給藥后的3個時間點均沒有表現出明顯的止痛效果，但給藥量達到10 mg/kg以及20 mg/kg時，都表現出了比較顯著的鎮痛效果，而且高劑量組的醋制白屈菜延長小鼠痛閾值的效果更明顯；根據白屈菜生品的3組數據可知，僅有灌胃高劑量白屈菜提取物的小鼠出現了顯著延長痛閾時間的現象，效果與陽性藥物組以及白屈菜炮制品中劑量組相近。

將上述幾組的鎮痛效果由弱到強排序依次為：白屈菜生品低劑量組=白屈菜生品中劑量組=白屈菜炮制品低劑量組<白屈菜生品高劑量組=陽性藥物組<白屈菜炮制品中劑量組<白屈菜炮制品高劑量組。綜上所述，可認為醋制后的白屈菜對熱板法所致的疼痛其鎮痛效果強于白屈菜生品，當給藥量在5～20 mg之間，止痛作用隨劑量增大而增大。

白屈菜提取物的鎮痛作用主要是外周鎮痛作用[8]，由表2可知，醋制后的白屈菜對于中樞性疼痛具有一定的治療作用，當給藥劑量在10～20 mg時，鎮痛效果強于阿司匹林。按照本研究的提取方法，提取的是白屈菜的生物堿類成分，其中原阿片堿與白屈菜堿具有較強的止痛作用，由此推斷白屈菜經醋制后所含有的這兩個成分的含量可能有所提升，因此取醋制后的白屈菜提取物與白屈菜生品提取物各10 mg分別置于25 mL容量瓶中，甲醇溶解后經0.45 μm微孔濾膜濾過后進行含量測定，發現醋制品中原阿片堿和白屈菜堿的含量分別為0.036 8 mg/mL、0.036 1 mg/mL，高于生品中的相應值0.033 5 mg/mL、0.027 7 mg/mL；因此可以認為醋制后的白屈菜具有增強止痛效果的作用。

陽性藥物阿司匹林組與白屈菜低劑量組和白屈菜中劑量組在給藥后的3個不同時間點，其小鼠的痛域時間并沒有顯著差異，高劑量組的白屈菜在給藥后的30 min時出現了最長的痛域時間，將30 min小鼠的痛域時間與另外兩組時間段小鼠的痛域時間進行t檢驗，發現3組之間的痛閾值并沒有顯著性差異，故不能認為給藥后30 min該劑量得到了最佳鎮痛效果。

醋酸扭體試驗是利用化學刺激制造的疼痛模型，其主要用于評價藥物外周性鎮痛效果[9]，該試驗是利用醋酸刺激而引起小鼠腹腔產生炎癥繼而疼痛，因此小鼠會出現扭體反應。產生這種現象的原因可能是腹腔pH值降低而直接刺激傳入神經纖維，是傳入神經和炎癥遞質共同作用的結果[10]。

從本實驗可以看出陽性藥物阿司匹林對抑制小鼠的扭體反應具有顯著的作用，說明本實驗陽性藥物的選擇比較合理；醋制后白屈菜低劑量組、白屈菜生品的3個劑量組與灌胃羧甲基纖維素鈉溶液的模型組小鼠相比，扭體次數無顯著差異，也沒有降低扭體反應的趨勢；而醋制之后的白屈菜給藥量為10 mg/kg與20 mg/kg時，小鼠的扭體次數減少十分明顯，兩者的鎮痛效果與阿司匹林相比較，前者與之相近，后者則強于阿司匹林，由此可知，對于醋酸致痛模型小鼠的鎮痛作用由弱到強依次為：白屈菜生品低、中、高劑量組=醋制白屈菜低劑量組<阿司匹林組=醋制白屈菜中劑量組<醋制白屈菜高劑量組。

4 結語

白屈菜經醋制后，對于外周性疼痛——醋酸致痛模型小鼠的鎮痛效果強于白屈菜生品；醋制白屈菜的外周鎮痛效果與給藥劑量呈正相關，即給藥劑量越大，小鼠扭體次數越少，鎮痛作用越強。對于中樞性熱板鎮痛模型鼠具有明確的鎮痛效果，且強于生品。醋制后的白屈菜鎮痛效果與用藥的劑量呈正相關，用藥的劑量增加，其鎮痛效果越強。