不同豆芽基質(zhì)對(duì)4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤回收率的影響

◎ 張 豪，高 貞

（中檢集團(tuán)中原農(nóng)食產(chǎn)品檢測(cè)河南有限公司，河南 鄭州 450008）

豆芽是一種低脂肪、高營(yíng)養(yǎng)，四季可產(chǎn)，深受人們喜愛(ài)的蔬菜[1-3]。在豆芽中添加4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤，能夠使豆芽生長(zhǎng)加快且產(chǎn)量提高，但由于其會(huì)危害人體健康，國(guó)家禁止添加[4-7]。從2014年至2022年3月底，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理局共抽檢豆芽19 917次，主要檢測(cè)其中的4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤，發(fā)現(xiàn)有2 328次不合格，不合格率高達(dá)11.7%[8]。隨著國(guó)家對(duì)食品安全監(jiān)測(cè)力度的加大，對(duì)食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)的要求也在不斷提高，特別是檢測(cè)結(jié)果的精確性[9]。由于豆芽的種類不同，其本身特性也不相同，同一種前處理方法處理不同的豆芽基質(zhì)，對(duì)4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤的回收率是否有影響，這對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有重要意義[9]。

本文使用綠豆芽、黃豆芽和黑豆芽3種空白基質(zhì)，采用BJS 201703中的前處理方法，對(duì)基質(zhì)樣品進(jìn)行加標(biāo)，通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，LC-MS）考察不同豆芽基質(zhì)對(duì)4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤回收率的影響，為實(shí)際檢測(cè)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)[10]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠豆芽、黃豆芽、黑豆芽，鄭州丹尼斯超市；甲醇、乙腈、甲酸及乙酸銨，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；無(wú)水硫酸鎂、無(wú)水乙酸鈉，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18），天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；4-氯苯氧乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 μg·mL-1，阿爾塔科技有限公司；6-芐基腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 μg·mL-1，阿爾塔科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1290-6470液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，Agilent公司；Mvlti Reax全能振蕩器，Heidolph公司；Centrifuge5804R高速離心機(jī)，Eppendorf公司；ME203電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；N-EVAPTM112氮吹儀，美國(guó)Organomation Associates；SilentCrusher M高速勻漿機(jī)，Heidolph公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確量取4-氯苯氧乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）和6-芐基腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）各1 mL，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混合均勻，得到混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 μg·mL-1）。分別移取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 μg·mL-1）10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL 和 200 μL， 用 甲 醇 定 容 到 1 mL， 得 到10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、150 ng·mL-1和200 ng·mL-1共6個(gè)濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液[10]。

1.3.2 樣品前處理

參照BJS 201703前處理方法[10]，以綠豆芽、黃豆芽和黑豆芽為基質(zhì)，分別做空白加標(biāo)和基質(zhì)加標(biāo)（3個(gè)平行）實(shí)驗(yàn)，其中加標(biāo)濃度分別為20 μg·kg-1、40 μg·kg-1和 80 μg·kg-1，通過(guò) LC-MS 測(cè)定回收率。

1.3.3 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18（2.1 mm×100 mm，3.5 μm）；流動(dòng)相 A：5 mmol·L-1乙酸銨水溶液；流動(dòng)相B：乙腈；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。流動(dòng)相洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件表

（2）質(zhì)譜條件。掃描模式：ESI（-）；采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；霧化氣壓力：35 psi；霧化氣溫度：300 ℃；霧化氣流速：10 L·min-1；鞘氣溫度：320 ℃；鞘氣流速：11 L·min-1；毛細(xì)管電壓：3 000 V。目標(biāo)化合物的SRM條件見(jiàn)表2。

表2 4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤的SRM條件表

2 結(jié)果與分析

2.1 不同豆芽基質(zhì)中4-氯苯氧乙酸鈉回收率的差異

以綠豆芽、黃豆芽和黑豆芽為基質(zhì)，分別向其中加入混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，加標(biāo)濃度分別為20 μg·kg-1、40 μg·kg-1和 80 μg·kg-1，樣品按照 BJS 201703 中的前處理方法處理后，測(cè)得4-氯苯氧乙酸鈉的加標(biāo)回收率結(jié)果如圖1所示。

圖1 不同豆芽基質(zhì)中4-氯苯氧乙酸鈉在不同添加濃度下的回收率圖

由圖1可知，4-氯苯氧乙酸鈉在空白加標(biāo)中的回收率為97.5%～99.6%，在綠豆芽和黑豆芽基質(zhì)中的回收率為78.5%～82.3%，在黃豆芽基質(zhì)中的回收率為65.6%～67.4%。4-氯苯氧乙酸鈉在相同豆芽基質(zhì)中不同添加濃度下的回收率無(wú)顯著性差異；4-氯苯氧乙酸鈉在相同添加濃度下，3種豆芽基質(zhì)的回收率均小于空白加標(biāo)，其中綠豆芽與黑豆芽基質(zhì)回收率無(wú)顯著性差異，綠豆芽與黃豆芽基質(zhì)回收率具有顯著性差異，黑豆芽與黃豆芽基質(zhì)回收率具有顯著性差異[11]。

2.2 不同豆芽基質(zhì)中6-芐基腺嘌呤回收率的差異

以綠豆芽、黃豆芽和黑豆芽為基質(zhì)，分別向其中加入混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，加標(biāo)濃度分別為20 μg·kg-1、40 μg·kg-1和 80 μg·kg-1，樣品按照 BJS 201703 中的前處理方法處理后，測(cè)得6-芐基腺嘌呤的加標(biāo)回收率結(jié)果如圖2所示。

圖2 不同豆芽基質(zhì)中6-芐基腺嘌呤在不同添加濃度下的回收率圖

由圖2可知，6-芐基腺嘌呤在空白加標(biāo)中的回收率為97.5%～99.6%，在綠豆芽和黑豆芽基質(zhì)中的回收率為73.7%～77.2%，在黃豆芽基質(zhì)中的回收率為62.6%～64.3%。6-芐基腺嘌呤在相同豆芽基質(zhì)中不同添加濃度下的回收率無(wú)顯著性差異；6-芐基腺嘌呤在相同添加濃度下，3種豆芽基質(zhì)的回收率均小于空白加標(biāo)，其中綠豆芽與黑豆芽基質(zhì)回收率無(wú)顯著性差異，綠豆芽與黃豆芽基質(zhì)回收率具有顯著性差異，黑豆芽與黃豆芽基質(zhì)回收率具有顯著性差異[11]。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用BJS 201703的前處理方法，在綠豆芽和黑豆芽基質(zhì)中4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤的回收率較好，在黃豆芽基質(zhì)中的回收率偏低[12]。基質(zhì)效應(yīng)對(duì)4-氯苯氧乙酸鈉和6-芐基腺嘌呤回收率有一定的影響，黃豆芽基質(zhì)影響較大，綠豆芽基質(zhì)和黑豆芽基質(zhì)影響較小[13]。為了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，進(jìn)行定量測(cè)定[10]。