CD 4+ T細胞平衡失調與宮頸癌發生、進展及預后的關系研究

毛愛榮，李戰飛，韓玉新，袁曉雁，陳靜

1解放軍聯勤保障部隊第988醫院焦作院區婦科一區，河南 焦作 454150

2南方醫科大學南方醫院婦產科，廣州 510515

宮頸癌是女性中常見的惡性腫瘤，全球發病率僅次于乳腺癌。隨著不良生活習慣的影響，該病發病率逐年提高，且呈年輕化趨勢。目前世界醫學中關于宮頸癌的發病機制尚未明確，但有較多研究認為，初次性生活發生在18歲以前、性伴侶過多、人乳頭瘤病毒感染等均為影響宮頸癌發病的相關因素[1-2]。相關研究報道，患者機體免疫應答平衡失調與女性宮頸癌的發生有著密切聯系[3]。因此，近年來CD4+T淋巴細胞抗腫瘤免疫的作用受到了廣大學者的關注，但CD4+T細胞亞群在宮頸癌患者體內的平衡狀態與該病發生、進展及預后的研究較少。本文進一步分析宮頸癌患者CD4+T細胞平衡失調與宮頸癌發生、進展及預后的關系，旨在為臨床診治宮頸癌提供新思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年2月至2018年2月解放軍聯勤保障部隊第988醫院焦作院區收治的宮頸癌患者的病歷資料。納入標準：①均經手術或穿刺活檢證實為宮頸癌；②年齡40～72歲；③臨床資料無缺失。排除標準：①妊娠期、哺乳期女性；②合并其他系統惡性腫瘤及重要器官嚴重疾病；③接受過手術、化療、激素等治療。按照納入、排除標準，共納入48例宮頸癌患者，設為觀察組，年齡40～72歲，平均（59.67±3.58）歲；國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期[4]：Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期29例；中～低分化20例，高分化28例；有淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移18例；病理類型：鱗狀細胞癌28例，腺癌20例。另選取同期在解放軍聯勤保障部隊第988醫院焦作院區進行健康體檢的52例女性，設為對照組，年齡 39～71歲，平均（59.47±3.22）歲。兩組研究對象年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。取觀察組患者的宮頸癌組織及對照組女性的正常宮頸組織。本研究經醫院倫理委員會批準，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法及評價標準

采用免疫組化法檢測宮頸癌組織標本及正常宮頸組織標本CD4+T細胞亞群表達情況，包括γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、白細胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）。檢測過程嚴格按照說明書進行，對比檢測結果。小鼠抗IFN-γ單克隆抗體及兔抗IL-2、IL-4、IL-6抗體均購自美國Beckman Coulter公司，DNA顯色劑購自北京中杉金橋生物技術公司，抗體免疫組織化學試劑盒購自上海嶸葳達實業有限公司。

CD4+T細胞亞群（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6）陽性判斷標準：腫瘤細胞的細胞質或細胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細胞。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞為0分，＜30%為1分，≥30%為2分。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項評分相乘，≥3分為陽性。陽性率=陽性例數/總例數×100%。

1.3 隨訪

以電話隨訪及門診復診的方式對48例宮頸癌患者進行隨訪，回訪率100%。記錄宮頸癌患者治療后預后情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier法進行生存分析；影響因素分析采用Logistic回歸模型；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表達情況的比較

觀察組患者IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6陽性表達率均高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 兩組患者IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表達情況的比較[ n（%）]

2.2 不同IFN- γ、IL- 2、IL- 4、IL- 6表達情況宮頸癌患者預后的比較

IFN-γ陽性表達患者的平均生存期為（20.14±2.10）個月，短于陰性表達患者的（24.75±2.54）個月（t=26.547，P=0.027）；IL-2陽性表達患者的平均生存期為（10.50±2.12）個月，短于陰性表達患者的（21.56±2.78）個月（t=18.751，P=0.013）；IL-4陽性表達患者的平均生存期為（19.08±1.68）個月，短于陰性表達患者的（23.36±2.25）個月（t=21.160，P=0.025）；IL-6陽性表達患者的平均生存期為（19.74±2.08）個月，短于陰性表達患者的（23.91±2.38）個月（t=18.542，P=0.021）。

2.3 宮頸癌患者預后影響因素的單因素分析

不同年齡、病理類型宮頸癌患者2年生存情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同FIGO分期、分化程度、淋巴結轉移情況及IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6表達情況的宮頸癌患者的2年生存情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表2）

表2 宮頸癌患者預后影響因素的單因素分析

2.4 宮頸癌患者預后影響因素的Logistic回歸分析

經非條件多因素Logistic回歸模型進一步分析得出，FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中～低分化、有淋巴結轉移、IFN-γ陽性、IL-2陽性、IL-4陽性、IL-6陽性均為宮頸癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表3）

表3 宮頸癌患者預后影響因素的Logistic回歸分析

3 討論

宮頸癌具有較高的病死率，患者預后不佳。既往研究表明，中國宮頸癌每年新發病例約13萬，隨著宮頸癌普查普治工作的開展，該病發病率有所下降，但宮頸癌的診治仍不理想[5]。相關流行病學資料指出，宮頸癌的發生與人乳頭瘤病毒感染有著密切聯系，同時還與行為因素、宿主因素的協同作用有關[6]。

隨著對宮頸癌發病機制的不斷深入研究，宮頸癌患者機體免疫系統狀態逐漸受到廣大學者的關注，T淋巴細胞對腫瘤的作用成為了研究熱點。T淋巴細胞是免疫系統中最重要的細胞群之一，其對殺傷、控制腫瘤細胞生長有重要意義。CD4+T細胞于20世紀80年代首次被Suzukawa等[7]學者發現，其主要有兩類細胞，即Th1、Th2細胞，兩類細胞分別產生IFN-γ、IL-2及IL-4、IL-6等因子。

目前，關于Th1與Th2細胞在宮頸癌中的研究較少，本研究采用免疫組化法檢測Th1、Th2細胞中的細胞因子在宮頸癌中的表達情況，并分析其與宮頸癌患者預后的關系。本研究結果顯示，宮頸癌組織中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6陽性表達率均高于正常宮頸組織（P＜0.05），這一研究結果與既往文獻報道結果相似[8]。可見Th細胞的調節因子會影響Th細胞的功能，其相關的細胞因子影響著宮頸癌細胞的損傷及腫瘤的發生、進展，可為宮頸癌患者的治療提供新的靶點[9]。

本研究通過非條件多因素Logistic回歸模型進一步分析得出，FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中～低分化、有淋巴結轉移、IFN-γ陽性、IL-2陽性、IL-4陽性、IL-6陽性均為宮頸癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。分析其原因：FIGO分期反映疾病的嚴重程度，可作為預后判斷的重要參考因素，隨著臨床分期的增高，宮頸癌患者死亡風險增大。有研究指出，有淋巴結轉移的宮頸癌患者3年生存率為55%[10]，本研究中有淋巴結轉移的宮頸癌患者2年生存率僅為33.33%（10/30），考慮與本研究納入樣本量過少有關。健康人體內Th1、Th2細胞亞群內相關因子處于平衡狀態，一亞群阻礙另一亞群的增殖功能，維持機體內正常免疫功能，而宮頸癌患者機體Th1、Th2細胞亞群平衡失調，使機體免疫功能紊亂[11-13]。有研究報道，IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6表達水平的變化為患者Th1/Th2平衡失調的主要原因，且上述因子在食管癌、肝癌患者中均有相似表達，相關因子陽性表達患者預后更差[14-15]。

綜上所述，FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中～低分化、有淋巴結轉移、IFN-γ陽性、IL-2陽性、IL-4陽性、IL-6陽性不利于宮頸癌患者預后。Th1、Th2相關因子表達可作為判斷宮頸癌發生、進展的標志物，對評估患者預后有重要意義。由于本研究納入樣本量較少，且目前類似研究較少，導致本研究存在一定局限性，未來有待進一步擴大樣本量，以便對宮頸癌患者腫瘤組織中CD4+T細胞平衡失調與患者預后的關系進行深入研究。