轉膠蛋白在結腸癌中的表達及與患者臨床特征和預后的關系

王佳琪，夏慶欣，陳瑜，張冰

河南省腫瘤醫院病理科，鄭州 450000

結直腸癌是臨床常見的惡性腫瘤，流行病學調查顯示，中國2015年結直腸癌發病率居全部惡性腫瘤的第三位，病死率居第五位，且發病率呈持續升高趨勢[1]。目前，隨著臨床醫學及分子生物學技術的發展，國內外學者對結腸癌的發生發展機制進行了廣泛研究，多種生物標志物被證實可用于結直腸癌的診斷、病情評估及預后預測，為臨床治療提供了一定參考。人轉膠蛋白（transgelin）于1987年被首次提出，其在不同物種中的表達高度保守，主要表達于細胞骨架結構中，可與凝膠劑進行反應并發揮穩定作用。研究表明，transgelin與肌動蛋白絲束有一定相關性，而肌動蛋白絲束可形成足體，促使組織侵襲性增加[2-3]。目前，已有臨床研究指出，宮頸癌、消化系統惡性腫瘤中可檢測到transgelin蛋白表達的下調，其表達水平與惡性腫瘤的發生發展密切相關[4-5]。目前，已有部分研究針對結腸癌transgelin蛋白的表達情況進行了研究，但其與結腸癌患者臨床特征、預后的關系仍需進一步研究證實。本研究探討transgelin在結腸癌中的表達，并分析其與患者臨床特征和預后的關系，旨在為結腸癌患者的病情和預后評估提供參考，也為分子靶向標志物的深入研究提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年2月河南省腫瘤醫院收治的475例結腸癌患者。納入標準：①均為首次接受治療；②經病理學檢查確診為結腸癌；③臨床資料完整。排除標準：①合并嚴重器質性病變；②合并自身免疫性疾病。依據納入和排除標準，本研究共納入475例結腸癌患者，其中男256例，女219例；年齡45～73歲，中位年齡58歲；腫瘤直徑2～7 cm，平均（3.12±0.85）cm；分化程度：低分化122例，中分化163例，高分化190例；浸潤深度：未累及漿膜222例，累及漿膜253例；有淋巴結轉移178例，無淋巴結轉移297例；Dukes分期：A期142例，B期146例，C期134例，D期53例。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測transgelin蛋白的表達情況

取475例結腸癌患者的結腸癌組織及50例距病灶5 cm以外的癌旁組織。組織標本經4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，厚度4μm，脫蠟水化后加入5%牛血清白蛋白37℃孵育10 min。加入一抗（稀釋濃度為1∶200），4℃孵育過夜，室溫放置10 min后磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗 3次；加入二抗（稀釋濃度為 1∶1000），37 ℃孵育30 min，PBS清洗3次；加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，PBS清洗3次。二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色5 min，鏡檢掌握染色程度，自來水沖洗，蘇木素復染，脫水、透明、封固等，然后在顯微鏡下觀察。

結果判定：transgelin蛋白主要定位于細胞質或細胞膜，細胞質著色或細胞核出現黃染顆粒判定為陽性細胞，采用半定量法進行評定[6]：依據陽性細胞所占比例進行評分，無陽性細胞計0分，陽性細胞所占比例＜10%計1分，陽性細胞所占比例10%～50%計2分，陽性細胞所占比例＞50%計3分；依據染色強度進行評分，無著色計0分，黃色染色計1分，淺棕色染色計2分，棕褐色染色計3分。將染色強度評分與陽性細胞所占比例評分相乘，≤4分判定為陰性表達，＞4分為陽性表達。

1.3 隨訪

采用門診及電話隨訪的方式對所有患者進行隨訪，隨訪時間截至2020年4月，記錄患者的總生存期（overall survival，OS）和無進展生存期（progression-free survival，PFS），OS指明確診斷至全因性死亡的時間，PFS指明確診斷至隨訪復發的時間。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數據進行統計分析，計數資料以例數和率（%）表示，-組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗；結腸癌患者預后的影響因素采用多因素Cox回歸分析；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 transgelin蛋白表達情況的比較

結腸癌組織中transgelin蛋白陽性表達率為42.32%（201/475），低于癌旁組織的88.00%（44/50），差異有統計學意義（χ2=37.934，P＜0.01）。（圖1）

圖1 結腸癌組織中transgelin蛋白陽性表達免疫組化染色圖

2.2 不同臨床特征結腸癌患者transgelin蛋白表達情況的比較

不同年齡、性別、腫瘤大小和分化程度結腸癌患者結腸癌組織中transgelin蛋白陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。浸潤深度累及漿膜、淋巴結轉移、Dukes分期為C～D期結腸癌患者結腸癌組織中transgelin蛋白陽性表達率分別明顯低于浸潤深度未累及漿膜、無淋巴結轉移、Dukes分期為A～B期患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征結腸癌患者transgelin蛋白表達情況的比較（ n=475）

2.3 預后情況的比較

所有患者均獲得隨訪，隨訪時間16～51個月，中位隨訪38個月，transgelin蛋白陽性表達患者的平均 PFS 為46.081個月（95%CI：44.717～47.445），明顯長于transgelin蛋白陰性表達患者的43.050個月（95%CI：41.899～44.200），差異有統計學意義（χ2=33.256，P＜0.01）；transgelin蛋白陽性表達患者的平均OS為47.128個月（95%CI：45.824～48.432），明顯長于transgelin蛋白陰性表達患者的44.241個月（95%CI：43.053～45.428），差異有統計學意義（χ2=18.003，P＜0.01）。（圖2、圖3）

圖2 transgelin蛋白陽性表達（ n=201）和transgelin蛋白陰性表達（ n=274）結腸癌患者的PFS曲線

圖3 transgelin蛋白陽性表達（ n=201）和transgelin蛋白陰性表達（ n=274）結腸癌患者的OS曲線

2.4 結腸癌患者預后影響因素單因素和多因素分析

多因素Cox分析結果顯示，年齡≥60歲、浸潤深度累及漿膜、淋巴結轉移、Dukes分期為C～D期均是結直腸癌患者PFS、OS的獨立危險因素（P＜0.05），transgelin蛋白陽性表達均是結腸癌患者PFS、OS的獨立保護因素（P＜0.05）。（表2、表3）

表2 結腸癌患者PFS影響因素的單因素和多因素分析

表3 結腸癌患者OS影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

transgelin蛋白主要分布于平滑肌組織中，是平滑肌分化的早期分子標志物。多項研究證實，transgelin蛋白在惡性腫瘤中表達水平明顯下調[7-8]；體外研究也表明，transgelin蛋白表達下調有利于細胞足體的形成，可使細胞向惡性細胞方向發展[9]。既往已有研究探討不同惡性腫瘤組織中transgelin蛋白的表達情況，但不同研究、不同惡性腫瘤組織transgelin表達變化存在一定差異，國外開展的全球基因表達譜研究結果表明，transgelin蛋白在前列腺癌、肺癌、結直腸癌組織中表達水平明顯降低[10]，但周靜等[11]采用體外實驗分析結腸癌細胞系transgelin蛋白的表達情況及其與細胞侵襲的關系，結果顯示，transgelin蛋白過表達細胞的增殖能力明顯降低。但解燕川等[12]探討transgelin蛋白在胃癌組織中的表達及意義，證實胃腺癌組織中transgelin蛋白表達水平明顯高于癌旁組織，且其表達水平與患者淋巴結轉移、腫瘤大小密切相關。

本研究采用免疫組化法檢測結腸癌組織及癌旁組織中transgelin蛋白的表達情況，結果顯示，結腸癌組織中transgelin蛋白陽性表達率為42.32%，低于癌旁組織的88.00%，提示transgelin蛋白表達下調可能與結腸癌的發生發展密切相關；此外，本研究中部分患者transgelin蛋白在癌旁組織中呈陰性表達，這可能是因為transgelin基因可能在結腸癌發生時被激活，從而產生了大量的transgelin蛋白，陰性表達可能預示著惡變傾向。本研究結果顯示，浸潤深度累及漿膜、淋巴結轉移、Dukes分期為C～D期結腸癌患者結腸癌組織中transgelin蛋白陽性表達率分別明顯低于浸潤深度未累及漿膜、無淋巴結轉移、Dukes分期為A～B期患者（P＜0.01），提示transgelin蛋白表達水平可能與惡性腫瘤侵襲性密切相關。推測transgelin蛋白與結腸癌的發生及其生物學行為密切相關，這可能是因為transgelin蛋白與肌動蛋白活性相關，transgelin蛋白表達下調可能降低肌動蛋白活性，引起細胞惡性轉化，促進腫瘤的發展。研究表明，transgelin蛋白可通過調節ERK活性調控基質金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP9）的表達，介導上皮-間充質轉化過程，從而影響腫瘤的發生發展[13]。

為探究transgelin蛋白與結腸癌患者預后的關系，本研究分析了不同transgelin蛋白表達情況結腸癌患者的預后，結果顯示，transgelin蛋白陽性表達組患者PFS、OS均明顯長于transgelin蛋白陰性表達組患者。在校正Dukes分期、淋巴結轉移等因素后，transgelin蛋白陽性是結腸癌患者預后生存的獨立保護因素。transgelin蛋白陰性患者預后較差可能與以下兩方面原因有關：①transgelin蛋白陰性表達患者更易發生轉移，預后不佳。②transgelin蛋白表達與部分化療藥物的耐藥性密切相關，其表達水平可能通過影響治療效果來影響患者預后[14-15]。

綜上所述，transgelin蛋白表達與結腸癌患者臨床特征、預后密切相關，臨床可通過檢測其表達水平來評估患者的病情及預后，為臨床治療提供一定參考。但本研究結果仍需進一步驗證，且隨訪時間相對較短，未來仍有待進一步延長隨訪時間進行探討。