FQ-PCR 聯合ELISA 在乙型肝炎檢測中的應用價值

林爽

乙型肝炎主要表現為肝臟炎性病變,屬傳染性病癥,是多器官傳染性疾病［1］。該病發病與季節無關,常為散發,目前是世界性流行類疾病［2］。臨床主要表現為肝區疼痛、上腹部不適、食欲減退、惡心等。隨著乙型肝炎逐步發展,部分患者會進展為肝硬化、原發性肝細胞癌、肝衰竭,嚴重影響患者生活質量和生命安全。研究顯示,把握檢測乙型肝炎最佳時機,掌握肝炎治療進展、病毒復制情況對于該病臨床治療具有重要作用［3］。傳統檢測多采用ELISA 法診斷乙型肝炎病毒(HBV)感染,通過血清檢測評價特異性抗體、抗原在血清內狀況,來判斷機體感染情況。隨著醫療技術持續發展以及生物學技術不斷進步,FQ-PCR 技術在臨床疾病診斷中得到廣泛應用,尤其在乙型肝炎診斷中,可有效顯示HBV 活性和復制性情況,為臨床治療和預后評價做出科學指導,但由于其無法準確判斷乙型肝炎病毒的脫氧核糖核酸(HBV-DNA)感染狀態,單獨應用存在一定缺陷［4］。基于此,本次研究本院對收治的部分乙型肝炎患者采用FQ-PCR 聯合ELISA 檢測,結果顯示,與單一檢測手段相比,聯合檢測準確率更高。具體情況報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在本院2020 年4 月～2021 年3 月收治的乙型肝炎患者中選取180 例納入本次研究,根據檢測方法不同分為對照1 組(59 例)、對照2 組(59 例)及觀察組(62 例)。觀察組,男39 例,女23 例；年齡20～80 歲,平均年齡(49.57±10.24)歲。對照1 組,男31 例,女28 例；年齡21～79 歲,平均年齡(49.04±10.46)歲。對照2 組,男32 例,女27 例；年齡20～81 歲,平均年齡(50.21±10.35)歲。三組患者的一般資料比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本院倫理委員會審核批準了本次研究。納入標準：180 例納入者均知曉本次研究,并簽署了同意書；均符合乙型肝炎相關診斷標準。排除標準：精神疾病者；惡性腫瘤者；血液系統存在疾病者；患相關性代謝系統疾病。

1.2 方法 清晨取患者空腹靜脈血,經3000 r/min 離心10 min 后,對血清實施分離,置于4 ℃條件下保存備用。對照1 組行FQ-PCR 檢測,對照2 組行ELISA檢測,觀察組行FQ-PCR+ELISA 檢測。

ELISA 檢測：檢測HBV 血清標注物,全自動酶標儀選擇上海科華生物工程股份有限公司(型號為ST-360),ELISA 試劑源自上海科化生物股份有限公司,所需試劑均源于同一生產公司,確保無菌操作,對乙型肝炎各項指標實施檢測,包括乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)、乙型肝炎E 抗體(HBeAb)、乙型肝炎E 抗原(HBeAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。

FQ-PCR 檢測：應用美國ABI 公司的熒光定量分析儀(型號為ABI7500Fast)展開檢測,FQ-PCR 診斷試劑盒源自中山大學達安基金股份有限公司。對HBVDNA 實施定量檢測,以試劑操作說明書為依據執行整體操作。HBV-DNA>10×102IU/ml,即為陽性。

1.3 觀察指標 比較三組診斷結果。

1.4 統計學方法 采用SPSS21.0 統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差()表示,采用t 檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

觀察組診斷乙型肝炎的準確率為96.77%,對照1 組診斷乙型肝炎的準確率為84.75%,對照2 組診斷乙型肝炎的準確率為81.36%。觀察組診斷乙型肝炎的準確率明顯高于對照1 組與對照2 組,差異具有統計學意義(P<0.05)。對照1 組與對照2 組診斷乙型肝炎的準確率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組診斷乙型肝炎的準確率比較［n(%)］

3 討論

在臨床上,乙型肝炎屬于病毒性肝炎,傳染性較強,主要病毒為HBV。在我國約9300 萬人攜帶HBV,HBV 長期在機體內潛伏,部分攜帶者因體內HBV 被激活而致病［5］。該癥的特點在于傳播途徑廣、傳染率高、病情遷延不愈、起病緩慢等,多數患者早期癥狀均不明顯,發現時疾病已發展至晚期,需接受持續治療,患者身體痛苦增加,經濟負擔加重。早期接受及時、高效的診斷,并施以有效、正確的治療,可避免病情持續惡化,能有效延長患者的生存時間［6］。但因治療時大量應用抗病毒藥物,顯著增加了HBV 變異株的數量,造成傳統檢測HBV 血清學的難度增加,檢測可重復性、準確性、敏感性缺陷較大［7-10］。

ELISA 為HBV 感染傳統檢測手段,其優勢在于價格低、檢測時間短、特異度與靈敏度較高、方法簡單等［11-13］,通過對血清內特異性抗原、抗體實施有效檢測來判斷是否感染HBV,也可反映HBV 免疫應答狀態。但檢測結果易受到多種因素影響,如標本保存、血清分離、加樣有無氣泡、濺出、孵育時間、方式、洗板情況等。該項檢測還需應用特殊設備,且難以對病毒感染程度、數量實施定量分析,且在急診初篩、門診、無償獻血中并不適用,難以準確反映HBV 傳染風險、感染復制情況。

FQ-PCR 法為DNA 探針雜交、PCR 技術的融合,可經檢測閉管、熒光技術直接對PCR 過程中熒光信號的變化實施探測,能對HBV 感染程度實施定性、定量分析,在選擇治療方案、判斷預后效果中具有重要指導意義。FQ-PCR 可以將HBV-DNA 水平定量、可靠、真實、準確的反映出來。該手段可直接檢測HBV-DNA 的水平,將HBV 傳染性、復制水平、存活、活動性直觀體現出來。但HBV-DNA 難以判斷其感染狀態。所以,臨床部分學者提出實施FQ-PCR 聯合ELISA 檢測。

許嬌［9］研究顯示,與單一檢測手段相比,FQPCR 聯合ELISA 檢測的價值更高。本次研究結果顯示：觀察組診斷乙型肝炎的準確率為96.77%,對照1 組診斷乙型肝炎的準確率為84.75%,對照2 組診斷乙型肝炎的準確率為81.36%。觀察組診斷乙型肝炎的準確率明顯高于對照1 組與對照2 組,差異具有統計學意義(P<0.05)。對照1 組與對照2 組診斷乙型肝炎的準確率比較,差異無統計學意義(P>0.05)。提示相較于單一檢測,聯合檢測的準確性更高,與相關研究［10］結果基本相符,進一步證實了本文可信度。

綜上所述,實施FQ-PCR 聯合ELISA 檢測,在早期診斷乙型肝炎中作用顯著,可使診斷準確率提高,值得應用。