雞蛋、雞肉及奶粉中22種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測(cè)定

常利民，張 洋，汪春明，施鵬斐，王姝葦

（1.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院 綜合檢測(cè)中心，北京100020；2.中檢科（北京）測(cè)試技術(shù)有限公司，北京100020）

隨著人民生活水平的提高，雞蛋、雞肉、奶粉成為百姓生活中常見的食品，但農(nóng)業(yè)作業(yè)過程中農(nóng)藥的使用會(huì)導(dǎo)致養(yǎng)殖和加工環(huán)境以及環(huán)境介質(zhì)的污染，從而引起雞蛋、雞肉、奶粉中農(nóng)藥污染物的殘留，如有機(jī)氯農(nóng)藥殘留物、多氯聯(lián)苯等。部分農(nóng)藥會(huì)隨著食物鏈的傳遞，在人體內(nèi)富集，長(zhǎng)期累積會(huì)使機(jī)體增加致癌、致畸和致突變的風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。為了更有效地規(guī)范禽肉類、蛋類等脂肪類樣品中農(nóng)藥殘留限量，中國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[3]中明文規(guī)定了禽肉類、蛋類中農(nóng)藥殘留的限量。禽肉類、蛋類樣品中脂肪含量較高，增加了準(zhǔn)確檢測(cè)農(nóng)藥殘留的難度。脂肪和親脂性干擾物會(huì)在色譜柱和氣相色譜儀中積聚，從而降低儀器靈敏度、縮短了色譜柱及儀器的使用壽命[4-6]，對(duì)結(jié)果判定造成一定的干擾。目前檢測(cè)含脂肪及親脂性干擾物的樣品中農(nóng)藥殘留的前處理方法有凝膠滲透色譜法[7-8]、液液萃取冷凍脫脂法[9-10]、Qu EChERS法[4]、固相萃取法[6、11]和硫酸磺化法[12]等。

凝膠滲透色譜法設(shè)備昂貴、操作過程復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)且試劑用量大，不適合大批量樣品的快速測(cè)定，不適合推廣；液液萃取冷凍脫脂法耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境溫度要求也較高，夏天操作效果不太理想；Qu EChERS法雖然操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短，但除脂效果有限，對(duì)氣相色譜儀干擾明顯；硫酸磺化法除脂效果明顯、耗時(shí)短，但是對(duì)于含不飽和鍵的目標(biāo)化合物，硫酸的氧化作用會(huì)使其變性[15]；而固相萃取法作為一種成熟有效的前處理方法，已被廣泛運(yùn)用在水產(chǎn)品、植物油、牛肉、蔬菜等樣品的前處理過程中[6、9-11、13、25-26]。

為了在有效除去脂肪及親脂性干擾物的同時(shí)提高目標(biāo)化合物的回收率，作者選擇增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品Captiva EMR-Lipid固相萃取柱，對(duì)比了傳統(tǒng)的磺化法，以驗(yàn)證其在雞蛋、雞肉和奶粉中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留分析中的可行性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)所用儀器見表1，試劑見表2。

表1 儀器Table 1 Instruments

表2 試劑Table 2 Reagents

1.2 樣品前處理

1.2.1 磺化法 稱取2 g樣品，加5 mL超純水劇烈渦旋30 s，用20 mL乙腈振蕩提取20 min后加1.5 g氯化鈉渦旋1 min，5 000 r/min離心5 min；取10 mL上清液于氮吹管中，40℃氮吹至近干，3 mL正己烷復(fù)溶兩次收集于15 mL離心管，加入5 mL硫酸，緩慢搖晃，靜置30 min待分層（如有乳化現(xiàn)象，可超聲或冷凍使其完全分層），4 000 r/min離心3 min，取正己烷層于15 mL離心管，加入3 mL 10%硫酸鈉溶液，渦旋1 min，4 000 r/min離心3 min，取正己烷層于氮吹管，40℃氮吹至近干，1 mL正己烷復(fù)溶，待氣相色譜儀檢測(cè)。

1.2.2 Captiva EMR-Lipid固相萃取法 稱取2 g樣品，加5 mL超純水劇烈渦旋1 min，用20 mL乙腈振蕩提取20 min，加1.5 g氯化鈉渦旋1 min，5 000 r/min離心5 min；取10 mL上清液于氮吹管中，40℃氮吹至近4 mL，加入1 mL超純水渦旋混勻，全部轉(zhuǎn)移到Captiva EMR-Lipid固相萃取柱中（5 mL乙腈、5 mL超純水活化），再用2 mL乙腈-水（體積比4∶1）[6]溶液洗脫Captiva EMR-Lipid固相萃取柱2次，收集全部流出液于內(nèi)含1 g氯化鈉的15 mL離心管中，流至近干后用吸耳球吹干；流出液（大約8.5 mL）渦旋30 s，靜置分層，取上清液于40℃下氮吹至近干，1 mL正己烷復(fù)溶，待氣相色譜儀檢測(cè)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 分別準(zhǔn)確稱取不低于10 mg標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用丙酮溶解至刻度線，得到適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)混合溶液 準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，得到10 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，之后再逐級(jí)稀釋為1.0 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 準(zhǔn)確吸取適量1.0 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，用正己烷逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L的 系 列 標(biāo) 準(zhǔn) 工作溶液。

1.4 檢測(cè)條件

氣相色譜條件：進(jìn)樣口溫度250℃；進(jìn)樣量1 μL；載氣為氮?dú)猓兌取?9.999%），流量1 mL/min。升溫程序：初始溫度50℃，以15℃/min升至215℃，保持1 min，再以2℃/min升至220℃，保持1 min，然后以5℃/min升至250℃，保持7 min，最后以40℃/min升至260℃，保持2 min。

1.5 添加回收試驗(yàn)

根據(jù)GB 2763—2019，禽類、蛋類中有機(jī)氯農(nóng)藥的最大殘留限量基本在0.05 mg/kg以上，其中硫丹、氯丹、DDT、六六六是各分量之和的限量。為了更好地滿足最大殘留限量需求，本研究向雞蛋、雞肉、奶粉中準(zhǔn)確添加標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，使其添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.01、0.02、0.1 mg/kg，每個(gè)水平重復(fù)6次。按1.2.2和1.4節(jié)進(jìn)行前處理和儀器測(cè)定，計(jì)算平均回收率（REC）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣相色譜條件的建立

由于有機(jī)氯類農(nóng)藥屬弱極性化合物，因此在色譜分析過程中一般選用弱極性的HP-5色譜柱，采用HP-5色譜柱分析后的色譜圖見圖1。α-硫丹和順式氯丹、p，p’-DDE和狄氏劑、p，p’-DDD和o，p’-DDT、硫丹硫酸鹽和p，p’-DDT之間的分離度并不理想。選擇中等極性的DB-1701色譜柱分析后的色譜圖見圖2，22種有機(jī)氯化合物的分離度和峰形比HP-5色譜柱更為理想。因此選擇DB-1701色譜柱進(jìn)行測(cè)定，線性方程和相關(guān)系數(shù)見表3。

表3 線性方程和相關(guān)系數(shù)Table 3 Linear equationgs and correlation coefficients

圖1 22種有機(jī)氯農(nóng)藥色譜圖（HP-5色譜柱）Fig.1 Chromatography of 22 organochlorine pesticides（HP-5 Capillary column）

圖2 22種有機(jī)氯農(nóng)藥色譜圖（DB-1701色譜柱）Fig.2 Chromatography of 22 organochlorine pesticides（DB-1701 Capillary column）

2.2 前處理方法的選擇

圖3為空白雞肉樣品經(jīng)硫酸磺化和Captiva EMR-Lipid固相萃取柱凈化的色譜圖對(duì)比。圖4~5分別為樣品加標(biāo)后經(jīng)硫酸磺化和Captiva EMRLipid固相萃取柱凈化的色譜圖。向雞肉中準(zhǔn)確添加0.05 mg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)6次，分別進(jìn)行前處理，得出的平均回收率（REC）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見表4。

圖3 硫酸磺化凈化和Captiva EMR-Lipid固相萃取凈化Fig.3 Sulfonation of concentrated sulfuricacid and Captiva EMR-Lipid solid phase extraction

由圖4~5和表4可知，硫酸磺化凈化效果比Captiva EMR-Lipid固相萃取柱好，但會(huì)使五氯苯胺、狄氏劑、異狄氏劑回收率為0，且艾氏劑、異艾氏劑、環(huán)氧七氯、α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸鹽回收率不足60%，未到達(dá)GB27404—2008要求，而采用Captiva EMR-Lipid固相萃取柱凈化，22種有機(jī)氯農(nóng)藥回收率均在60%~110%，符合要求。因此在測(cè)定含脂肪樣品中的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留時(shí)，推薦選用Captiva EMR-Lipid固相萃取柱作為凈化材料，3種基質(zhì)添加回收的REC和RSD見表5。

表4 雞肉加標(biāo)回收率、精密度（n=6，濃硫酸磺化和Captiva EMR-Lipid固相萃取凈化）Table 4 Recovery and precision of 22 organochlorine pesticides residues in chicken （n=6，Sulfonation of concentrated sulfuric acid and Captiva EMR-Lipid solid phase extraction）

表5 雞蛋、雞肉、奶粉加標(biāo)回收率、精密度（n=6）Table 5 Recovery and precision of organochlorine pesticides residues in egg，chicken and milk powder（n=6）

圖4 硫酸磺化凈化色譜圖Fig.4 Sulfonation purification of concentrated sulfuricacid

圖5 Captiva EMR-Lipid固相萃取凈化色譜圖Fig.5 Captiva EMR-Lipid solid phase extraction purification

續(xù)表5

2.3 方法的線性范圍及定量限

在0.005～0.2 mg/L范圍內(nèi)，22種有機(jī)氯農(nóng)藥的質(zhì)量濃度與其對(duì)應(yīng)的峰面積之間線性關(guān)系良好，R2均大于0.995。以信噪比等于或大于10作為方法的定量限（LOQ），本實(shí)驗(yàn)LOQ為0.01 mg/kg。

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

使用本方法對(duì)企業(yè)送檢和市場(chǎng)隨機(jī)抽檢的15批雞蛋、雞肉、奶粉樣品進(jìn)行有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)，結(jié)果均未檢出本方法所涉及的農(nóng)藥。

3 結(jié)語

Captiva EMR-Lipid固相萃取柱具有高效去除脂質(zhì)和親脂性基質(zhì)的特性，不造成分析物意外損失。通過對(duì)比Captiva EMR-Lipid固相萃取柱和硫酸磺化的前處理方法，結(jié)合氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器，建立了在雞肉、奶粉、雞蛋中同時(shí)測(cè)定22種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。結(jié)果表明，Captiva EMR-Lipid固相萃取柱在滿足加標(biāo)回收率要求的前提下，能夠有效去除動(dòng)物脂肪及親脂性干擾物。運(yùn)用本方法對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢測(cè)，并未檢出本方法所涉及的農(nóng)藥殘留。