吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯測定方法的改進

顏 聰，孫海建，薛建強，潘朝暉

(江蘇龍燈化學有限公司，江蘇昆山 215300)

吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)，化學名稱為N-[2- [[1-(4-氯苯基)吡唑-3-基]氧甲基]苯基]-N-甲氧基氨基甲酸甲酯，是德國巴斯夫公司于1993年發現的一種兼具吡唑結構的甲氧丙烯酸甲酯類線粒體呼吸抑制劑，通過抑制病原菌線粒體呼吸作用，最終導致細胞死亡，具有保護、冶療、葉片滲透傳導作用，主要用于防冶多種作物真菌病害[1]。硫酸二甲酯是生產吡唑醚菌酯的一個重要原料，為無色或微黃色，略有蔥頭氣味的油狀易燃性液體。硫酸二甲酯高毒，具有強烈的刺激性和腐蝕性，對眼睛、上呼吸道有強烈刺激作用，對皮膚有強腐蝕作用。

歐盟規定吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯質量分數≤1 μg/g，國內規定硫酸二甲酯質量分數≤3 μg/g，因此需要對硫酸二甲酯量進行控制。HG/T 5235—2017[2]中有關于硫酸二甲酯的測定方法，但靈敏度低，吡唑醚菌酯原藥試樣濃度為1 g/mL 才能滿足定量要求，對儀器和色譜柱影響大，且該方法選用的三氯甲烷溶劑屬于易制毒管制類試劑，不便于實際生產使用。基于此，本文采用氣相色譜-質譜聯用儀按照農藥產品質量分析方法確認指南[3]要求開展了吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯含量的測定方法驗證。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS-QP2010NC PLUS 氣相色譜-三重四級桿質譜聯用儀，島津(中國)有限公司；XS 205 型分析天平，梅特勒-托利多國際貿易(上海)有限公司；SK5200型超聲波清洗器；有機過濾器(孔徑0.22 μm)；硫酸二甲酯標樣(質量分數≥98.0%，上海安譜實驗科技股份有限公司)；吡唑醚菌酯原藥(山東康喬生物科技有限公司)；乙酸乙酯，色譜純(美國天地有限公司)。

1.2 色譜條件

色譜條件：色譜柱為Agilent DB-5MS (30 m ×0.32 mm，0.25 μm)；柱溫為程序升溫，起始溫度50 ℃，保持8 min，以50 ℃/min 的速率升至250 ℃后保持13 min；進樣模式為分流比10；載氣為氮氣，純度≥99.999%；流速為1.0 mL/min；進樣口溫度為150 ℃；進樣體積為1.0 μL；

質譜條件：電離方式為電子轟擊源(EI)；電離能量1 500 eV；接口溫度為250 ℃；離子源(EI)溫度為230 ℃；掃描模式：定性分析時采用全掃描方式，質量數范圍為 30～500，硫酸二甲酯碎片離子m/z=66、95、125；定量時采用提取離子方式，硫酸二甲酯提取離子m/z=95；溶劑為乙酸乙酯；硫酸二甲酯的保留時間約3.7 min。

1.3 溶液配制

1.3.1 標準溶液的制備

稱取約10 mg 硫酸二甲酯標樣(精確至0.2 mg)于50 mL 容量瓶中，加入適量乙酸乙酯，超聲溶解，冷卻至室溫定容，移取20 μL 于50 mL 容量瓶中，乙酸乙酯定容，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱取約2 000 mg 試樣(精確至0.2 mg)于50 mL容量瓶中，加入適量乙酸乙酯，超聲溶解，冷卻至室溫后定容，搖勻備用。

1.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2 針硫酸二甲酯標樣溶液的響應值相對變化＜10%后，按下列順序進樣：標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液。根據外標法計算雜質的含量。硫酸二甲酯標樣的提取離子色譜圖見圖1，吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯(加標測定)的提取離子色譜圖見圖2。

圖1 硫酸二甲酯標樣離子色譜圖

圖2 吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯離子色譜圖

1.5 計算

對2 次試樣溶液及2 次標樣溶液中硫酸二甲酯的定量峰面積[提取離子(m/z)=95]進行平均，試樣中硫酸二甲酯的質量分數ω(μg/g)按下式計算：

式中：A1為標樣中硫酸二甲酯的峰面積；A2為試樣中硫酸二甲酯的峰面積；m1為硫酸二甲酯標樣的質量(mg)；m2為試樣的質量(mg)；p為硫酸二甲酯標樣的純度(%)；10 000 為%轉換為μg/g。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的設定

影響氣相色譜方法開發的主要參數為：色譜柱固定相、色譜柱規格、進樣口溫度、色譜柱溫度、檢測器溫度等，其他參數可采用氣相色譜分析的典型情況確定，如0.32 mm 內徑的色譜柱柱流速約為1 mL/min 等。下面將從色譜柱選擇、儀器參數設定兩方面詳細講述。

2.1.1 色譜柱的選擇

根據相似相溶原理選擇固定相，即分離非極性化合物時應選擇非極性固定液，分離極性化合物時應選擇極性固定液。相同條件下極性越大的固定相色譜柱壽命越短，故在能夠達到分離要求時，選擇極性弱的固定相色譜柱。硫酸二甲酯分子極性弱，根據以上原理，應選擇非極性或弱極性的色譜柱，本文選擇極性弱的Agilent DB-5MS。

2.1.2 儀器參數的設定

GCMS 初始色譜條件儀器參數的設定主要包括：進樣口溫度、離子源溫度、柱流速、分流比、色譜柱溫度及定量和定性質荷比。進樣口溫度主要由試樣的沸點范圍決定，還要考慮色譜柱的使用溫度。進樣口溫度高一些有利，一般要接近試樣中沸點最高的組分的沸點，但要低于易分解組分的分解溫度。硫酸二甲酯在188 ℃進行分解，因此進樣口溫度選擇150 ℃。

根據GCMS 條件下硫酸二甲酯標準品的碎片離子選擇合適的定性及定量質荷比。

2.2 方法驗證

2.2.1 分析方法的線性關系

配制5 個不同質量濃度的硫酸二甲酯標準溶液，按上述色譜條件進行測定，見表1，以質量濃度(μg/mL)為自變量(x)，提取離子模式下，硫酸二甲酯m/z=95 時的相對豐度作為因變量(y)進行回歸分析，結果表明硫酸二甲酯質量濃度為0.02～0.60 μg/mL，其相對豐度與質量濃度之間的線性回歸方程式為y=27 880x-3.154，相關系數為0.999 9。

表1 分析方法的線性關系

2.2.2 分析方法的精密度

分別準確稱取7 份吡唑醚菌酯原藥2 g，分別加入12.0 μg/mL 的硫酸二甲酯標準溶液0.4 mL，定容后測定，見表2。可見，測得被測目標的相對標準偏差和變異系數分別為2.38%和9.33%。

表2 分析方法的精密度

2.2.3 分析方法的準確度

分別稱取3 份吡唑醚菌酯原藥2 g，分別加入12.0 μg/mL 的硫酸二甲酯標準溶液0.3、0.4、0.5 mL，再按1.3 節處理后上機進行分析，每個試樣重復進樣2 次，測得各目標被測物回收率為95.6%～106.2%，平均回收率為101.3% (表3)。

表3 分析方法的準確度

2.2.4 分析方法的檢出限及定量限

本方法中硫酸二甲酯定量限為0.15 μg/g，滿足國內要求≤3 μg/g 和歐盟要求≤1 μg/g。

硫酸二甲酯的定量限提取離子色譜圖見圖3。

圖3 硫酸二甲酯定量限的提取離子色譜圖

3 結 論

本文采用氣相色譜-三重四級桿串聯質譜儀建立了測定吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯的定性定量分析方法。該方法對HG/T 5235—2017 推薦方法的改進，采用Agilent DB-5MS 色譜柱，選用非易制毒管制類、對試樣溶解性好的乙酸乙酯作為溶劑。相對于HG/T 5235—2017，該方法使所使用的吡唑醚菌酯原藥試樣濃度減少至0.04 g/mL，檢出限降低至0.05 μg/g，靈敏度提高200 倍以上，且目標物在測試濃度范圍內線性關系良好，非常適于生產實際中簡便快捷地測定吡唑醚菌酯原藥中硫酸二甲酯含量。